| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Branched ionizable lipid for mRNA delivery
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| 体外研究 (In Vitro) |
近年来，信使RNA （mRNA）作为一种具有预防和治疗一系列惊人疾病潜力的多功能治疗药物而受到关注。mRNA药物的商业开发已经投入了数十亿美元，正在进行的临床试验侧重于疫苗（例如流感和寨卡病毒）和癌症免疫疗法（例如骨髓瘤、白血病和胶质母细胞瘤）。尽管在体外转录mRNA的设计方面取得了重大进展，既能保持效力，又能最大限度地减少不必要的免疫反应，但mRNA药物的广泛使用需要开发安全有效的药物递送载体。不幸的是，由于对运载工具的分子特性如何赋予功效的理解不足，运载工具的发展一直受到阻碍。
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| 体内研究 (In Vivo) |
只有建立了安全有效的给药系统，mRNA治疗的潜力才能实现。不幸的是，由于对运载工具的分子特性如何赋予功效的理解不足，运载工具的发展受到阻碍。在这里，一个小的类脂材料库被用来阐明结构-功能关系，并确定一个以前未被认识的参数-脂质纳米颗粒表面电离-与mRNA递送效率相关。文库中两种最有效的材料306O10和306Oi10在单次0.75 mg kg-1 mRNA剂量后诱导小鼠大量荧光素酶表达。这些脂质分子有十个碳的尾巴和相同的分子量，唯一的区别是306O10的尾巴是直的，而306O10的尾巴有一个单碳的分支。值得注意的是，这种结构上的微小差异使3060年的疗效提高了10倍。这种支尾类脂的效力增强是由于其在内体后期pH为5.0时的强表面电离作用。二级类脂库证实，Oi10材料比含有线性尾的类脂体电离更强，传递mRNA更有效。总之，这些数据强调了脂质化学对mRNA传递过程的精细控制，并表明支尾脂质促进了动物的蛋白质表达。［2］
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| 酶活实验 |
LNP pKa和表面电离测量。[2]
LNP表面pKa测定如前所述[20]。简单地说，将150mm氯化钠、20mm磷酸钠、20mm乙酸铵和25mm柠檬酸铵组成的缓冲溶液滴定至pH值范围为2至12，增量为0.5。在黑色96孔板中，每种pH溶液各250 "L，一式三份。每孔加入5”L LNP， mRNA浓度为0.1 mg/mL。每孔加入10 "L 0.16 mM的2-（对甲苯基）萘-6-磺酸原液，使TNS的最终浓度为6 "M.使用BioTek Synergy H1微孔板读取器在322 nm的激发和431 nm的发射下测量荧光强度。假设最大荧光值代表100%胺质子化，而最小荧光值代表0%胺质子化。LNP表面pKa为发生50%胺质子化的pH值。应该注意的是，荧光值的绝对值将取决于平板阅读器的设置，包括增益。当比较不同的纳米颗粒配方时，一定要使用相同的设置。 |
| 细胞实验 |
体外mRNA传递。[2]
将HeLa细胞（ATCC）置于高葡萄糖Dulbecco 's Modified Eagles培养基中，在37℃和5% CO2条件下，添加10%胎牛血清（按体积计）、20 U/mL青霉素和20 U/mL链霉素。转染前6- 8小时，将细胞接种于白色96孔板中，密度为每孔15000个细胞，接种于180”L培养基中。将携带未修饰的编码萤火虫荧光素酶mRNA的LNPs以每孔100 ng （0.81 nM）的剂量转染细胞。Lipofectamine MessengerMax是根据制造商的说明配制的。萤火虫荧光素酶活性是用Bright-Glo！荧光素酶检测系统转染后24小时。 |
| 动物实验 |
体内生物分布研究。[2]
所有动物实验均按照机构批准的方案（IACUC）进行。雌性 C57BL/6 小鼠尾静脉注射载有 Cy5 标记的荧光素酶 mRNA (m5C/#) 的 LNP，剂量为 0.75 mg/kg。注射后1小时处死小鼠，取出胰腺、脾脏、肝脏、肾脏、心脏和肺脏，使用IVIS™成像系统在649 nm激发波长和670 nm发射波长下进行Cy5荧光成像。使用Living Image™软件[2]通过感兴趣区域分析确定总辐射效率[(p/s)/("W/cm2 )]。 共聚焦显微镜。[2] 雌性C57BL/6小鼠（查尔斯河实验室）经尾静脉注射携带花青素5荧光素酶mRNA (m5C/#)（TriLink Biotechnologies）的脂质纳米颗粒，剂量为0.75 mg/kg。注射后1小时处死小鼠，取出脾脏和肝脏。将肝脏和脾脏组织固定于4%甲醛去离子水中24小时，然后用去离子水洗涤三次。 PBS。将组织切片，并用 0.1% Triton X-100 的 PBS 溶液透化 3-5 分钟。PBS 洗涤两次后，将样品与 Alexa Fluor 488 鬼笔环肽（1:40 稀释）和 Hoeschst 33342（1:2000 稀释）在摇床上孵育过夜。PBS 洗涤两次后，将样品封片于载玻片上，并使用蔡司 LSM 700 共聚焦显微镜和 63 倍物镜进行成像。 体内荧光素酶 mRNA 递送。[2] 使用至少 6 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠。小鼠经尾静脉注射裸露的 mRNA（阴性对照）或携带荧光素酶编码 mRNA 的脂质纳米颗粒（LNP），剂量为 0.75 mg/kg（除非另有说明）。所有体内实验中，mRNA 均用 5-甲氧基尿苷进行碱基修饰。 （mo5U）。在每次成像时间点前15分钟，小鼠腹腔注射130 μL浓度为30 mg/mL的D-荧光素。小鼠用异氟烷麻醉（诱导麻醉浓度为4%，维持麻醉浓度为2%，Patterson Veterinary公司），并使用IVIS成像系统对小鼠腹侧进行生物发光成像。或者，在注射D-荧光素15分钟后，处死小鼠，取出胰腺、脾脏、肝脏、肾脏、心脏和肺脏，并使用IVIS成像系统进行生物发光成像。使用 Living Image 软件通过感兴趣区域分析确定总发光通量（光子/秒）。 体内促红细胞生成素 mRNA 递送。[2] 雌性 C57BL/6 小鼠尾静脉注射携带促红细胞生成素 mRNA (mo5U) 的脂质纳米颗粒 (LNP)，剂量为 0.75 mg/kg。注射后 3、6 和 24 小时，通过颌下静脉采集血样。将血样置于 BD Microtainer 血清分离管中，以 14,000 rpm 离心 10 分钟分离血清。血清稀释 1:1000 后，使用人促红细胞生成素 Quantikine IVD ELISA 试剂盒测定促红细胞生成素浓度。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
最近发现，一类被称为类脂质的脂质体可以制成脂质纳米颗粒（LNP），这些颗粒能够在体外和体内高效递送多种核酸。本文研究了这些材料在多种细胞类型和小鼠体内递送信使RNA（mRNA）的应用。通过合成包含400种类脂质体的化合物库，我们发现材料的化学性质对体外mRNA递送效率有显著影响。利用包含11种类脂质体的较小化合物库，我们证明由这些材料制备的LNP能够高效地将mRNA递送到小鼠的多种器官。化合物库中递送效率最高的两种材料306O10和306Oi10均具有10个碳原子的尾部，分子量相同，唯一的区别在于306O10的尾部是直链，而306Oi10的尾部有一个单碳原子的分支。值得注意的是，这种微小的结构差异使306Oi10的疗效提高了10倍。这种支链尾脂质体的增强效力归因于其进入靶细胞内体隔室后发生的强表面电离。我们还证明，在小鼠体内，递送顶部脂质纳米颗粒306Oi10可实现比两种金标准脂质C12-200和DLin-MC3-DMA更高的蛋白质表达水平。此外，我们还证明，该材料具有足够的效力，可在同一制剂中封装和递送三种不同长度的mRNA。而且，306Oi10可共递送Cas9 mRNA和单向导RNA（sgRNA），从而促进小鼠肝脏中CRISPR介导的基因编辑。静脉注射该材料也不会显著增加血清细胞因子或IgG水平，也不会引起肝毒性（组织学检测结果）。最后，我们探讨了mRNA核苷修饰对小鼠体内蛋白质表达的影响。具体而言，我们通过使用四种分别靶向肝脏、脾脏或肺脏的脂质纳米颗粒（LNP）递送多种修饰的mRNA，来探究递送载体对mRNA修饰效率的影响。结果表明，递送载体对修饰mRNA的效率有显著影响。我们还发现，大部分蛋白质表达增强发生在脾脏，这是由于该器官细胞中转染效率的提高以及翻译活性的增强所致。[1]
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| 分子式 |
C59H115N3O8
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|---|---|
| 分子量 |
994.56
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| 精确质量 |
993.868
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| CAS号 |
2322290-93-5
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| PubChem CID |
146204786
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow ointment
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| LogP |
17.2
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| tPSA |
115
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
56
|
| 重原子数目 |
70
|
| 分子复杂度/Complexity |
1040
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(CCN(CCCN(CCCN(CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)C)CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)OCCCCCCCC(C)C
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| InChi Key |
BPPZRZOKGADTQE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C59H115N3O8/c1-52(2)32-22-14-10-18-26-48-67-56(63)36-44-61(45-37-57(64)68-49-27-19-11-15-23-33-53(3)4)42-30-40-60(9)41-31-43-62(46-38-58(65)69-50-28-20-12-16-24-34-54(5)6)47-39-59(66)70-51-29-21-13-17-25-35-55(7)8/h52-55H,10-51H2,1-9H3
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| 化学名 |
8-methylnonyl 3-[3-[3-[bis[3-(8-methylnonoxy)-3-oxopropyl]amino]propyl-methylamino]propyl-[3-(8-methylnonoxy)-3-oxopropyl]amino]propanoate
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| 别名 |
306Oi10; 2322290-93-5; SCHEMBL21504882; 306Oi10?;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0055 mL | 5.0273 mL | 10.0547 mL | |
| 5 mM | 0.2011 mL | 1.0055 mL | 2.0109 mL | |
| 10 mM | 0.1005 mL | 0.5027 mL | 1.0055 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
DOPE-C8
1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-PA ammonium salt
Lipid PPz-2R1
Chol-mPEG2000
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