| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 13 nM (Notum)[1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
ABC99（0.1~10 μM；2 小时；SW620 细胞）以浓度依赖性方式抑制 NOTUM[1]。当 NOTUM 存在时，ABC99 以浓度依赖性方式维持 Wnt-3A 活性[1]。
ABC99抑制NOTUM的IC50值为13 nM（图2B和表1），并在丝氨酸水解酶家族中表现出极好的选择性，初步通过SW620细胞可溶性和膜蛋白质组的凝胶基ABPP进行评估（图2C，D）。这些ABPP实验使用FP-Rh和ABC45探针进行，从而证实PPT1也没有与ABC99交叉反应（图2D）。接下来，我们利用基于定量质谱（MS）的ABPP技术评估了ABC99 （0.5 μM和10 μM）在CM和SW620原位处理细胞中的选择性。这些数据证实了NOTUM的抑制作用（图2E），与MS-ABPP量化的64个额外的丝氨酸水解酶几乎没有交叉反应性（图2E和补充图3和补充数据集1）。观察到ABHD6的部分浓度依赖性阻断，但在ABC99浓度（0.5 μM）完全阻断NOTUM时，该酶只有~ 50%被抑制。我们还注意到，与细胞（补充图3）相比，ABC99更完全地抑制了分泌的NOTUM（图2E），这可能反映了后者含有更大比例的未完全加工的NOTUM。[1] 使用对Wnt激活有反应的荧光素酶报告细胞系（HEK293T-STF） 25，我们发现，将细胞暴露于与ABC99或对照化合物ABC101和产wnt3a的l细胞CM预孵育的表达notum的CM组合中26，会导致在ABC99存在时Wnt信号的浓度依赖性保存，而不是ABC101（图2F）。abc99介导的Wnt3A活性保存的IC50值（图2F和表2）略高于ABPP测量的NOTUM抑制的IC50值（图2B和表1），这可能表明需要抑制超过50%的NOTUM来保护wnt介导的细胞信号。[1] |
| 酶活实验 |
凝胶基ABPP [1]
体外和原位竞争性凝胶基ABPP的制备方法如上所述。3,6简单地说，在体外（30分钟，37°C）或原位（2小时，37°C）抑制剂或DMSO处理后，细胞裂解物在室温下用1µM fp -罗丹明（FP-Rh）探针处理30分钟。然后用4X SDS上样缓冲液淬灭样品，在10%丙烯酰胺凝胶上用SDS- page分离，并用ChemiDoc MP系统进行凝胶内荧光成像。 PPT1活性分析[1] 凝胶法测定PPT1抑制作用如前所述。1简单地说，SW620细胞在6cm板中培养至~80%的融合度，然后用抑制剂或DMSO原位处理2小时。然后将细胞刮在冰上，用冷PBS洗涤一次，快速冷冻并保存在-80°C。然后将细胞颗粒在冰上解冻，重新悬浮在冷PBS中，并用探针超声仪裂解。裂解液预清（1,400g, 1 min），上清液超离心（100,000g, 45 min, 4°C）。收集可溶部分，调整样品浓度至2 mg/mL。然后将样品与1µM的PPT1探针ABC45在室温下孵育30分钟，在添加去糖基化酶PNGaseF后，在37℃下再孵育30分钟。rhodamineazide （Rh-N3）荧光基团报告子在先前报道的CuAAC条件下共轭到炔探针上。 ABC99yne标记[1] 从SW620全细胞裂解液（1mg /mL）或SW620条件培养基（0.1 mg/mL）中提取的蛋白质组用不同浓度的ABC99yne在室温下处理30分钟，然后按上述条件点击荧光团报告罗丹明氮化肼（Rh-N3）进行PPT1活性分析。 Wnt活性测定[1] 使用HEK293-STF细胞系检测Wnt活性，如前所述12，并进行了一些修改。将SW620细胞以5 × 106的浓度接种于10 cm板上。2天后，收集培养基，用22µm注射器过滤器无菌过滤，立即与抑制剂或DMSO在37°C下孵育1小时，然后与L或L- wnt3a细胞新收集的培养基1:1混合（每10 cm板2 × 106，处理方法与SW620细胞培养基相同）。37℃孵育2小时后，加入HEK293-STF（24小时前96孔板按3 × 104 /孔接种）。用80µL Bright-Glo试剂替换培养基，24小时后测量发光。每种情况下的发光测量一式四份。 |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： SW620 细胞 测试浓度： 0.1~10 μM 孵育时间： 2 小时 实验结果： 以浓度依赖性方式抑制 NOTUM。 Western Blotting [1] SDS-PAGE后，将凝胶样品转移到硝化纤维素（50V， 2小时）上，用5%牛奶TBS-T（30分钟，RT）阻断印迹，然后用抗NOTUM抗体在4°C下孵育过夜。然后用TBS-T （3x）洗涤印迹，用二抗（Li-cor IRDye 800CW驴抗兔，1:5000在TBS-T和5%牛奶中）孵育2小时。然后再次冲洗（3次，TBS-T）并在Li-cor Odyssey上成像。 质谱ABPP样品制备和数据分析[1] 定量质谱分析的样品按先前报道的方法制备和分析，并进行了如下规定的微小修改。8抑制剂和DMSO处理的SW620全细胞裂解物的蛋白质组（每种条件1 mg）或SW620条件培养基（每种条件0.5-0.75 mg）用4µM fp -生物素在室温下处理1小时。然后用氯仿/甲醇沉淀样品，用10 mM中性TCEP还原（30分钟，37℃），用40 mM碘乙酰胺烷基化（30分钟，室温），然后用pbs洗涤的链亲和素琼脂糖珠（100µL浆）富集，室温下端过端旋转1.5小时。然后用0.2% SDS （2 × 10 mL）洗涤样品，转移到Low-bind epppendorf管中，用3 × 1 mL PBS和3 × 1 mL DI H2O洗涤，然后用序列级胰蛋白酶（2µg）在2M尿素中消化过夜。然后使用还原二甲基化标记样品，如前所述。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Wnt蛋白是一类分泌型形态发生素，在胚胎发育和成体组织重塑中发挥着关键作用。异常的Wnt信号通路会导致癌症等疾病。Wnt蛋白需要经过一种特殊的O-脂肪酰化修饰（保守丝氨酸的O-连接棕榈油酰化），才能与Frizzled受体结合。Wnt蛋白的O-棕榈油酰化由豪猪酰基转移酶（PORCN）催化，并由丝氨酸水解酶NOTUM去除。PORCN抑制剂正处于肿瘤治疗的研发阶段，而NOTUM抑制剂则具有治疗退行性疾病的潜力。本文描述了利用基于活性的蛋白质组学分析（ABPP）发现并推进一类高效且选择性抑制NOTUM的N-羟基乙内酰脲（NHH）氨基甲酸酯类化合物的开发。一种优化的NHH氨基甲酸酯抑制剂ABC99，在NOTUM存在的情况下仍能维持Wnt介导的细胞信号传导，并且已被转化为ABPP探针，用于在天然生物系统中可视化NOTUM。[1]据我们所知，研究人员首次报道了Wnt脱酰化酶NOTUM的高效选择性不可逆抑制剂。最先进的化合物ABC99以低纳摩尔级的效力（IC50值=13 nM）阻断NOTUM活性，并且通过丝氨酸水解酶导向的ABPP探针和使用可点击探针类似物（ABC99yne）的全局蛋白质组反应性分析评估，其选择性极佳。过去十年中，许多研究强调了NOTUM作为Wnt信号传导负调控因子在多种生物过程中的重要作用，但几乎所有这些研究都依赖于分子生物学（例如遗传学）方法来干扰NOTUM的功能。我们相信，本文所述的共价抑制剂及相关化学探针（非活性对照和可点击探针）将为先前报道的有限的非共价抑制剂提供有价值的补充工具，用于表征NOTUM在各种生理和疾病过程中药理学失活的生物学效应。未来的研究方向包括：使用ABC99yne探针结合基于质谱的活性位点蛋白质组学（ABPP）分析，检测ABC99在蛋白质组范围内的反应性；直接测量生物系统暴露于ABC99后Wnt棕榈油酸酯的修饰情况；以及评估ABC99对体内Wnt信号通路的影响。关于最后一个研究目标，我们注意到NOTUM在体内似乎具有组织分布局限（http://www.humanproteomemap.org/），这可能有助于揭示Wnt生物学中哪些特定区域受NOTUM介导的去酰化作用影响最大。[1]
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| 分子式 |
C22H21CLN4O5
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|---|---|
| 分子量 |
456.88
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| 精确质量 |
456.12
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| 元素分析 |
C, 57.84; H, 4.63; Cl, 7.76; N, 12.26; O, 17.51
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| CAS号 |
2331255-53-7
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| PubChem CID |
134817170
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
565.9±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
296.1±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.5 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.710
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| LogP |
2.24
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| tPSA |
82.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
746
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(N1C2=CC=CC=C2OCC1)ON(C3=O)C(N4C3CN(CC5=CC=C(Cl)C=C5)CC4)=O
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| InChi Key |
OZPZCETZTBBQBO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H21ClN4O5/c23-16-7-5-15(6-8-16)13-24-9-10-25-18(14-24)20(28)27(21(25)29)32-22(30)26-11-12-31-19-4-2-1-3-17(19)26/h1-8,18H,9-14H2
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| 化学名 |
[7-[(4-chlorophenyl)methyl]-1,3-dioxo-5,6,8,8a-tetrahydroimidazo[1,5-a]pyrazin-2-yl] 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine-4-carboxylate
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| 别名 |
abc99; 2331255-53-7; 7-(4-chlorobenzyl)-1,3-dioxohexahydroimidazo[1,5-a]pyrazin-2(3H)-yl2,3-dihydro-4H-benzo[b][1,4]oxazine-4-carboxylate; [7-[(4-chlorophenyl)methyl]-1,3-dioxo-5,6,8,8a-tetrahydroimidazo[1,5-a]pyrazin-2-yl] 2,3-dihydro-1,4-benzoxazine-4-carboxylate; CHEMBL4174188; 7-(4-Chlorobenzyl)-1,3-dioxohexahydroimidazo[1,5-a]pyrazin-2(3H)-yl 2H-benzo[b][1,4]oxazine-4(3H)-carboxylate;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 25 mg/mL (54.72 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1888 mL | 10.9438 mL | 21.8876 mL | |
| 5 mM | 0.4378 mL | 2.1888 mL | 4.3775 mL | |
| 10 mM | 0.2189 mL | 1.0944 mL | 2.1888 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
KY19334
SJ-300
Wnt/β-catenin-IN-7
Fluc-IN-1
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