Laccase (Denilite IIS)

别名: 漆酶;对苯二酚氧化酶;Laccase 漆酶;胃蛋白酶;漆酶 来源于云芝
目录号: V72422 纯度: ≥98%
漆酶(Denilite IIS)是一种多铜氧化酶(MCO),广泛存在于微生物、植物和真菌中,可以催化多种酚类化合物的单电子氧化。
Laccase (Denilite IIS) CAS号: 80498-15-3
产品类别: Endogenous Metabolite
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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500mg
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产品描述
漆酶(Denilite IIS)是一种多铜氧化酶(MCO),广泛存在于微生物、植物和真菌中,能够催化多种酚类化合物的单电子氧化。漆酶可以促进单链木质素的氧化偶联,在木质素的形成和生物降解中发挥重要作用。它还可用于食品聚合物的交联。
漆酶(Denilite IIS)(CAS号:80498-15-3)是一种多铜氧化酶(MCO),广泛存在于微生物、植物和真菌中,能够催化多种酚类和芳香族化合物的单电子氧化,同时将氧气还原为水。该酶是一种蓝铜蛋白氧化酶。漆酶是一类低特异性的多铜蛋白,可作用于邻苯二酚和对苯二酚,也常作用于氨基苯酚和苯二胺。该酶催化以下反应:4 苯二酚 + O₂ = 4 苯并半醌 + 2 H₂O。漆酶参与木质素降解和细胞壁合成,并具有食品聚合物交联的潜力。它促进木质素形成过程中单木质素的氧化偶联,并在木质素降解中发挥作用。该酶还具有抗菌活性和细胞毒性,可用于癌症研究。漆酶广泛应用于各种工业领域,包括生物修复、纸浆和造纸加工、纺织染料脱色以及食品加工。一个酶活性单位 (U) 指的是在 pH 4.5 和 25°C 条件下,每分钟转化 1 μmol 邻苯二酚所需的酶量。该酶通常以高纯度研究级制剂的形式供应。
生物活性&实验参考方法
靶点
Laccase targets phenolic and aromatic compounds as its substrates. The enzyme catalyzes the one-electron oxidation of these substrates, generating reactive radicals that can undergo further reactions such as polymerization, depolymerization, or cross-linking. The enzyme's active site contains multiple copper ions that are involved in the electron transfer process. Laccase reduces molecular oxygen to water, accepting four electrons from four substrate molecules. The enzyme has low substrate specificity, acting on both o- and p-quinols, aminophenols, and phenylenediamine. In lignin degradation, laccase targets the phenolic subunits of lignin, generating radicals that lead to the breakdown of the lignin polymer. In cell wall synthesis, laccase promotes the oxidative coupling of monolignin to form lignin. The enzyme's antimicrobial activity is thought to be mediated by the generation of reactive oxygen species and the oxidation of microbial cell wall components. The enzyme's cytotoxicity against cancer cells may be due to the generation of reactive oxygen species and the induction of oxidative stress.
体外研究 (In Vitro)
漆酶在体外表现出抗菌活性和细胞毒性,可用于癌症研究。该酶催化多种酚类和芳香族化合物的氧化,可通过分光光度法进行测定。例如,漆酶活性通常使用ABTS(2,2'-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))、丁香醛嗪或邻苯二酚等底物进行测定。这些底物的氧化会产生有色产物,可在特定波长下进行测定。在抗菌试验中,漆酶被用于测试其对多种细菌和真菌菌株的抑制能力。在癌症研究中,漆酶被用于测试其对癌细胞系的细胞毒性。该酶降解木质素和其他酚类化合物的能力可通过体外试验进行研究,试验中使用木质素模型化合物或天然木质素底物。酶的活性受 pH 值、温度以及 ABTS 或丁香醛嗪等介质的影响。
体内研究 (In Vivo)
漆酶在体内参与木质素降解、细胞壁合成,并具有食品聚合物交联的潜力。该酶由多种微生物产生,尤其是真菌和细菌,并参与植物细胞壁成分的降解。在真菌中,漆酶参与木质素的降解,木质素是木材的主要成分,对生态系统中的碳循环至关重要。该酶还参与细胞壁成分的合成,包括单木质素氧化偶联形成木质素。在工业应用中,漆酶用于生物修复以降解环境污染物,用于纸浆和造纸加工以去除木浆中的木质素,用于纺织染料脱色,以及用于食品加工以交联食品聚合物。该酶的体内应用主要集中在工业领域,而非治疗领域。然而,其抗菌和细胞毒活性表明其具有潜在的治疗应用价值,尽管这些应用尚未在体内得到广泛研究。
酶活实验
漆酶的体外酶活性测定通常使用显色或荧光底物。常用的底物是ABTS(2,2'-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)),它被漆酶氧化成在420 nm处有吸收的绿色自由基阳离子。另一种常用的底物是丁香醛嗪,它被氧化成在530 nm处有吸收的紫色产物。邻苯二酚也可用作底物,其氧化产物在400 nm处进行测定。典型的测定方案是将漆酶(0.01-0.1 U/mL)与底物(0.1-10 mM)在合适的缓冲液(例如,pH 4.5-5.5的乙酸钠缓冲液)中于25-37°C下孵育。监测吸光度随时间的变化,并根据反应的初始线性速率计算酶活性。一个酶活性单位 (U) 对应于在 pH 4.5 和 25°C 条件下每分钟转化 1 μmol 邻苯二酚所需的酶量。为了进行动力学表征,在不同的底物浓度下进行测定,并通过 Lineweaver-Burk 图确定动力学参数(Km、Vmax)。抑制研究通过在加入底物之前将酶与潜在抑制剂预孵育来进行。
细胞实验
体外细胞实验中,漆酶的活性检测通常使用癌细胞系,以研究其细胞毒性。细胞在适宜的培养基中培养,并用不同浓度(通常为0.1-10 U/mL)的漆酶处理24-72小时。处理后,采用MTT、CCK-8或LDH检测法评估细胞活力。细胞凋亡可通过流式细胞术(Annexin V/碘化丙啶染色)或检测caspase活性来评估。活性氧(ROS)的生成则使用荧光探针(例如DCFH-DA)进行检测。抗菌活性检测中,细菌或真菌在漆酶存在下培养,并通过测量光密度或菌落计数来监测微生物生长。每个实验均设置适当的对照(未处理的细胞、溶剂对照),并重复三次以确保统计学可靠性。在这些实验中,漆酶通常溶解于缓冲液(例如,pH 4.5-5.5的乙酸钠缓冲液)中。
动物实验
由于漆酶主要用于工业和科研领域,而非治疗用途,因此利用漆酶进行的体内动物实验十分有限。然而,已有研究探索了漆酶在生物修复和其他环境应用方面的潜力。在这些研究中,漆酶通常被应用于受污染的土壤或水体,并随时间推移测量污染物的降解情况。在某些情况下,漆酶已被封装或固定化,以提高其稳定性和可重复使用性。漆酶的潜在治疗应用,例如抗菌或抗癌治疗,尚未在体内得到充分研究。需要开展进一步的体内研究,以全面表征漆酶在治疗应用中的药代动力学和药效学特性。
药代性质 (ADME/PK)
漆酶的药代动力学特性并不适用,因为该酶主要用作研究和工业工具,而非治疗药物。漆酶是一种蛋白质酶,口服给药会被降解,肠外给药则可能具有免疫原性。在工业应用中,通常将漆酶固定化以提高其稳定性和可重复使用性。漆酶的活性受pH值、温度和介质的影响。漆酶在酸性pH值(pH 4.5-5.5)和中等温度(25-50°C)下活性最高。固定化或添加稳定剂可以提高漆酶的稳定性。与其他酶一样,漆酶的药代动力学特征是清除迅速,且体内给药可能具有免疫原性。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
漆酶的毒理学特性总体良好,因为该酶广泛应用于工业领域,且被认为对这些用途安全。漆酶由多种微生物产生,尤其是真菌和细菌,并且天然存在于环境中。然而,漆酶对人类的潜在毒性尚未得到广泛研究。在基于细胞的试验中,漆酶已被证明对癌细胞具有细胞毒活性,这表明它可能具有作为抗癌剂的潜力。然而,这种细胞毒性也可能对正常细胞构成风险。如果漆酶被用作治疗剂,其免疫原性是一个潜在的问题。漆酶被归类为研究用化学品,尚未获准用于人体。处理漆酶时应遵守标准安全预防措施,包括使用适当的个人防护装备。与所有酶一样,应避免吸入和皮肤接触。
参考文献
[1]. Grzegorz Janusz, et al. Laccase Properties, Physiological Functions, and Evolution. Int J Mol Sci. 2020 Jan 31;21(3):966.
其他信息
一种含铜的氧化还原酶催化4-苯二醇氧化为4-苯二酮。它对各种邻位和对位醌也具有活性。该酶主要存在于真菌中,参与木质素降解、色素生物合成和木质素衍生物的解毒。
漆酶(Denilite IIS)是一种宝贵的研究和工业酶,应用于生物修复、纸浆和造纸加工、纺织染料脱色和食品加工。它是一种多铜氧化酶,广泛存在于微生物、植物和真菌中,催化各种酚类和芳香化合物的一电子氧化。该酶是一组低特异性的多铜蛋白,作用于邻位和对位醌,通常也作用于氨基酚和苯二胺。漆酶参与木质素降解、细胞壁合成,并在食品聚合物交联中具有潜力。它还表现出抗微生物活性和细胞毒性,可用于癌症研究。一个单位(U)对应于在pH 4.5和25°C下每分钟转化1微摩尔的焦香豆醇的酶量。该酶未获任何临床适应症批准,仅限于研究和工业使用。其多功能性和广泛的底物特异性使其成为各种生物技术应用的宝贵工具。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C9H13NO
分子量
151.205622434616
精确质量
1071.472
CAS号
80498-15-3
PubChem CID
3153309
外观&性状
Off-white to light yellow solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
1611.6±65.0 °C at 760 mmHg
闪点
928.5±34.3 °C
蒸汽压
0.0±0.6 mmHg at 25°C
折射率
1.566
LogP
-1.33
tPSA
22
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
1
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
11
分子复杂度/Complexity
147
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=CC1C=C(C)N(CC)C=1C
InChi Key
NWDZDFOKSUDVJV-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C9H13NO/c1-4-10-7(2)5-9(6-11)8(10)3/h5-6H,4H2,1-3H3
化学名
1-ethyl-2,5-dimethylpyrrole-3-carbaldehyde
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 6.6133 mL 33.0666 mL 66.1332 mL
5 mM 1.3227 mL 6.6133 mL 13.2266 mL
10 mM 0.6613 mL 3.3067 mL 6.6133 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们