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Dispase (Dispase I; Dispase II)

别名: Neutral protease, Paenibacillus polymyxa 微生物中性蛋白酶;中性蛋白酶 I;分散酶II;蛋白酶 来源于多粘芽孢杆菌;中性蛋白酶
目录号: V72387 纯度: 50u/mg solid min
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Dispase (Dispase II) 是一种中性蛋白酶，也是纤连蛋白和 IV 型胶原酶的强效蛋白酶。
Dispase (Dispase I; Dispase II) CAS号: 42613-33-2
产品类别: Endogenous Metabolite
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度/质量控制文件

纯度: 50u/ml solid min

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产品说明书
产品描述
Dispase (Dispase II) 是一种中性蛋白酶，也是纤连蛋白和 IV 型胶原酶的强效蛋白酶。分散酶可用于在培养物中将完整的表皮与真皮分离以及将完整的上皮片与基质分离。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
使用说明
 1.溶液制备
 1） 将适量本品冻干粉溶解于DPBS缓冲盐溶液（不含钙、镁离子）中，制备10mg/mL储备溶液，用0.22μM滤膜过滤灭菌;
2） 用DPBS将上述储备溶液稀释至工作溶液中使用。细胞分离常用的工作溶液浓度为0.6-2.4 U/mL。
注意：不建议使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
2.组织的解剖/分离
 1） 使用无菌刀或剪刀将组织切成3-4mm的组织块；
2） 用无菌PBS清洗组织；
3） 向组织块中加入分散II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），确保组织完全浸入分散溶液中；
4） 在37℃下孵育并缓慢搅拌，直至所有组织分离；
注：一般来说，对于难以分离的组织，分离可以在1小时内实现，但较长的孵育时间（如几个小时）不会显著影响细胞活性；
5） 如有必要，上述消化产物可以通过无菌不锈钢网过滤，以将单个细胞与残留的组织块分离。或者，在大块组织沉淀后，轻轻倒出上层细胞。如有必要，使用新鲜的分散溶液进一步分离残留组织；
6） 离心并沉淀细胞，然后弃掉酶溶液；
7） 将细胞颗粒重新悬浮在培养基中，并在正常条件下培养细胞。
3.细胞传代
 1） 将细胞浸入Dispase溶液（预热至37℃）中，在37℃下孵育5分钟；
2） 取出上述溶液，在37℃下继续孵育10分钟；
3） 在显微镜下观察细胞分离，如有必要，进一步孵育15分钟；
4） 将细胞悬浮在细胞培养基中，轻轻旋转以沉淀细胞。用培养基清洗细胞；
5） 用新鲜的细胞培养基重新悬浮细胞，并使用常规细胞板方法铺板。
体内研究 (In Vivo)
目前，从小鼠脑中分离小胶质细胞、星形胶质细胞和浸润性免疫细胞的技术难度是神经炎症研究的一个限制因素。脑隔离要求取决于细胞类型和动物年龄，但目前的脑分离程序标准化程度很低。缺乏全面的研究阻碍了优化方法的选择。因此，我们在这里对分离方法和基于Percoll的分离进行了比较分析，以确定联合分离健康小胶质细胞、星形胶质细胞和浸润白细胞的最有效方法；区分新生和成年小鼠脑。温和的机械解离和DNase I培养补充了木瓜蛋白酶或胶原酶II。Dispase II消化也可单独或联合使用。此外，比较了30%和30-70%Percoll梯度的细胞分离效率。在这些实验中，通过流式细胞术测量了新鲜分离细胞的细胞产量和完整性。我们发现木瓜蛋白酶消化结合dispase II，然后进行30%Percoll分离是获得小胶质细胞、星形胶质细胞和浸润免疫细胞混合物的最平衡方法；而添加dispase II对新生儿大脑没有好处。这些解离条件允许流式细胞术检测亚致死LPS注射引发的轻微神经胶质激活。总之，这里测试的酶和Percoll密度梯度对静息小胶质细胞、活化小胶质细胞/巨噬细胞、星形胶质细胞和浸润淋巴细胞的影响不同。此外，新生儿和成人的大脑对消化反应也截然不同。我们的研究强调了流式细胞术在优化提取后同时分析神经免疫细胞群的优势[2]。
细胞实验
Dispase是一种从多粘芽孢杆菌培养滤液中分离出来的中性蛋白酶，已被证明是一种快速、有效但温和的试剂，用于将完整的表皮与真皮分离，并将培养物中的完整上皮片与基质分离。在这两种情况下，它通过切割基底膜区域来实现分离，同时保持上皮细胞的存活率。由于尚不清楚基底膜区Dispase裂解的内容或位置，我们开展了研究以确定其底物特异性。使用纯化的基底膜成分和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，我们发现Dispase可以切割纤维连接蛋白和IV型胶原，但不能切割层粘连蛋白、V型胶原、血清白蛋白或转铁蛋白。Dispase对胶原的作用似乎对IV型胶原具有选择性，因为会形成几种稳定的降解产物，而该酶只能最低限度地降解I型胶原。在新生儿皮肤中，如电子显微镜所示，Dispase去除了富含IV型胶原蛋白的致密层，但保留了锚定原纤维（已知含有VII型胶原蛋白的结构）和表皮细胞。因为它的作用是如此有选择性，这表明Dispase可以作为解剖上皮间充质相互作用的有力工具[1]。
参考文献

[1]. Dispase, a neutral protease from Bacillus polymyxa, is a powerful fibronectinase and type IV collagenase. J Invest Dermatol. 1989 Aug;93(2):287-90.

[2]. Dissociation of neonatal and adult mice brain for simultaneous analysis of microglia, astrocytes and infiltrating lymphocytes by flow cytometry. IBRO Rep. 2020 Jan 13;8:36-47.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
CAS号
42613-33-2
外观&性状
White to off-white solid powder
别名
Neutral protease, Paenibacillus polymyxa
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: 25 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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