| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Branched ionizable lipid for mRNA delivery
None (excipient). 306Oi10 LNPs target the liver after systemic administration; the ionization behavior is pH-dependent, with the lipidoid remaining neutral at physiological pH (7.4) and becoming positively charged in acidic endosomal compartments. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
近年来，信使RNA（mRNA）作为一种用途广泛的治疗手段，因其在预防和治疗多种疾病方面的潜力而备受关注。数十亿美元已被投入到mRNA药物的商业开发中，目前正在进行的临床试验主要集中在疫苗（例如流感疫苗和寨卡病毒疫苗）和癌症免疫疗法（例如多发性骨髓瘤、白血病和胶质母细胞瘤）方面。尽管在体外转录mRNA的设计方面已取得显著进展，既能保持其效力，又能最大限度地减少不必要的免疫反应，但mRNA药物的广泛应用仍需要开发安全有效的药物递送载体。然而，由于对载体分子特性如何赋予其疗效的理解不足，递送载体的开发一直受阻。[1]
306Oi10 LNPs在体外展现出高效的mRNA封装和转染能力。用编码报告蛋白（如荧光素酶或GFP）的306Oi10 LNPs孵育的人类细胞（例如HEK293、HeLa细胞）显示出高表达水平，在某些研究中优于几种基准可电离脂质。其表面pKa值为6.4，有利于mRNA从内体逃逸，从而促进胞质递送。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
只有建立安全有效的递送系统，mRNA疗法的潜力才能得以充分发挥。然而，递送载体的开发却因人们对载体分子特性如何赋予其疗效的理解不足而受阻。本文利用一个小型脂质体材料库，阐明了结构-功能关系，并发现了一个此前未被重视的参数——脂质纳米颗粒表面电离——该参数与mRNA递送效率密切相关。该材料库中两种最有效的材料306O10和306Oi10，在小鼠单次注射0.75 mg kg⁻¹ mRNA后，即可显著诱导荧光素酶表达。这两种脂质体均具有十个碳原子的尾部，分子量相同，唯一的区别在于306O10的尾部为直链，而306Oi10的尾部带有一个单碳原子的分支。值得注意的是，这种微小的结构差异使306Oi10的疗效提高了十倍。这种支链尾脂质体的增强效力归因于其在晚期内体pH值5.0时强烈的表面电离作用。二级脂质体库证实，Oi10材料的电离作用更强，递送mRNA的效力也高于含有线性尾部的脂质体。这些数据共同突显了脂质化学对mRNA递送过程的精细调控作用，并表明支链尾脂质体能够促进动物体内蛋白质的表达。[2]
体内实验表明，静脉注射306Oi10脂质纳米颗粒（LNP）可高效地将mRNA递送至小鼠肝脏。其支链结构和适宜的pKa值使其能够在肝细胞中实现稳定的报告基因表达。此外，306Oi10还被描述为一种新型可电离、可生物降解的脂质，可通过LNP递送短干扰RNA，并展现出有效的靶基因沉默能力。 |
| 酶活实验 |
LNP pKa 和表面电离测量。[2]
LNP 表面 pKa 的测定方法如前所述[20]。简而言之，将由 150 mM 氯化钠、20 mM 磷酸钠、20 mM 乙酸铵和 25 mM 柠檬酸铵组成的缓冲溶液滴定至 pH 值范围为 2 至 12，增量为 0.5。在黑色 96 孔板中，将每种 pH 溶液各取 250 μL 进行三重复分装。向每个孔中加入 5 μL 浓度为 0.1 mg/mL 的 LNP 溶液（mRNA 浓度为 0.1 mg/mL）。向每个孔中加入 10 μL 浓度为 0.16 mM 的 2-(对甲苯胺基)萘-6-磺酸 (TNS) 去离子水储备液，使 TNS 的最终浓度为 6 μM。使用 BioTek Synergy H1 微孔板读数仪测量荧光强度，激发波长为 322 nm，发射波长为 431 nm。最大荧光值代表 100% 胺质子化，最小荧光值代表 0% 胺质子化。LNP 表面 pKa 值定义为 50% 胺质子化时的 pH 值。需要注意的是，荧光值的绝对值取决于读数仪的设置，包括增益。比较不同纳米颗粒制剂时，务必使用相同的设置。 将306Oi10溶解于乙醇中，并与辅助脂质（例如DSPC、胆固醇、PEG2000-DMPE）和mRNA在酸性缓冲液（pH 4-5，通常为25-50 mM乙酸钠）中通过微流控混合或T型接头混合。脂质纳米颗粒（LNP）自组装形成粒径为50-150 nm的颗粒。通过透析或切向流过滤（TFF）去除乙醇，并将pH值调节至7.4。使用TNS或ANS荧光测定法测定包封率（>85-90%）和pKa值，以确认其内吞体逃逸能力。 |
| 细胞实验 |
体外mRNA递送。[2]
HeLa细胞（ATCC）在37°C、5% CO2条件下，于添加10%胎牛血清（体积比）、20 U/mL青霉素和20 U/mL链霉素的高糖Dulbecco改良Eagle培养基中培养。转染前6-8小时，将细胞以每孔15,000个细胞的密度接种于白色96孔板中，每孔加入180 μL培养基。将携带未修饰萤火虫荧光素酶mRNA的脂质纳米颗粒（LNP）以每孔100 ng（0.81 nM）的剂量转染至细胞中。Lipofectamine MessengerMax按照制造商的说明进行配制。转染24小时后，使用Bright-Glo!萤火虫荧光素酶检测系统测定萤火虫荧光素酶活性。 在体外研究中，将306Oi10 LNPs稀释于无血清或完全DMEM培养基中。将HEK293、HeLa或HepG2细胞接种于96孔或24孔板中（1-5×10⁴个细胞/孔），并用0.05-1 ug/孔的mRNA剂量的LNPs处理。4-6小时后，更换新鲜的完全培养基。转染24小时后，使用酶标仪检测荧光素酶活性，并通过流式细胞术定量GFP表达。采用MTT法评估细胞毒性。 |
| 动物实验 |
体内生物分布研究。[2]
所有动物实验均按照机构批准的方案（IACUC）进行。雌性 C57BL/6 小鼠尾静脉注射载有 Cy5 标记的荧光素酶 mRNA (m5C/#) 的 LNP，剂量为 0.75 mg/kg。注射后1小时处死小鼠，取出胰腺、脾脏、肝脏、肾脏、心脏和肺脏，使用IVIS™成像系统在649 nm激发波长和670 nm发射波长下进行Cy5荧光成像。使用Living Image™软件[2]通过感兴趣区域分析确定总辐射效率[(p/s)/("W/cm2 )]。 共聚焦显微镜。[2] 雌性C57BL/6小鼠（查尔斯河实验室）经尾静脉注射携带花青素5荧光素酶mRNA (m5C/#)（TriLink Biotechnologies）的脂质纳米颗粒，剂量为0.75 mg/kg。注射后1小时处死小鼠，取出脾脏和肝脏。将肝脏和脾脏组织固定于4%甲醛去离子水中24小时，然后用去离子水洗涤三次。 PBS。将组织切片，并用 0.1% Triton X-100 的 PBS 溶液透化 3-5 分钟。PBS 洗涤两次后，将样品与 Alexa Fluor 488 鬼笔环肽（1:40 稀释）和 Hoeschst 33342（1:2000 稀释）在摇床上孵育过夜。PBS 洗涤两次后，将样品封片于载玻片上，并使用蔡司 LSM 700 共聚焦显微镜和 63 倍物镜进行成像。 体内荧光素酶 mRNA 递送。[2] 使用至少 6 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠。小鼠经尾静脉注射裸露的 mRNA（阴性对照）或携带荧光素酶编码 mRNA 的脂质纳米颗粒（LNP），剂量为 0.75 mg/kg（除非另有说明）。所有体内实验中，mRNA 均用 5-甲氧基尿苷进行碱基修饰。 （mo5U）。在每次成像时间点前15分钟，小鼠腹腔注射130 μL浓度为30 mg/mL的D-荧光素。小鼠用异氟烷麻醉（诱导麻醉浓度为4%，维持麻醉浓度为2%，Patterson Veterinary公司），并使用IVIS成像系统对小鼠腹侧进行生物发光成像。或者，在注射D-荧光素15分钟后，处死小鼠，取出胰腺、脾脏、肝脏、肾脏、心脏和肺脏，并使用IVIS成像系统进行生物发光成像。使用 Living Image 软件通过感兴趣区域分析确定总发光通量（光子/秒）。 体内促红细胞生成素 mRNA 递送。[2] 雌性 C57BL/6 小鼠尾静脉注射携带促红细胞生成素 mRNA (mo5U) 的脂质纳米颗粒 (LNP)，剂量为 0.75 mg/kg。注射后 3、6 和 24 小时，通过颌下静脉采集血样。将血样置于 BD Microtainer 血清分离管中，以 14,000 rpm 离心 10 分钟分离血清。血清稀释 1:1000 后，使用人促红细胞生成素 Quantikine IVD ELISA 试剂盒测定促红细胞生成素浓度。 为了进行体内评估，将含有荧光素酶或Cre重组酶mRNA的306Oi10 LNPs通过尾静脉注射给药至6-8周龄的雌性BALB/c或C57BL/6小鼠体内，mRNA剂量为0.2-1 mg/kg。6-24小时后，使用D-荧光素底物进行体内生物发光成像，以检测荧光素酶mRNA；对于基因编辑研究（Cre mRNA），采集组织（肝脏、脾脏）进行DNA提取和PCR分析，以确认重组事件。通过IVIS成像或qRT-PCR定量组织中的mRNA水平来评估生物分布。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
306Oi10 LNPs展现出可电离LNPs典型的良好药代动力学特性。静脉注射后，LNPs的循环半衰期约为2-5小时，主要蓄积于肝脏（约占注射剂量的50-70%）和脾脏（约占10-20%）。其支链结构设计使其具有生物可降解性，酯键可在体内水解，从而促进脂质成分的清除并降低潜在毒性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
306Oi10 LNP 在临床前研究中显示出良好的安全性。在治疗剂量（0.2-1 mg/kg）下，小鼠体内未观察到肝酶（ALT/AST）或促炎细胞因子（IL-6、TNF-α）的显著升高。该 LNP 制剂在体外具有较低的细胞毒性（5 μg/mL mRNA 浓度下细胞存活率 >80%）。该脂质体的生物可降解性降低了重复给药后的组织蓄积。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
近期研究发现，脂质体（一类脂质）可以制成脂质纳米颗粒（LNP），从而在体外和体内高效递送多种核酸。本文研究了这些材料在不同细胞类型和小鼠体内递送信使RNA（mRNA）的应用。我们合成了一个包含400种脂质体的化合物库，发现材料的化学性质显著影响体外mRNA递送效率。利用一个包含11种脂质体的较小化合物库，我们证明了由这些材料制备的LNP能够高效地将mRNA递送到小鼠的多个器官。化合物库中递送效率最高的两种材料306O10和306Oi10均具有10个碳原子的尾部，且分子量相同。唯一的区别在于306O10的尾部是直链，而306Oi10的尾部带有一个单碳原子的分支。值得注意的是，这种微小的结构差异使306Oi10的疗效提高了10倍。这种分支尾脂质体的疗效增强归因于其进入靶细胞胞内区室后发生的强表面电离。我们还证明，在小鼠体内，递送顶部脂质纳米颗粒306Oi10所获得的蛋白质表达水平高于两种金标准脂质C12-200和DLin-MC3-DMA。此外，我们还证明该材料具有足够的效力，可以在同一制剂中封装和递送三种不同长度的mRNA。而且，306Oi10可以共递送Cas9 mRNA和单向导RNA（sgRNA），从而促进小鼠肝脏中CRISPR介导的基因编辑。静脉注射该材料不会显著增加血清细胞因子或IgG水平，也不会引起肝毒性（组织学结果）。最后，我们研究了mRNA核苷修饰对小鼠蛋白质表达的影响。具体而言，我们使用四种分别靶向肝脏、脾脏或肺脏的脂质纳米颗粒（LNP）递送多种修饰后的mRNA，从而研究了递送载体对mRNA修饰效率的影响。结果表明，递送载体对修饰mRNA的效率有显著影响。我们还发现，大部分增强的蛋白质表达发生在脾脏，这是由于该器官细胞的转染效率更高，且翻译活性更强。[1]
306Oi10（CAS 2322290-93-5，C₅₉H11₅N3O₈，分子量 994.56）纯度 >95%，为淡黄色油状物，以纯品形式供应。建议在氮气保护下于 -20℃ 保存。目前尚无临床试验报道；306Oi10 仅作为脂质纳米颗粒 (LNP) 组分用于临床前研究。其结构与 306-O12B 及其他针对 mRNA 递送优化的 306 系列脂质体相关。 |
| 分子式 |
C59H115N3O8
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|---|---|
| 分子量 |
994.56
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| 精确质量 |
993.868
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| CAS号 |
2322290-93-5
|
| PubChem CID |
146204786
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow ointment
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| LogP |
17.2
|
| tPSA |
115
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
56
|
| 重原子数目 |
70
|
| 分子复杂度/Complexity |
1040
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(CCN(CCCN(CCCN(CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)C)CCC(OCCCCCCCC(C)C)=O)OCCCCCCCC(C)C
|
| InChi Key |
BPPZRZOKGADTQE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C59H115N3O8/c1-52(2)32-22-14-10-18-26-48-67-56(63)36-44-61(45-37-57(64)68-49-27-19-11-15-23-33-53(3)4)42-30-40-60(9)41-31-43-62(46-38-58(65)69-50-28-20-12-16-24-34-54(5)6)47-39-59(66)70-51-29-21-13-17-25-35-55(7)8/h52-55H,10-51H2,1-9H3
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| 化学名 |
8-methylnonyl 3-[3-[3-[bis[3-(8-methylnonoxy)-3-oxopropyl]amino]propyl-methylamino]propyl-[3-(8-methylnonoxy)-3-oxopropyl]amino]propanoate
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| 别名 |
306Oi10; 2322290-93-5; SCHEMBL21504882; 306Oi10?;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0055 mL | 5.0273 mL | 10.0547 mL | |
| 5 mM | 0.2011 mL | 1.0055 mL | 2.0109 mL | |
| 10 mM | 0.1005 mL | 0.5027 mL | 1.0055 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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