| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Fluorecent dye/Ca2+ chelator
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. Fluo-3FF AM工作液配制方法
1.1 储存液制备 使用含0.025%（质量/体积）Pluronic F-127的二甲基亚砜溶液溶解Fluo-3FF AM，配制1 mM浓度的母液。 注意：配制完成的储存液应分装后存放于-20°C或-80°C低温环境，并需避光保存。 1.2 工作液配制 采用平衡缓冲溶液稀释储存液，制备得到5 μM浓度的工作液。 注意：实际使用时可根据实验需求调整工作液浓度，该溶液需现配现用。 2. 细胞染色操作流程 2.1 预先将贴壁细胞接种培养于无菌处理的盖玻片上 2.2 实验时取出盖玻片，仔细吸除表面残留的培养基 2.3 加入100 μL染料工作液，轻柔晃动确保溶液完全覆盖细胞层，随后进行60分钟孵育 2.4 孵育完成后移除染液，使用4°C预冷的PSS溶液清洗细胞，持续60分钟 |
| 酶活实验 |
细胞内钙储备的可视化：为了可视化肌细胞内钙储存的分布，使用了低亲和力（Kd=42μM）荧光钙敏感指示剂fluo-3FF（Abs/Em=462 nm/526 nm）。由于其对Mg2+的不敏感性和相对较高的光稳定性，这种染料被选为其他低亲和力Ca2+敏感指示剂之一。通过在室温下暴露于5μMfluo-3FF AM（从含有1 mM Fluo-3FF AM和0.025%（w/v）pluronic F-127的二甲基亚砜原液中稀释）60-90分钟，然后在4°C的PSS中洗涤60分钟，使肌细胞负载fluo-3FF。
为了可视化细胞内细胞内钙储存的三维（3-D）分布，将z切片方案（沿z轴以规定的间隔拍摄的一系列x-y图像）应用于预加载低亲和力Ca2+敏感指示剂fluo-3FF的肌细胞（见上文）。该方案由30-45张单独的x-y图像组成，每张图像均取自0.8μm以下的共聚焦光学切片，z步长为0.4μm。Fluo-3FF荧光由200mW氩离子激光器的488nm谱线激发，在505nm以上的波长处检测到发射的荧光[1]。 |
| 细胞实验 |
使用低亲和力钙敏感荧光染料Fluo-3FF观察了人子宫肌细胞在原代和第二代细胞培养中的细胞内钙储存。钙库表现为许多小（直径0.2-0.5微米）的焦点荧光。在标准条件下，将细胞暴露于催产素或ryanodine不会耗尽这些储备。当用thapsigargin预处理抑制肌浆网（SR）钙的再摄取时，催产素或ryanodine暴露会迅速耗尽储存。免疫荧光实验表明，ryanodine和肌醇1,4,5-三磷酸（IP（3））受体在整个SR中均匀分布，且均未与钙库共定位。由于IP（3）和ryanodine钙通道与其受体紧密相关，这些结果表明SR钙的释放是通过远离SR钙库的第二信使通道进行的。这些观察结果仅与钙储存释放机制一致，其中SR具有三个功能：（1）作为钙储存位点，（2）作为包含IP（3）和ryanodine受体及其相关释放通道的结构，以及（3）作为钙储备和释放通道之间的管道。[2]
卡巴胆碱（CCh）诱导的[Ca（2+）]变化的动力学与毒蕈碱阳离子电流（mI（cat））的动力学有关，通过快速x-y或线扫描共聚焦成像[Ca（2+）]（i）并在全细胞电压钳下同时记录mI（cat），评估了通过ryanodine受体（RyRs）和肌醇1,4,5-三磷酸受体（IP（3）Rs）释放Ca（2+）对mI（cat）的影响。当从豚鼠回肠纵向层新鲜分离的肌细胞负载钙敏感指示剂fluo-3时，x-y共聚焦成像显示CCh（10微M）诱导的钙波，以45.9+/-8.8微m（-1）从细胞末端向肌细胞中心传播（n=13）。Ca（2+）波的启动先于任何可测量的mI（cat）出现229+/-55ms（n=7）。此外，CCh诱导的[Ca（2+）]（i）瞬变在mI（cat）达到峰值振幅前1.22+/-0.11s达到峰值（n=17）。在-50 mV时，通过RyRs自发释放Ca（2+），导致Ca（2+”）火花，对CCh诱导的mI（cat）没有影响，但激活了BK通道，导致自发瞬态外向电流（STOCs）。此外，由短暂应用5 mM咖啡因诱导的通过RyRs的Ca（2+）释放在细胞中心开始，但不会增加mI（cat）（n=14）。这既不是由于咖啡因对毒蕈碱阳离子通道的抑制作用（因为当[Ca（2+）]（i）用Ca（2+）/BAPAT缓冲液强烈缓冲时，施加5 mM咖啡因不会抑制mI（cat）），也不是由于咖啡因影响了可能参与调节毒蕈碱阳离子通道Ca（2+”敏感性的其他机制（因为在5 mM咖啡因的存在下，用5 mM NP-EGTA/3.8 mM Ca（2%）进行细胞透析时，用5 mmol NP-EGTA/3.8 mM Ca的光释放以与对照组相同的方式增强了mI（cat））。相比之下，在“笼状”IP（3）（移液管溶液中为30微M）闪光光解时，IP（3，R）介导的Ca（2+）释放增强了mI（cat）（n=15），即使[Ca（2+）]（i）在Ca（2+，n=10）的光释放过程中没有达到增强mI（cat）所需的水平。通过用低亲和力Ca（2+）指示剂Fluo-3FF AM加载肌细胞，可以观察到细胞内的钙储存，该指示剂由浅表肌浆网（SR）网络和一些核周形成组成，这似乎与浅表SR是连续的。用IP（3）R 1型和RyRs抗体对肌细胞进行免疫染色显示，IP（3”Rs在浅表SR中占主导地位，而RyRs仅限于细胞的中心区域。这些结果表明，IP（3）R介导的Ca（2+）释放在豚鼠回肠中mI（cat）的调节中起着核心作用，IP（2）可能会使毒蕈碱阳离子通道对Ca（2+）的调节机制更加敏感[1]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
IP3诱导的Ca2+释放（IICR）与毒蕈碱阳离子通道门控的紧密耦合提示回肠肌细胞中肌浆网（SR）元件位于质膜下。为了观察从豚鼠回肠纵层新鲜分离的活体平滑肌细胞（SMC）中细胞内钙库的空间排列，我们使用了低亲和力Ca2+敏感指示剂fluo-3FF。将肌细胞与5 μM Fluo-3FF AM孵育60-90分钟，然后用PSS缓冲液洗涤60分钟，使指示剂脱酯化（见2.3节），从而将指示剂加载到细胞中。由于该染料对Ca2+的亲和力较低（Kd=42 μM），细胞内[Ca2+]i<1 μM区域的荧光信号较弱，并通过阈值处理从图像中去除，因此无法对细胞质Ca2+进行成像。为了可视化细胞内钙库成分的三维分布，我们采用了z轴切片技术（见2.5节）。该技术包括从肌细胞的共聚焦光学切片（<0.8 μm）中采集35-40张x-y方向的荧光图像，z轴步长（物镜位移）为0.4 μm（n=12）。该实验方法揭示，回肠肌细胞内的钙库由发育良好的质膜下肌浆网和一些核周结构（可能是核膜和高尔基体）组成，这些结构似乎与表面肌浆网相连（图8A）。回肠肌细胞内钙库成分的分布与我们近期使用DiOC6和BODIPY TR-X雷诺定在兔门静脉肌细胞中观察到的结果基本相似。如图 8B 所示，通过对 35 个回肠肌细胞进行 x-y 成像 fluo-3FF 荧光扫描（共聚焦光学切片 <0.8 μm），进一步证实了细胞内钙库的排列模式。该数据表明，回肠肌细胞中的肌浆网在质膜下位置发育良好，可能在时间和空间上高精度地输送 Ca2+ 离子，从而调节质膜上的 Ca2+ 依赖性离子通道 [1]。
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| 分子式 |
C50H46CL2F2N2O23
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|---|---|
| 分子量 |
1151.80266141891
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| 精确质量 |
1150.183
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| CAS号 |
348079-13-0
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| PubChem CID |
3626995
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
1087.3±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
611.4±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.611
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| LogP |
4.94
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| tPSA |
297
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
27
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| 可旋转键数目(RBC) |
36
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| 重原子数目 |
79
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| 分子复杂度/Complexity |
2270
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(=CC2=C(C=1)C(=C1C=C(C(C=C1O2)=O)Cl)C1C=CC(=C(C=1)OCCOC1C(=C(C=CC=1N(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)F)F)N(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)OCOC(C)=O
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| InChi Key |
ABZBPPQDKRLSCZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C50H46Cl2F2N2O23/c1-26(57)69-21-74-42-16-41-33(14-35(42)52)48(32-13-34(51)39(62)15-40(32)79-41)31-6-8-37(55(17-44(63)75-22-70-27(2)58)18-45(64)76-23-71-28(3)59)43(12-31)67-10-11-68-50-38(9-7-36(53)49(50)54)56(19-46(65)77-24-72-29(4)60)20-47(66)78-25-73-30(5)61/h6-9,12-16H,10-11,17-25H2,1-5H3
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| 化学名 |
acetyloxymethyl 2-[4-[3-(acetyloxymethoxy)-2,7-dichloro-6-oxoxanthen-9-yl]-N-[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-2-[2-[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]anilino]acetate
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| 别名 |
Fluo-3FF AM; 348079-13-0; acetyloxymethyl 2-[4-[3-(acetyloxymethoxy)-2,7-dichloro-6-oxoxanthen-9-yl]-N-[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-2-[2-[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]anilino]acetate; N-[4-[6-[(acetyloxy)methoxy]-2,7-dichloro-3-oxo-3H-xanthen-9-yl]-2-[2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]phenyl]-N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-glycine(acetyloxy)methylester; HY-D1755; N-[4-[6-[(acetyloxy)methoxy]-2,7-dichloro-3-oxo-3H-xanthen-9-yl]-2-[2-[6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-2,3-difluorophenoxy]ethoxy]phenyl]-N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-glycine(acetyloxy)methyl ester; PD044414;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8682 mL | 4.3410 mL | 8.6821 mL | |
| 5 mM | 0.1736 mL | 0.8682 mL | 1.7364 mL | |
| 10 mM | 0.0868 mL | 0.4341 mL | 0.8682 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
18:1-18:1-C11 BODIPY 505/515 TG
18:1-6:0 DNP-C11 BODIPY 505/515 TG
Anisoin
18:1-C11 BODIPY 505/515-C11 BODIPY 505/515 TG
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