kappa-opioid receptor/KOR( Kd = 2.2 nM); μ-opioid receptor/MOR (Kd = 430 nM)

在急性感染的血液单核细胞衍生巨噬细胞 (MDM) 中，(-)-U-50488 盐酸盐（1 pM-100 nM；7 天）显示出 HIV-1 表达浓度依赖性降低，最大抑制发生在 10− 13 M（约 73% 抑制）[2]。 (-)-U-50488 盐酸盐（10-13 M；7-14 天）(10−13 M) 对 MDM 中的 HIV-1 感染具有长期抑制作用，并且在 7 和 14 天显着抑制 HIV-1 表达感染后的天数[3]。

---

U50488对急性感染MDM患者HIV-1表达的影响[3]
用U50488治疗MDM导致感染后第7天HIV-1表达的显著抑制（图1A）。U50488的抑制作用呈浓度依赖性，呈U形剂量-反应曲线，在10-13M时显示出最大抑制作用（约73%抑制）。为了进一步证实U50488的这种抗HIV-1作用，还检查了感染后14天收获的培养上清液。同样，U50488（10-13M）在感染后7天和14天显著抑制了HIV-1的表达（P<0.01）（图1B），表明U50488对MDM中的HIV-1感染具有持续的抑制作用。用10-12M Nor-BNI预处理小胶质细胞培养物，可拮抗U50488（10-13M）对HIV-1表达的抑制作用>65%（图2）（P<0.01），表明U50488的抗HIV-1作用是由KOR介导的。我们还发现，用U50488预处理MDM对其抗病毒作用不是必需的（在感染前6小时和24小时同时治疗的MDM中，p24-Ag产生的抑制率分别为65%、68%和64%）。

---

细胞因子或趋化因子的参与[3]
由于某些促炎细胞因子（即IL-1β、IL-6和TNF-α）和趋化因子RANTES具有强大的抗HIV-1活性（Herbein和Gordon，1997，Lokensgard等人，1997），接下来评估了U50488的抗HIV1作用是否涉及这些介体的释放。为了验证这一假设，在用U50488治疗之前，将针对这些分子的特异性抗体添加到MDM培养物中。虽然用1μg/ml的IL-1β、IL-6或TNF-α特异性抗体治疗急性感染的MDM未能阻断U50488的抗HIV-1作用，但用RANTES特异性抗体的治疗使U50488抗HIV-1的作用减弱了57±6%（图5）。这一发现表明，刺激RANTES的产生在U50488的抗HIV-1作用中起作用。

在伏隔核 (NAc) 中，(-)-U-50488 盐酸盐（腹膜内注射；5 mg/kg；4% 多聚甲醛 (PFA) 前 2 小时）选择性急性诱导 pMeCP2-S421（甲基 DNA 结合的磷酸化）蛋白质 MeCP2 (Ser421) 和 Fos，但没有改变大脑任何其他区域的 MeCP2 水平[2]。

---

U50488给药在NAc中急性诱导了pMeCP2-S421和Fos的选择性，但没有改变任何脑区的MeCP2水平。U50488诱导的CPA与ILC和BLA中pMeCP2-S421的减少以及BLA中Fos的诱导有关。MeCP2-KI小鼠显示CPA与WT同窝小鼠无法区分，但它们在CPA后也显示出较少的BLA-Fos诱导。 结论：这些数据首次表明，U50488给药后，pMeCP2-S421在脑中急性诱导，但在U50488诱导的CPA后没有。尽管U50488诱导的CPA不需要pMeCP2-S421，但这种磷酸化事件可能有助于控制厌恶行为的大脑区域的分子可塑性。[2]

MDM的治疗和感染[3]
为了评估KOR激活对急性感染MDM中HIV-1表达的直接影响，我们首先用指定浓度的U50488预处理这些细胞24小时，然后以0.02的感染倍数感染HIV-1SF162 24小时，如前所述（Lokensgard等人，1997）。在广泛洗涤后，将U50488重新加入培养基中，并在感染后第7天或第14天收获上清液，用于HIV-1 p24抗原（Ag）水平的测定。如前所述（Chao等人，1996），使用酶联免疫吸附试验测量HIV-1 p24-Ag水平。该测定的灵敏度为30pg/ml。

动物/疾病模型： C57BL/6J 小鼠[2]
剂量： 5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)；单次给药；4% PFA 灌注前 2 小时
实验结果： 急性诱导脑内 pMeCP2-S421 表达。

---

急性 U50488 暴露 [2]
将 C57BL/6 雄性小鼠置于开放场中 30 分钟，然后腹腔注射载体（生理盐水）或 5 mg/kg U50488。2 小时后，对小鼠进行经心灌注，灌注 4% 多聚甲醛 (PFA) 和 0.1 M PBS。脑组织在含4% PFA的PBS溶液中固定过夜，然后转移至含4% PFA的20%蔗糖PBS溶液中。载体处理组（对照组）小鼠每天在交替的隔室中接受生理盐水注射。药物处理组小鼠在第2、4和6天于基线偏好隔室接受U50488（5mg/kg，腹腔注射）处理，并在第3、5和7天于交替隔室接受生理盐水注射。最后，在第8天，即挑战日，所有小鼠被放置在中央隔室，并允许其自由活动30分钟，期间不进行任何药物处理。在挑战日，测量小鼠在每个隔室中的停留时间，并按上述方法确定偏好评分。通过比较小鼠在两个隔室（药物/生理盐水）中的停留时间及其差异在条件反射过程中的变化，偏好评分能够反映动物位置偏好的真实变化，而不会受到例如在装置中性（灰色）隔室中停留时间变化的影响。在挑战日行为分析后2小时，对小鼠进行脑组织灌注免疫染色，或用二氧化碳处死小鼠，并取出脑组织进行蛋白质印迹分析。[2]

---

目的：本研究旨在探讨pMeCP2-S421在小鼠皮质边缘系统脑区中的作用及其调控机制，以及在急性给予κ阿片受体激动剂U50488后和U50488诱导的条件性位置厌恶（CPA）表达期间的变化。方法：在腹腔注射U50488后和U50488诱导的CPA表达期间，检测雄性小鼠伏隔核（NAc）、前边缘皮层、下边缘皮层（ILC）和基底外侧杏仁核（BLA）中pMeCP2-S421的水平。同时，检测相同脑区中Fos蛋白的表达水平，作为神经活动的标志物。比较了缺乏 pMeCP2-S421 的敲入 (KI) 小鼠与其野生型 (WT) 同窝小鼠中 U50488 诱导的 CPA 和 Fos 水平。[2]

[1]. The search for the "next" euphoric non-fentanil novel synthetic opioids on the illicit drugs market: current status and horizon scanning. Forensic Toxicol. 2019;37(1):1-16.

[2]. Regulation and function of MeCP2 Ser421 phosphorylation in U50488-induced conditioned place aversion in mice. Psychopharmacology (Berl). 2017 Mar;234(6):913-923.

[3]. U50488 inhibits HIV-1 expression in acutely infected monocyte-derived macrophages. Drug Alcohol Depend. 2001 Apr 1;62(2):149-54.

阿片类药物可能在人类免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 感染的发病机制中发挥免疫调节作用。近期研究发现，合成的κ-阿片受体 (KOR) 配体在急性感染的脑巨噬细胞中具有抗HIV-1活性。本研究探讨了选择性KOR配体U50488是否在急性感染的血液单核细胞来源巨噬细胞 (MDM) 中发挥抗HIV-1作用。用U50488处理急性感染的MDM可诱导HIV-1表达呈浓度依赖性抑制。U50488的剂量-反应关系呈U型，在10⁻¹³ M浓度下达到峰值效应，该效应在感染后7天和14天均可见。 κ阿片受体（KOR）拮抗剂nor-binaltorphimine可阻断U50488 73%的抗HIV-1作用，表明KOR介导的机制参与其中。此外，KOR mRNA的表达以及与荧光标记的KOR配体的结合活性也支持MDM上存在KOR。针对β-趋化因子RANTES（活化后正常T细胞表达和分泌的调节因子）的抗体，而非针对其他多种细胞因子的抗体，可阻断U50488 56%的抑制作用，提示U50488的抗HIV-1作用部分涉及MDM产生RANTES。综上所述，这些体外研究结果支持U50488的抗HIV-1特性，并提示KOR配体可能具有治疗获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者的潜力。 [3]

---

目的：本文详细综述了非芬太尼类新型合成阿片受体激动剂的化学和药理学特性，特别是20世纪70年代和80年代由Upjohn公司开发的N-取代苯甲酰胺和乙酰胺类（俗称U类药物）以及4-氨基环己醇类药物。
方法：本文利用同行评议文献、专利、专业文献、国际预警系统数据以及吸毒者论坛讨论帖，追踪了这些药物作为滥用物质的出现情况。
结果：就对毒品市场的影响、流行程度和危害而言，迄今为止，此类化合物中最具影响力的是U-47700（反式-3,4-二氯-N-[2-(二甲氨基)环己基]-N-甲基苯甲酰胺），据使用者报告，该化合物可产生短暂的欣快感，并诱发再次用药的欲望。自2017年U-47700被列入国际管制清单以来，一系列结构相似的化合物（由原专利化合物衍生而来）已出现在非法药物市场上。人们对由Upjohn公司开发、现名为BDPC/溴马多（bromadol）的结构不相关的阿片类药物的兴趣似乎正在增加，应密切监测。
结论：国际预警系统是追踪新兴精神活性物质的重要组成部分，有助于采取应对措施，收集相关数据以进行详细的风险评估。建议对最有可能出现的新型化合物进行预先研究，提供药物代谢和药代动力学数据，以确保在毒理学样本中及早发现新物质。由于这些化合物是手性化合物，立体化学对其效力有显著影响，因此建议检测方法应考虑构型测定。[1]

---

U-50488H 的详细描述最早于 1982 年发表在同行评审的文献中。它不会引起呼吸抑制，也不会成瘾，但被发现会引起镇静、利尿和烦躁不安，后两种特性在药物中是不受欢迎的，并且表明其作用是通过 κ 阿片受体 (KOR) 介导的。(−)反式-(1S,2S) U-50488 (U-50488H) 和 (±)反式外消旋混合物可从专业化学品供应商（例如 Merck、Tocris Bioscience、Axon Medchem 等）作为试剂购买，并广泛用作实验研究中的 κ 阿片受体激动剂模型。 U-50488H及其相关化合物的发现和结构活性关系解析，包括立体化学在激动剂活性中的重要作用，由负责其开发的Upjohn化学家Jacob Szmuszkovicz进行了精辟的描述[15]。N-取代苯甲酰胺和乙酰胺的通用结构如图2a所示。强效KOR激动剂的结构要求似乎是以下几个条件的组合：(1) (−)反式-(1S,2S)构型；(2)羰基邻位氮原子上存在N-甲基；(3)存在亚甲基(CH2)“间隔基”。U-50488H结构的修饰进一步说明了这一点，这些修饰合成了另外两种具有(−)反式-(1S,2S)构型的高选择性KOR激动剂。 U-62066（spiradoline，2-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-N-[(5R,7S,8S)-7-吡咯烷-1-基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]乙酰胺）和 U-69593（N-甲基-2-苯基-N-[(5R,7S,8S)-7-吡咯烷-1-基-1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基]乙酰胺）均具有在 R3 位与环己基部分稠合的杂环结构（图 2a，表 1）。
将 U-50488H 的性质与假定的新型 μ-阿片受体 (MOR) 激动剂 U-47109（3,4-二氯-N-(2-(二甲氨基)环己基)苯甲酰胺）的性质进行了比较。本研究使用U-47700和U-51754（2-(3,4-二氯苯基)-N-[2-(二甲氨基)环己基]-N-甲基乙酰胺）（图2）来证明该药物对κ阿片受体（KOR）的选择性。研究发现，具有(+)反式-(1R,2R)构型的U-47700（假设U-47109和U-51754也具有相同的构型）在镇痛试验（甩尾试验、捏尾试验和盐酸扭体试验）中，其镇痛效果分别是吗啡的7.5倍、8倍和3倍。U-50488H、U-51754和U-47109的效力低于吗啡，但仍具有可测量的镇痛效果。当小鼠接受 U-47700、U-51754 和 U-47109 治疗时，观察到了典型的 MOR 介导效应（Straub 尾巴、弓背、运动活性增加），但未在 U-50488H 治疗中观察到。[1]

C19H27CL3N2O

405.79

422.129

114528-79-9

(1R,2R)-U-50488 hydrochloride;109620-49-7;(±)-U-50488 hydrochloride;67197-96-0;(±)-U-50488 hydrate hydrochloride;(+)-U-50488;67198-17-8;(+)-U-50488 hydrochloride;114528-81-3

9931141

White to off-white solid powder

5.076

32.78

1

2

4

25

428

2

CN([C@H]1CCCC[C@@H]1N2CCCC2)C(=O)CC3=CC(=C(C=C3)Cl)Cl.Cl

KGMMGVIYOHGOKQ-APTPAJQOSA-N

InChI=1S/C19H26Cl2N2O.ClH/c1-22(19(24)13-14-8-9-15(20)16(21)12-14)17-6-2-3-7-18(17)23-10-4-5-11-23;/h8-9,12,17-18H,2-7,10-11,13H2,1H3;1H/t17-,18-;/m0./s1

2-(3,4-dichlorophenyl)-N-methyl-N-[(1S,2S)-2-pyrrolidin-1-ylcyclohexyl]acetamide;hydrochloride

(-)-U-50488 HYDROCHLORIDE; 114528-79-9; (-)-trans-(1S,2S)-U-50488 hydrochloride; CHEMBL593781; (-)-trans-(1S,2S)-u-50488 Hydrochloride potent k opioid recep; 2-(3,4-dichlorophenyl)-N-methyl-N-[(1S,2S)-2-pyrrolidin-1-ylcyclohexyl]acetamide;hydrochloride; SR-01000075483; SR-01000597740;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: 50 mg/mL (123.22 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。