| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
iron chelator; α-synuclein aggregation
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| 体外研究 (In Vitro) |
PBT434 甲磺酸盐（0–20 µM；3 小时）可极大地抑制铁生成的 H2O2，并显着降低 Fe 介导的 α-突触核蛋白聚集速率 [1]。 PBT434 甲磺酸盐（0-100 µM；24 小时）不会对脑微血管内皮细胞产生细胞毒性影响 [2]。 PBT434 甲磺酸盐（20 µM；24 小时）可增加 hBMVEC 中总 TfR 和 Cp 蛋白水平的表达 [2]。
在这项研究中，研究人员确定铁螯合剂PBT434，目前正在开发用于治疗帕金森病和多系统萎缩，通过螯合细胞外Fe2+调节人脑微血管内皮细胞(hBMVEC)对铁的摄取。用PBT434治疗hBMVEC可增加转铁蛋白受体(TfR)和铜蓝蛋白(Cp)转录本的丰度。Western blot和ELISA分析也显示相应的蛋白增加。在细胞内，PBT434增加了可螯合的、不稳定的Fe2+的可检测水平;数据表明这些铁离子从铁蛋白中释放出来。此外，PBT434可能由于胞质亚铁铁(铁输出物的底物)转运蛋白的增加而增强铁的外排。PBT434在hBMVEC血脑屏障上快速双向平衡。这些结果表明，PBT434-铁复合物不是hBMVEC摄取的底物，因此支持PBT434螯合间质铁并抑制血脑屏障内皮细胞对铁的再摄取，以及抑制神经血管单元其他细胞对铁的摄取的模型。总的来说，这提出了一种新的和有前途的铁螯合治疗机制。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
PBT434 甲磺酸盐（30 mg/kg；口服；每天一次，持续 21 天）在 L-DOPA 范式中表现出显着减少的旋转，在 MPTP 模型中大大减少 SNpc 神经元损失，在 6-OHDA 毒性模型中显着保留神经元数量。 [1]。
在体内，PBT434不会消耗正常啮齿动物的组织铁储备，但可以防止黑质致密部神经元(SNpc)的丢失，降低黑质α-突触核蛋白的积累，并在暴露于帕金森毒素6-OHDA和MPTP的小鼠以及PD的转基因动物模型(hA53T α-突触核蛋白)中恢复运动性能。这些改善与氧化损伤标志物的减少、铁转运蛋白(铁出口物)和DJ-1水平的增加有关。研究人员得出结论，针对组织中不以高亲和力复合物形式存在的病理性铁池而设计的化合物可以维持SNpc神经元的存活，并可能改善PD的疾病。 |
| 酶活实验 |
α-synuclein聚集试验[1]
每批合成的重组α突触核蛋白都进行了蛋白质测序和质谱分析以确保其纯度。冻干纯化的WT重组α突触核蛋白用Tris缓冲盐水(TBS) pH 7.4进行重组。混合的等分液在10万g下在4°旋转30分钟，以去除预先形成的聚集体/种子。收集含有单体形式的上清并用于测定。用BCA法测定蛋白质浓度，称取硝酸铁，溶解于TBS溶液中。PBT434 溶于100% DMSO中，然后用毫水稀释成原液。在每个试管上按等浓度依次加入TBS、Fe、Compound/Veh和α synuclein。α - synuclein、Fe和复合物的最终浓度为186.6 μM。 一旦所有的溶液都在管中，样品在电镀前被涡流2秒。样品在ThT (20 μM)存在下检测。在37°的Perkin-Elmer Enspire多模式平板阅读器上读取，每30分钟(1800秒)读取一次，每次读取之间以800转/分(1800秒)震动，直至42小时。在波长450发射和485 nm激发下随时间测量ThT荧光强度。RFU值归一化为TBS ThT空白井，并随时间绘制。滞后时间和最大相对荧光单位(RFU)作为化合物动力学分析的指标。 电位法[1] 肽的电位滴定在MettlerTitrando 907/Dosino 800滴定系统上进行，使用InLab 422组合玻璃- ag /AgCl电极，每天通过硝酸滴定校准。0.1 M NaOH(不含二氧化碳)作为滴定剂。样品体积为1.2-1.5 ml。样品通常含有0.8 mM PBT434 ，溶解在4 mM HNO3/96 mM KNO3中。研究了Fe (II)和Fe (III)络合物的形成，使用2.5 - 4倍过量的化合物超过金属离子，作为硝酸盐添加。所有实验均在25℃氩气条件下进行，pH范围为2.3 ~ 12.2。使用HYPERQUAD程序对收集的数据进行分析[1]。同时计算了3 ~ 5次滴定，分别用于质子化、Fe (II)和Fe (III)络合。 在Cary 50或Perkin Elmer分光光度计上记录25°C下的紫外可见光谱，光谱范围为230-800 nm。所有实验的光程均为1 cm。对单独含有PBT434 离子或与Fe (II)、Fe (III)、Cu (II)或Zn (II)离子的样品，在pH为2.0-12.0范围内用NaOH滴定，小心地手动添加极少量的浓碱溶液。对于Fe (III)和Fe (II)，使用PBT434 浓度为0.1 mM，配体与金属的比例为4:1，以符合提供良好电位滴定的条件。对于Cu (II)，采用<强>PBT434 浓度为0.1 mM，配体与金属的比例为1:1 ~ 4:1。对于Zn (II)，为了避免沉淀，在0.04 mM PBT434 和0.02 mM Zn (II)的较低浓度下进行光谱滴定。铁(II)样品在氮气下制备，在Coy手套箱中，并转移到分光光度计。 |
| 细胞实验 |
细胞毒性测定[2]
细胞类型： hBMVEC 测试浓度： 1、10、20、50、100 µM 孵育持续时间：24小时 实验结果：证明对脑微血管内皮细胞没有细胞毒性作用。 蛋白质印迹分析[2] 细胞类型： hBMVEC 测试浓度： 20 μM 孵育时间： 24 h 实验结果： 总TfR、Cp蛋白表达水平增加。 MTT测定[2] 将hBMVEC在24孔板中培养至融合，然后在细胞培养基中以 浓度的PBT434 在37℃下处理24h。第二天，取出培养基，用含有MTT (0.5mg/ml)的RPMI+血清培养基在37℃下孵育2h，再用10% SDS/0.01N HCl在37℃下孵育16h，使MTT甲醛晶体溶解。溶解后，将溶液分三次转移到96孔板上，在平板阅读器上读取570nm处的吸光度。对空白值进行校正，并与未处理的对照组归一化。0.1% Triton X-100处理的细胞作为细胞死亡的阳性对照。 14C-PBT434积累和流出试验[2] 为了摄取14C-PBT434, hBMVEC单层膜在RPMI1640加血清生长培养基中加载20 μM 14C-PBT434 ，在37℃下加载3h。如前所述，反应用冰冷的淬火缓冲液淬火，并在裂解缓冲液中裂解。对裂解物进行14C计数(Beckman LS6500闪烁计数器)，并归一化为BCA测定的蛋白质含量。 对于14C-PBT434 外排，hBMVEC单层膜上载20 μM的14C-PBT434 ，在RPMI加血清生长培养基中37℃孵育30min，然后用预温的RPMI加柠檬酸盐洗涤两次，再在RPMI加血清外排培养基中孵育2.5h。每隔30min，用冷冻缓冲液对细胞进行淬灭，裂解后进行如上处理。细胞相关14C计数与蛋白质含量归一化。 在14C-PBT434 轨迹试验中，hBMVEC生长在transwell刀片的顶室中，顶室(RPMI+血清)或基底室(RPMI-血清)中分别加载20 μM 14C-PBT434。在指定时间点分别从顶室和基室采集培养基样品，3h后用冷淬缓冲液淬灭细胞，裂解细胞，同上处理。为了粗略估计细胞内<强>PBT434 浓度，根据初始播种密度估计汇合时200K - 250K细胞，内皮细胞体积近似为10,000 μm3，从细胞中剩余的14C-PBT434 pmol计算出浓度。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 12 周龄，25 克，雄性 C57BL/6 J 小鼠（6-OHDA 中毒模型）[1]
剂量： 30 mg/kg 给药途径： 口服；每日一次，持续 21 天（损伤诱导后 3 天开始） 实验结果： 可预防 6-OHDA 引起的神经元丢失，在细胞死亡的初始阶段后，可保留高达 75% 的 SNpc 神经元（尼氏染色阳性和酪氨酸羟化酶 (TH) 阳性神经元）。 动物/疾病模型： 12 周，25 克，雄性 C57BL/6J 小鼠（MPTP 模型）[1] 剂量： 1、3、10、30、80 mg/kg 给药途径： 口服；每日一次，持续21天（损伤诱导后24小时开始） 实验结果： SNpc细胞存活率增加，旋转行为有改善的趋势，轴突膨体数量显著增加，突触前标记物突触素（SYNP）水平呈剂量依赖性下降，从而阻止了其下降。 6-OHDA中毒模型[1] 将小鼠用2.5-3%异氟烷麻醉后，固定于立体定位仪上，并按先前所述，向右侧SNpc注射3.0 μg 6-OHDA。在6-OHDA损伤三天后，使用自动旋转计数器系统测量苯丙胺（5 mg/kg）诱导的旋转行为。损伤后一天即可观察到明显的旋转行为。仅纳入第3天每小时旋转次数在200至450次之间的小鼠进行试验。随后，将小鼠随机分配至PBT434治疗组或假手术-载体（VEH）治疗组。PBT434治疗组在损伤诱导后3天开始灌胃，剂量为30 mg/kg/天。实验人员对各组的治疗分配情况不知情。小鼠在6-OHDA损伤后21天进行复测，然后处死。MPTP模型[1] 小鼠接受急性给药方案，即每隔两小时注射四次MPTP。每个实验组均包含经MPTP损伤的动物，这些动物被随机分为假手术组（仅注射赋形剂）和药物治疗组（30 mg/kg/天的PBT434，从MPTP损伤后24小时开始给药，直至第21天处死）。实验人员对各组的治疗分配情况不知情。其中一组动物的小鼠接受了PBT434类似物（PBT434-met，30 mg/kg/天）的治疗，该类似物不具备金属结合能力，作为对照。 犬脑脊液采集[1] 在对10月龄比格犬进行为期28天的毒理学研究结束后，采集了脑脊液（CSF）。 PBT434每日一次经口灌胃给药，持续28天，剂量如下：载体对照组（0 mg/kg/天）、10 mg/kg/天、30 mg/kg/天和50 mg/kg/天。每个治疗组包括3只雄性犬和3只雌性犬。在尸检时，将脑脊液提取到含有10 μL丁基羟基甲苯的收集管中，用干冰冷冻，并在−80 °C下保存直至分析。任何出现溶血迹象的样本均被排除，因为血液中可能存在α-突触核蛋白污染[52]。 大鼠脑脊液采集[1] 通过立体定位手术将套管插入野生型大鼠的侧脑室。使用啮齿动物微透析杯（BASi，n = 8）进行脑脊液采样。采集基线脑脊液样本后，以30 mg/kg的剂量灌胃给予动物PBT434。分别于灌胃后1小时和4小时采集脑脊液样本。采用Western blot法分析样本中α-突触核蛋白的存在情况，具体方法如前所述。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
遗传学和实验证据强烈表明α-突触核蛋白与帕金森病（PD）的病因密切相关，因此该蛋白被认为是潜在的疾病修饰疗法的靶点。随着人们对铁在PD病理过程中作用的认识不断加深，越来越多的证据表明，选择性靶向这种普遍存在的生物金属可以调节α-突触核蛋白的水平。PBT434的研发正是为了利用这一治疗契机，除了其潜在的临床应用价值外，它还将成为研究金属在调节α-突触核蛋白水平中的作用、氧化应激作为黑质病变启动和持续因素的作用以及神经元铁转运机制其他成分参与其中的重要工具。目前用于治疗PD和非典型帕金森综合征的疗法充其量只能提供有限的症状缓解，而无法改变疾病的进展。在三种不同的帕金森病动物模型中，PBT434 对运动功能、神经病理学和疾病状态生化标志物的有益作用表明其具有疾病修饰的潜力。[1] 总之，我们提供了体外证据，证明 PBT434 可以穿过血脑屏障进入脑间质，这与早期临床试验的结果一致。此外，我们发现，虽然 PBT434 对 LIP 和下游铁依赖性蛋白表达的调控具有中等程度的影响，但与高亲和力铁螯合剂不同，它不会显著干扰正常的细胞生理功能。此外，PBT434 能够结合并重新分布细胞外离子 Fe2+，从而限制与这种促氧化剂及其在细胞毒性蛋白聚集中的作用相关的下游氧化应激。这种新颖的作用机制为继续开发 PBT434 作为治疗与金属积累相关的神经退行性疾病的药物提供了令人信服的理由。[2]
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| 分子式 |
C13H17CL2N3O5S
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|---|---|
| 分子量 |
398.262180089951
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| 精确质量 |
397.026
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| 元素分析 |
C, 39.21; H, 4.30; Cl, 17.80; N, 10.55; O, 20.09; S, 8.05
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| CAS号 |
2387898-69-1
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| 相关CAS号 |
1232840-87-7; 2387898-69-1 (mesylate); 1232841-78-9 (HBr)
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| PubChem CID |
139593496
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
128Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
484
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S(O)(=O)(=O)C.O=C1N(C(CNCC)=NC2=C(C(Cl)=CC(Cl)=C12)O)C
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| InChi Key |
UBTJWJNTOFSHON-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H13Cl2N3O2.CH4O3S/c1-3-15-5-8-16-10-9(12(19)17(8)2)6(13)4-7(14)11(10)18;1-5(2,3)4/h4,15,18H,3,5H2,1-2H3;1H3,(H,2,3,4)
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| 化学名 |
5,7-dichloro-2-(ethylaminomethyl)-8-hydroxy-3-methylquinazolin-4-one;methanesulfonic acid
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| 别名 |
PBT434 MESYLATE; PBT434 (methanesulfonate); 2387898-69-1; ATH434 MESYLATE; ATH-434 MESYLATE; ATH434; ATH-434; ATH 434; PBT-434 MESYLATE; 826P1VAG3U; EX-A8324;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5109 mL | 12.5546 mL | 25.1092 mL | |
| 5 mM | 0.5022 mL | 2.5109 mL | 5.0218 mL | |
| 10 mM | 0.2511 mL | 1.2555 mL | 2.5109 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
MK-7337
Synucleozid-2.0
α-synuclein-IN-16
Squalamine phosphate
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