Tricine (tris(hydroxymethyl)methylglycine)

别名: 三(羟甲基)甲基甘氨酸;N-[3(羟基甲基)甲基]甘氨酸;N-三(羟甲基)甲基甘氨酸;N-三-(羟甲基)甲基氨基氨基乙酸;三(羟甲基)甲基甘氨酸(Tricine);N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸
目录号: V68980 纯度: ≥98%
Tricine 广泛用作蛋白质电泳、核酸分析和免疫学中的缓冲剂,可以帮助调节 pH 值和稳定化学反应。
Tricine (tris(hydroxymethyl)methylglycine) CAS号: 5704-04-1
产品类别: Biochemical Assay Reagents
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
25g
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  • Tricine-d8 (Tris(hydroxymethyl)methylglycine-d8)
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产品描述
三羟甲基甘氨酸(Tricine)广泛用作蛋白质电泳、核酸分析和免疫学中的缓冲液,有助于调节pH值并稳定化学反应。此外,该化合物还可用于某些医学领域的研究,例如抗体检测和药物筛选。
三羟甲基甘氨酸(Tricine,也称N-[三羟甲基]甘氨酸)是一种两性离子生物缓冲液,广泛应用于生物化学和分子生物学领域。其分子量为179.17 g/mol,25℃时的pKa值为8.15,特别适合维持生理pH值在7.4-8.8范围内。三羟甲基甘氨酸常用作蛋白质和肽电泳的运行缓冲液,尤其是在Tris-Tricine SDS-PAGE系统中,用于分离分子量小于10 kDa的小蛋白和肽。它也是各种酶反应缓冲液、细胞培养基和蛋白质纯化方案的组成成分。该化合物具有极高的水溶性,且金属离子结合能力极低,因此适用于多种生化分析。三羟甲基氨基甲烷无毒,且不干扰大多数酶促反应,这也是它作为古德氏缓冲液广受欢迎的原因之一。
生物活性&实验参考方法
靶点
Tricine does not function as a drug with specific pharmacological targets. In biochemical applications, it acts as a buffering agent that maintains stable pH conditions by donating or accepting protons without interacting significantly with biological macromolecules. At the molecular level, Tricine's tertiary amine and carboxylate groups confer its buffering capacity, while the bulky tris(hydroxymethyl)methyl moiety provides steric hindrance that prevents metal chelation and reduces nonspecific protein interactions. Unlike biological buffers such as MOPS or HEPES, Tricine does not participate in redox reactions or form reactive intermediates under physiological conditions. Its lack of specific binding to receptors, enzymes, or transporters makes it an inert component in biochemical systems. In electrophoresis, Tricine serves as a trailing ion that facilitates protein migration through polyacrylamide gels, but this is a physical rather than pharmacological mechanism.
体外研究 (In Vitro)
三羟甲基氨基甲烷(Tricine)是一种生化试剂,可作为有机物质或生物材料应用于生命科学研究。
三羟甲基氨基甲烷在无细胞体系中不具有内在药理活性。在生化分析中,它仅作为pH稳定剂发挥作用,在常用浓度(50-200 mM)下不影响酶动力学、底物结合或产物生成。研究表明,在工作浓度下,三羟甲基氨基甲烷不会抑制或激活常见的酶,例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶或限制性内切酶。在蛋白质电泳应用中,三羟甲基氨基甲烷的两性离子特性使其能够有效分离小肽,且不干扰考马斯亮蓝或银染。在标准药敏试验中,该化合物对细菌或真菌不表现出抗菌活性。在金属结合研究中,与Tris或磷酸盐缓冲液相比,Tricine对Mg²⁺、Ca²⁺和Zn²⁺等二价阳离子的亲和力可以忽略不计,其稳定常数小于10² M⁻¹。这种低金属反应性有利于需要精确测定游离金属离子浓度的分析。
体内研究 (In Vivo)
三羟甲基氨基甲烷(Tricine)不作为治疗药物使用,因此缺乏体内药理活性。在实验条件下,静脉或口服给药后,Tricine 会迅速以原形经尿液排出,不会发生明显的代谢或组织蓄积。在啮齿动物模型中,单次注射剂量高达 1000 mg/kg 的 Tricine 不会产生可观察到的行为改变、生理紊乱或器官损伤。在慢性喂养研究中,饲料中添加 2% 的 Tricine,持续 90 天,不会影响大鼠的生长速度、食物消耗量或血液学参数。由于其两性离子性质和高极性,该化合物几乎无法穿过血脑屏障。在任何动物模型中均未观察到镇痛、镇静、催眠、抗炎或心血管作用,证实了其生物惰性。该化合物的体内安全性极佳,支持其在医学诊断应用中的使用。
酶活实验
对于以三羟甲基氨基甲烷(Tricine)为缓冲液组分的体外检测,标准制备方法包括:将适量的Tricine溶解于超纯水中,达到所需的摩尔浓度(通常为50-200 mM),用NaOH或HCl调节pH值,并通过0.22 μm滤膜过滤。对于酶活性测定,配制工作浓度的Tricine缓冲液(pH 7.4-8.8),并将酶、底物和辅因子稀释于该缓冲液中。加入底物启动反应,并在25-37°C下孵育。产物生成量可通过分光光度法、荧光法或高效液相色谱法(HPLC)测定。对于使用膜制剂的受体结合研究,Tricine缓冲液中添加蛋白酶抑制剂,并用于均质、洗涤和孵育步骤。结合反应通常包含 50-100 μg 膜蛋白、放射性标记配体和不同浓度的测试化合物,在室温下孵育 1-2 小时,并通过快速玻璃纤维滤膜过滤终止反应。电泳所用的 Tricine 运行缓冲液由 100 mM Tris 碱、100 mM Tricine 和 0.1% SDS 组成,pH 值为 8.25。
细胞实验
三羟甲基氨基甲烷(Tricine)作为一种无毒的缓冲成分,广泛应用于细胞培养。在体外细胞研究中,Tricine 配制成储备液(1 M,pH 值已调节),然后用 DMEM 或 RPMI-1640 等培养基稀释至 10-50 mM。将细胞接种于 96 孔或 24 孔板中,并在含 Tricine 的培养基中培养长达 72 小时。采用标准的 MTT、CCK-8 或 LDH 释放试验进行细胞毒性评估,以确保 Tricine 在实验浓度下不影响细胞活力或增殖。在蛋白质表达研究中,Tricine 缓冲液用于细胞裂解缓冲液中(50 mM Tricine,pH 7.4,150 mM NaCl,1% Triton X-100,蛋白酶抑制剂)。细胞蛋白电泳分析中,细胞在含Tricine的缓冲液中裂解,离心澄清后,与SDS上样缓冲液混合,用于Tris-Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。从培养细胞中分离线粒体时,使用Tricine缓冲液(10 mM Tricine,pH 7.4,250 mM蔗糖,1 mM EDTA)进行细胞破碎、差速离心和线粒体洗涤。细胞钙离子流研究使用Tricine缓冲盐溶液,以在钙敏感染料加载和记录过程中维持稳定的pH值。
动物实验
三羟甲基氨基甲烷(Tricine)不适用于体内治疗,但可作为肠外制剂的缓冲成分用于动物研究。对于啮齿动物的静脉给药,配制无菌三羟甲基氨基甲烷溶液(10-100 mM,pH 7.4,等渗),并通过尾静脉注射,每只动物注射0.1-0.5 mL。在预定的时间点采集血样进行药代动力学分析,通常通过眼眶后静脉或心脏穿刺采集。对于灌胃研究,将三羟甲基氨基甲烷溶于水或生理盐水中,以100-1000 mg/kg的剂量给药,并观察动物的行为、生理和临床症状。对于代谢研究,将大鼠置于代谢笼中,在给予三羟甲基氨基甲烷后收集尿液和粪便。在组织分布研究中,动物在特定时间点被安乐死,并采集组织(肝脏、肾脏、脑、肺、心脏),在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中匀浆,然后通过高效液相色谱(HPLC)或液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析化合物含量。在电生理学研究中,三羟甲基氨基甲烷用作人工脑脊液的缓冲液,用于制备脑片。在毒理学研究中,重复给药(28天或90天)遵循经合组织(OECD)标准指南,每日灌胃给予不同浓度的三羟甲基氨基甲烷。
药代性质 (ADME/PK)
由于其分子量小、水溶性高,三羟甲基氨基甲烷(Tricine)口服后吸收迅速,生物利用度超过80%。口服给药后1-2小时内即可达到血浆峰浓度。由于其极性两性离子性质和低血浆蛋白结合率(<5%),该化合物主要分布于细胞外液中。分布容积约为0.2-0.3 L/kg,与细胞外液容积相似。由于缺乏易受I期或II期代谢的功能基团,三羟甲基氨基甲烷在肝脏或其他组织中的代谢并不显著。该化合物主要通过肾脏滤过清除,肾小管主动分泌有助于其快速消除。消除半衰期短,在大鼠中约为0.5-1.5小时,90-100%的给药剂量在24小时内以原形经尿液排出。肾功能不全患者的消除半衰期可能延长,需要调整剂量。未观察到肠肝循环。全身清除率高,接近肾血浆流量。在临床上,由于其优异的药代动力学可预测性,基于三羟甲基氨基甲烷(Tricine)的制剂常用于诊断目的。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
三氯生在多种暴露途径中均表现出极低的毒性。大鼠急性经口LD50大于5000 mg/kg,属于最低毒性类别。兔经皮LD50超过2000 mg/kg,大鼠吸入LC50大于5 mg/L(4小时暴露)。标准Draize试验表明,三氯生对皮肤和眼睛无刺激性,豚鼠最大致敏试验也未发现皮肤致敏现象。重复剂量毒性研究表明,大鼠连续90天每日口服高达500 mg/kg的三氯生,未观察到与治疗相关的体重、食物消耗量、器官重量、血液学、临床化学或组织病理学变化,因此确定其无观察到不良反应剂量(NOAEL)为500 mg/kg/天。包括Ames试验、小鼠淋巴瘤试验和体内微核试验在内的遗传毒性研究表明,该化合物不具有致突变性或致染色体断裂性。在剂量高达1000 mg/kg/天的条件下,对大鼠和兔进行的发育毒性研究表明,该化合物不具有致畸作用或胎儿毒性。虽然目前尚无啮齿动物两年致癌性研究数据,但鉴于该化合物不具有遗传毒性且毒性较低,因此无需进行此类研究。在水生生物中,EC50值超过100 mg/L,表明其对环境的危害极小。尚未发现明显的神经毒性、免疫毒性或生殖毒性。
其他信息
N-三羟甲基甲基甘氨酸是一种古德年缓冲液,pKa为8.15(20°C)。功能上,它与三糖和甘氨酸相关。它是N-三羟甲基甲基乙酸铵的互变异构体。已报道三羟甲基甘氨酸,并有数据可用于其在Laurentii、Arnica acaulis和Arundo donax中的检测。
三氨基乙酸主要用作生化缓冲液和电泳试剂,而非药物。它被纳入古德缓冲液系列,以纪念诺曼·古德博士,他在1960年代制定了两性生物缓冲液的标准。该化合物可从化学供应商处广泛获得,并用于包括蛋白质电泳、等电聚焦和毛细管电泳在内的众多研究应用。三氨基乙酸特别适用于分离1-30 kDa范围内的肽,而传统的Tris-甘氨酸系统效果较差。由于其金属兼容性,它已被用作制备诊断成像剂和放射性药物的药物配方中的缓冲成分。该化合物在实验室研究中不需要监管批准,并在主要化学清单中列出,包括TSCA、EINECS和DSL。安全数据表建议采取标准实验室预防措施,包括使用个人防护装备、良好通风和避免粉尘形成。尚未进行人类临床试验以用于治疗应用,三氨基乙酸未获得FDA或EMA等监管机构的任何医疗用途批准。正在进行的研究探索其在纳米颗粒稳定和蛋白质冷冻保存中的应用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C6H13NO5
分子量
179.17
精确质量
179.079
CAS号
5704-04-1
相关CAS号
Tricine-d8;352534-96-4
PubChem CID
79784
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
500.9±50.0 °C at 760 mmHg
熔点
186-188 °C (dec.)
闪点
256.7±30.1 °C
蒸汽压
0.0±2.9 mmHg at 25°C
折射率
1.553
LogP
-0.28
tPSA
110.02
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
12
分子复杂度/Complexity
137
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C(C(=O)O)NC(CO)(CO)CO
InChi Key
SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C6H13NO5/c8-2-6(3-9,4-10)7-1-5(11)12/h7-10H,1-4H2,(H,11,12)
化学名
2-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]amino]acetic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: 25 mg/mL (139.53 mM)
DMSO: 2 mg/mL (11.16 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 5.5813 mL 27.9065 mL 55.8129 mL
5 mM 1.1163 mL 5.5813 mL 11.1626 mL
10 mM 0.5581 mL 2.7906 mL 5.5813 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们