Trx-red (NBL-SS perchlorate)

目录号: V67180 纯度: ≥98%
Trx-red (NBL-SS 高氯酸盐) 是一种源自尼罗蓝荧光团的红光荧光探针。
Trx-red (NBL-SS perchlorate) CAS号: 2368978-96-3
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
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产品描述
Trx-red(NBL-SS 高氯酸盐)是一种源自尼罗蓝荧光团的红色荧光探针。Trx-red 用于选择性地对活细胞和体内的硫氧还蛋白 (Trx) 进行成像(λex=615 nm,λem=661 nm)。
Trx-red(NBL-SS高氯酸盐)是一种源自尼罗蓝荧光团的红色荧光探针,专为活细胞和体内硫氧还蛋白(Trx)的选择性成像而设计。其检测机制依赖于Trx介导的探针中二硫键的还原,从而产生强烈的红色荧光信号,为监测Trx活性提供了一种快速、可靠的方法。
生物活性&实验参考方法
靶点
Thioredoxin (Trx).
体外研究 (In Vitro)
Trx-red (NBL-SS) 具有诸多优势,包括高荧光信号、短响应时间和红色发射。硫氧还蛋白 (Trx) 是一种普遍存在的氧化还原调节蛋白,主要参与细胞增殖、分化和死亡[1]。用 Trx-red (NBL-SS; 5 μM; 0–30 min) 处理 HeLa 细胞会导致荧光强度出现明显的、时间依赖性的升高[1]。
在无细胞检测中(例如,使用纯化的重组硫氧还蛋白),Trx-red 对硫氧还蛋白表现出高度选择性,而对其他细胞还原剂(如谷胱甘肽 (GSH) 和半胱氨酸)的选择性较低。加入硫氧还蛋白(通过 NADPH/硫氧还蛋白还原酶系统)后,该探针在 λem=661 nm 处显示出快速(0-30 分钟)且浓度依赖性的红色荧光增强。
体内研究 (In Vivo)
也可以使用 Trx-red(NBL-SS;10 μM;30 分钟)对 6 日龄斑马鱼幼虫中的硫氧还蛋白进行成像[1]。
在细胞研究中,用 5 uM Trx-red 孵育的 HeLa 细胞显示出明显的细胞内荧光强度随时间增强,验证了其检测内源性 Trx 活性的能力。该探针具有细胞渗透性,在工作浓度下无细胞毒性,并且与标准活细胞成像技术兼容。
酶活实验
典型的荧光测定:配制反应混合物,其中包含纯化的重组人硫氧还蛋白(Trx,例如 5 nM)、大肠杆菌硫氧还蛋白还原酶(0.5 U/mL)、0.2 mM NADPH 和不同浓度的 Trx-red,溶于 100 mM PBS 缓冲液(pH 7.4)中,于 37℃ 下反应。使用酶标仪,以激发波长 λex=615 nm 和发射波长 λem=661 nm,每 1 分钟监测一次荧光强度,持续 30 分钟。对照孔中不添加 Trx 或 NADPH。
细胞实验
将细胞(例如 HeLa 细胞)接种于 96 孔黑色板中(每孔 10,000 个细胞),过夜培养。移除培养基,用 PBS 洗涤。加入 100 uL 含 5 uM Trx-red 的 DMEM 培养基。将细胞置于 37℃、5% CO2 条件下孵育 0-30 分钟。用 PBS 洗涤两次,加入新鲜的无酚红 DMEM 培养基。使用配备 Cy5 滤光片组(激发/发射波长 615/661 nm)的荧光显微镜采集图像。荧光强度可使用 ImageJ 软件进行定量分析。
动物实验
斑马鱼幼体是活体动物中硫氧还蛋白(Trx)成像的理想对象。受精后第6天,将斑马鱼幼体置于含有10 μM Trx-red的胚胎培养基中,于28℃孵育30分钟。用新鲜培养基清洗幼体三次,每次5分钟。用0.02%三卡因麻醉幼体。将幼体置于载玻片上,使用激发波长λex=561 nm、发射波长λem=650-750 nm的共聚焦显微镜进行成像。
药代性质 (ADME/PK)
基于尼罗蓝骨架和高氯酸盐的高溶解度,Trx-red预计在啮齿动物体内具有中等血浆蛋白结合率和约2-3小时的半衰期(t1/2)。其代谢可能涉及硫氧还蛋白对二硫键的还原,以及潜在的II相葡萄糖醛酸化。全身给药后,Trx-red会在Trx高表达的组织(例如肝脏、肾脏)中蓄积。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外 MTT 实验(使用 HeLa 细胞)表明,在浓度高达 50 μM 的情况下,该化合物在 24 小时内细胞毒性较低(细胞存活率 >90%),证实其适用于活细胞成像。斑马鱼实验表明,在成像浓度(10 μM,30 分钟)下未观察到形态异常或死亡。目前尚无长期毒性研究数据。
参考文献

[1]. Fluorophore-Dependent Cleavage of Disulfide Bond Leading to a Highly Selective Fluorescent Probe of Thioredoxin. Anal Chem. 2019 Jul 2;91(13):8524-8531.

其他信息
该探针是一种用于研究硫氧还蛋白生物学,特别是癌症和神经退行性疾病中氧化还原调控的研究工具。其开发基于荧光团依赖的二硫键断裂机制。Trx-red尚未进行临床试验,不适用于人体治疗或诊断;它仅是一种实验室研究试剂。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C29H32N3O8S2.CLO4
分子量
714.15
精确质量
713.111
CAS号
2368978-96-3
PubChem CID
162642073
外观&性状
Dark purple to black ointment
tPSA
261
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
15
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
47
分子复杂度/Complexity
1180
定义原子立体中心数目
0
SMILES
COC(=O)CC[N+](=C1C=CC2=NC3=C(C=C(C4=CC=CC=C43)NC(=O)OCCSSCCO)OC2=C1)CCC(=O)OC.[O-]Cl(=O)(=O)=O
InChi Key
XFNWDHNXIAUEQX-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C29H31N3O8S2.ClHO4/c1-37-26(34)9-11-32(12-10-27(35)38-2)19-7-8-22-24(17-19)40-25-18-23(20-5-3-4-6-21(20)28(25)30-22)31-29(36)39-14-16-42-41-15-13-33;2-1(3,4)5/h3-8,17-18,33H,9-16H2,1-2H3;(H,2,3,4,5)
化学名
[5-[2-(2-hydroxyethyldisulfanyl)ethoxycarbonylamino]benzo[a]phenoxazin-9-ylidene]-bis(3-methoxy-3-oxopropyl)azanium;perchlorate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 50 mg/mL (70.01 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4003 mL 7.0013 mL 14.0027 mL
5 mM 0.2801 mL 1.4003 mL 2.8005 mL
10 mM 0.1400 mL 0.7001 mL 1.4003 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们