ICG-OSu (ICG NHS ester)

别名: ICG-OSu; 1622335-40-3; ICG-NHS; ICG-NHS ester; ICG NHS ester; 吲哚菁绿-琥珀酰亚胺酯;吲哚菁绿-活性酯;吲哚菁绿-活性酯;吲哚菁绿-琥珀酰亚胺酯;ICG-NHS
目录号: V67124 纯度: ≥98%
ICG-OSu(ICG NHS 酯)是一种具有胺反应活性的近红外荧光团,广泛用于体内成像探针的设计。
ICG-OSu (ICG NHS ester) CAS号: 1622335-40-3
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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产品描述
ICG-OSu(ICG NHS 酯)是一种具有胺反应活性的近红外荧光团,广泛用于体内成像探针的设计。
生物活性&实验参考方法
靶点
Near-infrared fluorescent dye
体外研究 (In Vitro)
操作流程
一、蛋白样品预处理
1) 为优化标记效率,建议将待标记蛋白(如抗体)浓度配制为 2 mg/mL。
2) 确保蛋白溶液 pH 值为 8.5±0.5。若 pH 低于 8.0,可使用 1 M 碳酸氢钠溶液进行调整。
3) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL,标记效率将显著下降。推荐将最终蛋白浓度控制在 2–10 mg/mL 范围内,以实现最佳标记效果。
4) 蛋白溶液应置于不含伯胺(如 Tris 或甘氨酸)且不含铵离子的缓冲体系中,以免干扰标记反应。

二、染料工作液配制(以 ICG-OSu 为例)
向 ICG-OSu 瓶中加入无水 DMSO,配制成 10 mM 储备液,并通过移液或涡旋使其充分溶解混匀。

三、染料用量计算
ICG-OSu 的使用量取决于待标记蛋白的量,建议染料与蛋白的摩尔比控制在 10:1 左右。
示例:
假设需标记 500 μL 浓度为 2 mg/mL 的 IgG(分子量 150,000),并将 1 mg ICG-OSu 溶解于 100 μL DMSO 中,则所需 ICG-OSu 体积计算如下:
1) IgG 的微摩尔数 = 浓度 (mg/mL) × 体积 (mL) / 分子量 (mg/mmol)
= 2 × 0.5 / 150,000 = 6.7×10⁻⁶ mmol
2) ICG-OSu 所需微摩尔数 = IgG 微摩尔数 × 10
= 6.7×10⁻⁶ × 10 = 6.7×10⁻⁵ mmol
3) ICG-OSu 体积 (μL) = ICG-OSu 微摩尔数 × 分子量 (mg/mmol) / 浓度 (mg/μL)
= 6.7×10⁻⁵ × 753.88 / 0.01 = 5.05 μL

四、标记反应步骤
1) 将适量新鲜配制的 10 mg/mL ICG-OSu 缓慢加入 0.5 mL 蛋白样品中,轻柔混匀后短暂离心,使液体集中于管底。避免剧烈振荡,以防蛋白变性。
2) 将反应管置于避光条件下,室温孵育 60 分钟,期间每隔 10–15 分钟轻柔颠倒混匀一次。

五、偶联产物纯化
以下为使用 Sephadex G-25 柱纯化染料-蛋白偶联物的示例流程:
1) 按说明书预处理 Sephadex G-25 层析柱。
2) 将反应混合液上样至柱床顶部。
3) 待样品液面进入柱床后,立即加入 PBS(pH 7.2–7.4)进行洗脱。
4) 继续使用 PBS(pH 7.2–7.4)冲洗层析柱,收集含目标偶联物的洗脱组分,合并后备用。
体内研究 (In Vivo)
文献未对 ICG-OSu 本身进行独立的体内活性实验。所有体内成像和生物分布研究均使用最终缀合的探针TMTP1-PEG4-ICG或游离ICG染料作为对照进行[1]。
酶活实验
TMTP1的环状结构(cTMTP1)设计与其先前研究保持一致。我们设计的荧光探针如下:将配备PEG4连接子的肿瘤靶向肽TMTP1与ICG衍生物ICG-OSu共价缀合,如图1a所示。采用固体载体2-氯三苯甲基氯来合成固相多肽。首先,按照预设序列合成氨基酸,将其与带有-NH2末端的PEG4连接,然后从树脂上切下。随后用MeOH/I2溶液进行氧化,使多肽序列通过二硫键环化。经过纯化和冻干后,将样品与等摩尔量的溶解于DMF中的ICG-OSu混合,并加入两倍体积的DIEA。通过LC-MS确认反应是否完全。反应完成后,直接对反应液进行分离纯化,然后冻干并包装。通过HPLC分析了TMTP1-PEG4-ICG的化学纯度,并进一步用LC-MS对化合物进行了评价。使用紫外-可见分光光度计测量了其光学吸收光谱,并与ICG进行了比较。[1]
细胞实验
文献中未描述针对 ICG-OSu 的特定细胞实验。描述的细胞结合实验用于比较最终探针TMTP1-PEG4-ICG与游离ICG的靶向能力。
对于探针评估,将细胞(4T1、SiHa、HeLa、S12、HaCaT)以每孔1x10^5的密度接种于6孔板中,培养至约80%汇合。用冷PBS洗涤后,将细胞与1 µM的TMTP1-PEG4-ICG或游离ICG(作为对照)在冰上孵育1小时。然后洗涤细胞,收集并通过流式细胞术进行分析。对于阻断研究,在添加TMTP1-PEG4-ICG探针之前,用10 µM cTMTP1肽预处理细胞30分钟[1]。
动物实验
未描述单独使用ICG-OSu的动物实验方案。所描述的实验方案用于评估最终探针TMTP1-PEG4-ICG或游离ICG对照。
在正常小鼠中生物分布的研究中,通过尾静脉向BALB/c小鼠静脉注射100 µL 25 µM TMTP1-PEG4-ICG,并使用IVIS系统进行48小时成像[1]。
在肿瘤靶向研究中,向荷4T1-luc或HeLa-luc肿瘤的小鼠(BALB/c或BALB/c nu)静脉注射100 µL 25 µM TMTP1-PEG4-ICG或等量的游离ICG。在阻断研究中,在探针给药前,小鼠预先注射100 µL 100 µM cTMTP1肽。对小鼠进行 48 小时的成像,并在指定的时间点切除器官进行离体成像 [1]。
参考文献

[1]. A Novel Near-Infrared Fluorescent Probe TMTP1-PEG4-ICG for in Vivo Tumor Imaging. Bioconjug Chem. 2018;29(12):4119-4126.

其他信息
ICG-OSu,即吲哚菁绿N-羟基琥珀酰亚胺酯,是近红外染料吲哚菁绿(ICG)的胺反应性衍生物[1]。
它广泛用作构建模块,通过其反应性NHS酯基团与靶向配体(例如肽、抗体)偶联,用于设计体内成像探针[1]。
在本研究中,ICG-OSu与肿瘤靶向肽TMTP1(通过PEG4连接子)偶联,合成分子成像探针TMTP1-PEG4-ICG,旨在提高其肿瘤特异性,使其优于游离ICG[1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C49H53N3O7S
分子量
828.026
精确质量
827.36
CAS号
1622335-40-3
PubChem CID
138376165
外观&性状
Dark purple to black solid powder
LogP
8.9
tPSA
136
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
60
分子复杂度/Complexity
1820
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S(CCCCN1C2C=CC3=CC=CC=C3C=2C(C)(C)/C/1=C/C=C/C=C/C=C/C1C(C)(C)C2C3=CC=CC=C3C=CC=2[N+]=1CCCCCC(=O)ON1C(CCC1=O)=O)(=O)(=O)[O-]
InChi Key
KDJUNNVUQBKNAY-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C49H53N3O7S/c1-48(2)41(50(39-28-26-35-19-12-14-21-37(35)46(39)48)32-16-8-11-25-45(55)59-52-43(53)30-31-44(52)54)23-9-6-5-7-10-24-42-49(3,4)47-38-22-15-13-20-36(38)27-29-40(47)51(42)33-17-18-34-60(56,57)58/h5-7,9-10,12-15,19-24,26-29H,8,11,16-18,25,30-34H2,1-4H3
化学名
4-[(2Z)-2-[(2E,4E,6E)-7-[3-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-6-oxohexyl]-1,1-dimethylbenzo[e]indol-3-ium-2-yl]hepta-2,4,6-trienylidene]-1,1-dimethylbenzo[e]indol-3-yl]butane-1-sulfonate
别名
ICG-OSu; 1622335-40-3; ICG-NHS; ICG-NHS ester; ICG NHS ester;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 25 mg/mL (30.19 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.2077 mL 6.0384 mL 12.0769 mL
5 mM 0.2415 mL 1.2077 mL 2.4154 mL
10 mM 0.1208 mL 0.6038 mL 1.2077 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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