| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Receptor-interacting protein 1 (RIP1) kinase. Biochemical apparent inhibition constant (Kiapp) values: human RIP1 (0.00071 μM), cynomolgus monkey RIP1 (0.0013 μM), mouse RIP1 (4.5 μM), rat RIP1 (>10 μM). [3]
Surface plasmon resonance (SPR) determined overall dissociation constant (Kd) of 0.462 nM for the tightly bound complex at 10°C. [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在TNF、BV6和zVAD（TBZ）诱导的人结肠腺癌HT29细胞坏死性凋亡模型中：EC50 = 0.0063 μM, EC90 = 0.020 μM。[3]
在小鼠L929细胞坏死性凋亡模型中：IC50 = 0.12 μM, IC90 = 0.74 μM。[3] 在大鼠H9c2细胞坏死性凋亡模型中：IC50 = 0.79 μM, IC90 = 1.2 μM。[3] 在TBZ刺激的原代人结肠细胞中抑制细胞死亡：IC50 = 0.00072 μM, IC90 = 0.0030 μM。[3] 在原代小鼠结肠细胞中抑制细胞死亡：IC50 = 0.072 μM, IC90 = 0.64 μM。[3] 在原代人肾上皮细胞中抑制细胞死亡：IC50 = 0.0026 μM, IC90 = 0.024 μM。[3] 阻断RIP1自身磷酸化，但即使在高达200 μM的浓度下也不影响RIP1蛋白稳定性或TNF刺激的NF-κB和MAPK（例如，IκBα, p38, JNK, ERK磷酸化）激活。[3] 在人全血离体实验中，抑制了TBZ刺激的CCL3 (MIP-1α)、CCL4 (MIP-1β) 和IL-1β的产生。IC50/IC90值：CCL3 (0.0018 ± 0.00034 / 0.0069 ± 0.0027 μM)，CCL4 (0.0018 ± 0.00049 / 0.0068 ± 0.0027 μM)，IL-1β (0.00086 ± 0.00021 / 0.0046 ± 0.00077 μM)。[3] 在一项健康志愿者1期研究中，离体刺激全血TBZ显示，GDC-8264能迅速且完全地抑制CCL4的释放。所有单次给药剂量组（5-225 mg）在给药后1.5小时均观察到超过90%的CCL4抑制率，并且在每日给药（50和100 mg）的14天内持续抑制。通过PK-PD建模估计的CCL4抑制IC50为0.58 ng/mL (~1.8 nM)。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在TNF加zVAD（TZ）驱动的系统性炎症反应综合征（SIRS）小鼠模型（以体温为主要终点）中，口服GDC-8264可剂量依赖性地抑制TZ诱导的体温过低。总血浆EC20 = 0.43 μM, EC50 = 1.73 μM, EC90 = 15.54 μM。[3]
在肠道上皮细胞（IEC）特异性NEMO敲除（NEMO IEC-cKO）的小鼠模型（该模型会发生RIP1激酶依赖的结肠炎和回肠炎）中，每日两次（BID）口服GDC-8264（1, 5, 15, 50 mg/kg），持续5天，可剂量依赖性地抑制结肠和回肠隐窝损伤及炎症。50 mg/kg BID剂量几乎完全保护了NEMO缺陷的肠道。[3] |
| 酶活实验 |
RIP1生化实验通过荧光偏振（FP）法检测RIP1催化ATP水解为ADP的过程。反应混合物包含HEPES缓冲液（pH 7.5）、MgCl2、二硫苏糖醇、Brij-35、50 μM ATP和50 nM总RIP1蛋白。待测抑制剂（GDC-8264）在11个浓度下进行二重复测试，最终DMSO浓度为0.5%。通过向抑制剂/ATP混合物中加入RIP1酶启动反应，在室温下孵育2小时，然后加入EDTA终止反应。随后加入含有ADP特异性抗体和荧光ADP示踪剂的ADP检测混合物。孵育1小时后测量FP值。ADP浓度通过标准曲线计算。将相对活性数据拟合到紧密结合的Morrison方程以计算表观抑制常数（Kiapp）。[3]
在10°C下进行表面等离子共振（SPR）追踪实验以确定结合动力学。GDC-8264与RIP1的结合遵循两步机制：首先形成一个中等亲和力的起始复合物（Kd = 188 nM, kon = 2.46 x 10^5 M^-1 s^-1, koff = 4.87 x 10^-2 s^-1），然后异构化为紧密结合复合物（kf = 3.90 x 10^-2 s^-1, kr = 7.93 x 10^-5 s^-1）。总亲和力（Kd）为0.462 nM，紧密结合复合物的解离半衰期（t1/2）为4.61小时。[3] 使用包含468种人激酶的结合面板（KINOMEscan）在10 μM GDC-8264下评估激酶选择性。对于抑制率≥50%的激酶，进行后续Kd测定。GDC-8264显示出高度选择性，对RIP1的Kd为0.0031 μM，而对其他激酶（如Abl1, GRK1, MEK5, NEK3, PI3KCA, PIP5K1C, TBK1）的Kd值均 >10 μM。在另一个包含220种激酶的面板（SelectScreen）中，10 μM浓度下未观察到任何激酶被抑制≥50%。[3] |
| 细胞实验 |
使用已建立的细胞系（人HT29、小鼠L929、大鼠H9c2）和原代细胞评估细胞坏死性凋亡。将细胞接种于384孔板并过夜孵育。通过加入诱导剂混合物来诱导坏死性凋亡：对于人和大鼠细胞，使用TNF (20 ng/mL)、IAP拮抗剂BV6 (2 μM)和广谱caspase抑制剂zVAD (20 μM)；对于小鼠细胞，使用TNF (1 ng/mL)和zVAD (20 μM)。立即使用声波液体处理器对细胞进行10点浓度梯度的GDC-8264或DMSO（终浓度0.2%）处理。孵育18小时（人/小鼠）或24小时（大鼠）后，加入CellTiter-Glo试剂以量化ATP水平作为细胞活力的指标。读取发光信号。将诱导剂导致的近乎完全的细胞死亡设为0%活力，将完全挽救设为100%活力。通过将数据拟合到四参数浓度-反应曲线来计算IC50和IC90值。[3]
对于Western blot分析，使用含有Triton X-100、Tris-HCl、NaCl、EDTA和蛋白酶/磷酸酶抑制剂的裂解液裂解细胞。离心裂解物，使用针对RIP1、磷酸化RIP1、IκBα、磷酸化p38、p38、磷酸化JNK、JNK、磷酸化ERK、ERK和肌动蛋白的抗体，通过标准Western blotting分析上清液。[3] 在健康志愿者1期研究中，采用了离体全血刺激实验。收集血样，用TBZ（TNF-α, BV6, Z-VAD）刺激坏死性凋亡通路。测量RIP1通路激活的下游生物标志物CCL4的水平。通过归一化至基线并调整为最大抑制来计算CCL4的抑制百分比。[2] |
| 动物实验 |
对于TZ诱导的SIRS模型，小鼠（n=5/组）在静脉注射（IV）小鼠TNF（300 μg/kg）和zVAD-FMK（10 mg/kg）前15分钟，口服（PO）给予GDC-8264（配制于10% DMSO/MCT中）。在诱导后2小时和4小时使用红外耳温计测量体温。体温低于23.6°C或濒死的小鼠被实施安乐死。[3]
对于NEMO IEC-cKO结肠炎/回肠炎模型，在第1-3天用他莫昔芬（80 mg/kg, IP）处理Nemo fl/fl Villin.creERT2小鼠以诱导NEMO缺失。从第2-6天，每日两次（BID）口服（PO）给予GDC-8264（配制于10% DMSO/MCT中），剂量为1, 5, 15或50 mg/kg。在第7天，收集回肠和结肠用于组织学分析。组织切片以盲法评估隐窝损伤和炎症程度。[3] 在临床前物种的药代动力学研究中，用于口服（PO）给药的GDC-8264配制为1%甲基纤维素的水悬浮液。用于静脉注射（IV）给药的，则配制于10% DMSO、10% Cremophor EL的生理盐水中。[3] 在食蟹猴中进行了一项为期2周的初步毒性研究（2只/性别/组）。通过口服管饲法给予GDC-8264，剂量为0, 10, 25和75 mg/kg，每日一次，持续14天。动物年龄为37-56个月，雄性体重范围为3.1-3.8 kg，雌性为2.7-3.7 kg。[3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
临床前PK参数：C57BL/6小鼠（PO 5 mg/kg）：Cmax = 61.9 μM, AUC = 242 μM•hr，口服生物利用度（F）= 100%。IV (1 mg/kg)：CLp = 2.4 mL/min/kg, Vss = 0.84 L/kg, t1/2 = 12 h。[3]
Sprague-Dawley大鼠（PO 5 mg/kg）：Cmax = 20.2 μM, AUC = 110 μM•hr, F = 77%。IV (1 mg/kg)：CLp = 4.0 mL/min/kg, Vss = 2.59 L/kg, t1/2 = 10 h。[3] 比格犬（PO 2 mg/kg）：Cmax = 3.36 μM, AUC = 15.6 μM•hr, F = 82%。IV (0.5 mg/kg)：CLp = 6.5 mL/min/kg, Vss = 2.31 L/kg, t1/2 = 11 h。[3] 食蟹猴（PO 2 mg/kg）：Cmax = 17.1 μM, AUC = 71.9 μM•hr, F = 82%。IV (0.5 mg/kg)：CLp = 1.4 mL/min/kg, Vss = 0.32 L/kg, t1/2 = 5.4 h。[3] 在一项健康志愿者1期研究中，GDC-8264显示出剂量比例性的全身暴露量增加（5-225 mg）。平均终末半衰期为10-13小时。每日多次给药后（50和100 mg，持续14天），观察到有限的蓄积（蓄积比~1.4）。观察到极少的肾脏排泄（<剂量的0.2%）。高脂餐对PK参数无显著影响。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外安全性评估：在10 μM浓度下，GDC-8264对包含40个非激酶靶点（受体、离子通道、转运体）的面板未显示出显著的结合（>50%）。[3]
hERG通道抑制：1 μM时为2.3%，10 μM时为3.1%。[3] 人Nav1.5通道抑制：1 μM时为2.8%，10 μM时为5.3%。[3] 人Cav1.2通道抑制：1 μM时为0.9%，10 μM时为8.2%。[3] Ames II试验（±大鼠S9组分）结果为阴性，无遗传毒性。[3] HT-MNT微核试验（±大鼠S9组分）结果为阴性，无致染色体断裂性或非整倍体性。[3] 对人肝细胞无细胞毒性（IC50 > 100 μM）。[3] 药物相互作用（DDI）风险低 – 对CYP3A4, 1A2, 2C19, 2D6, 2D9无显著抑制作用（IC50 > 10 μM），且无时间依赖性抑制作用（IC50 > 10 μM）。[3] 在食蟹猴为期2周的毒性研究中，GDC-8264在0、10、25和75 mg/kg/天的口服剂量下耐受性良好。在临床观察、临床病理学或解剖病理学终点均未观察到不良发现。[3] 在健康志愿者1期研究中，GDC-8264治疗组的所有不良事件（AE）均为轻度。未发生死亡或严重不良事件。单次给药阶段（5-225 mg）最常见AE为接触性皮炎（15.8%）、头痛（15.8%）和恶心（13.2%）。多次给药阶段（50和100 mg，持续14天）最常见AE包括腹痛、腹泻、消化不良、头痛和头晕。GDC-8264组和安慰剂组的AE发生率相当。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Flizasertib 是一种小分子药物。其国际非专利名称 (INN) 前缀“-sertib”表明 Flizasertib 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。Flizasertib 目前正在临床试验 NCT06602453（一项评估 GDC-8264 在预防心脏手术相关急性肾损伤 (AKI) 和主要肾脏不良事件 (MAKE) 中的疗效和安全性的研究）中进行研究。Flizasertib 的单同位素分子量为 271.11 Da。Flizasertib 是一种口服有效的受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1 (RIPK1；受体相互作用蛋白 1；RIP1) 抑制剂，具有潜在的免疫调节和抗炎活性。口服弗利扎替尼可抑制RIP1介导的信号通路，从而保护肠道干细胞（ISCs），并预防急性移植物抗宿主病（GvHD）中RIP1介导的胃肠道（GI）损伤。RIP1在组织损伤和病原体识别引起的炎症和细胞死亡中发挥关键作用。
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| 分子式 |
C15H14FN3O
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|---|---|
| 分子量 |
271.289566516876
|
| 精确质量 |
271.112
|
| 元素分析 |
C, 66.41; H, 5.20; F, 7.00; N, 15.49; O, 5.90
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| CAS号 |
2268739-68-8
|
| PubChem CID |
137408242
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| 外观&性状 |
White to off-white solid at room temperature
|
| LogP |
2.5
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| tPSA |
47.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
395
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
C(C1CC1)(C1=NN2[C@H](C3=CC=CC=C3)C[C@H](F)C2=N1)=O
|
| InChi Key |
LMXPZWQVDDSYHH-RYUDHWBXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H14FN3O/c16-11-8-12(9-4-2-1-3-5-9)19-15(11)17-14(18-19)13(20)10-6-7-10/h1-5,10-12H,6-8H2/t11-,12-/m0/s1
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| 化学名 |
cyclopropyl-[(5S,7S)-7-fluoro-5-phenyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-b][1,2,4]triazol-2-yl]methanone
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| 别名 |
Flizasertib; GDC8264; GDC-8264; RG6287; 2268739-68-8;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~10 mg/mL (36.9 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6861 mL | 18.4305 mL | 36.8609 mL | |
| 5 mM | 0.7372 mL | 3.6861 mL | 7.3722 mL | |
| 10 mM | 0.3686 mL | 1.8430 mL | 3.6861 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Link: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT06602453
Conditions:Acute Kidney InjuryLink: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT05673876
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