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P2Y2 Receptor
MRS2768 tetrasodium salt specifically targets the P2Y2 receptor, a GPCR that is activated by ATP and UTP. The compound is a selective agonist for this receptor, with an EC50 of 1.89 uM. It displays no affinity for the human P2Y4 or P2Y6 receptors, making it a useful tool for studying the specific pharmacology of P2Y2. Activation of P2Y2 triggers downstream signaling cascades, including Gq-mediated phospholipase C activation. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
MRS2768（0.01-10000 μM；24 小时）显著促进 PANC-1 细胞的增殖[1]。
将 PANC-1 细胞与 UTP 或选择性 P2Y2 受体激动剂 MRS2768 孵育，结果显示细胞增殖呈剂量和时间依赖性增加。PANC-1 细胞中表达 P2Y2 受体的 mRNA 转录本和蛋白。P2 受体拮抗剂苏拉明和针对 P2Y2 受体的小干扰 RNA 显著降低了 UTP 和 MRS2768 的增殖作用。 UTP激活P2Y2受体，进而激活磷脂酶C、肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）和蛋白激酶C。尿苷三磷酸（UTP）诱导的细胞增殖由蛋白激酶D、Src家族酪氨酸激酶、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、Akt和磷脂酶D介导。UTP通过蛋白激酶C、Src家族酪氨酸激酶、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II和PI3K增加Akt的磷酸化水平。结论：UTP通过激活P2Y2受体和PI3K/Akt通路促进人胰腺导管上皮细胞增殖。这有助于揭示P2Y2受体在胰腺细胞中的长期作用。 [1] 用 MRS2768 预处理的培养大鼠心肌细胞表现出对缺氧的保护作用[如乳酸脱氢酶 (LDH) 释放和碘化丙啶 (PI) 结合所揭示]，这种保护作用可被 P2Y2R 拮抗剂 AR-C118925 (5-((5-(2,8-二甲基-5H-二苯并[a,d][7]轮烯-5-基)-2-氧代-4-硫代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)甲基)-N-(1H-四唑-5-基)呋喃-2-甲酰胺) 降低[2]。 在无细胞实验中，MRS2768四钠盐是一种P2Y2受体激动剂，其EC50值为1.89 uM。该化合物能够激活P2Y2受体，并且对P2Y2受体具有选择性，优于其他P2Y家族成员。该化合物在体外对心肌细胞具有缺血性损伤的保护作用。这可能是通过激活P2Y2受体下游的生存通路（例如Akt或ERK信号通路）来实现的。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，预先注射MRS2768（4.44 μg/kg，静脉注射）可减轻心肌损伤。MRS2768在体内可保护心肌细胞免受缺血损伤[2]。体内研究发现，在心肌梗死（MI）后24小时，对三组小鼠（假手术组、MI组和MI+MRS2768组）进行超声心动图检查和三苯基四氮唑氯化物（TTC）梗死面积染色，结果表明MRS2768具有保护作用。与单纯MI组相比，MRS2768治疗组小鼠的心肌收缩分数（FS）更高（40.0 ± 3.1 % vs. 33.4 ± 2.7 %，p < 0.001）。肌钙蛋白T和肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 的测量结果表明，MRS2768预处理可减轻心肌损伤 (p < 0.05)，并增加c-Jun磷酸化水平。因此，P2Y2R激活可在体外保护心肌细胞免受缺氧损伤，并在体内减少缺血后心肌损伤[2]。
采用超声心动图评估心肌梗死后左心室功能[2] 基线时，各组间心脏结构或功能的超声心动图测量结果无显著差异。与MRS2768预处理小鼠相比，心肌梗死诱导导致左心室收缩末期内径显著增加（p < 0.05，图3a，b）。与MRS2768治疗组小鼠（40.0 ± 3.13%）或假手术组小鼠（51.8 ± 1.7%）相比，梗死小鼠的FS值（33.4 ± 2.7%）显著降低（图3c，p < 0.001）。图3e展示了回波测量的代表性M型图像。缺血性损伤的评估采用了以下几种标志物： 缺血性损伤的生化标志物[2] 肌钙蛋白T：肌钙蛋白T是心肌损伤的特异性标志物，其水平在心肌梗死后小鼠中显著升高（13.4 ± 1.4 ng/ml），与假手术组相比。MRS2768预处理显著降低了血清中肌钙蛋白T的水平（10.6 ± 0.8 ng/ml，p < 0.05，图4a）。 体内实验表明，MRS2768四钠盐具有疗效。低剂量MRS2768（4.44 ug/kg，静脉注射）预处理可减轻小鼠心肌损伤，表明其对心肌细胞具有缺血性损伤的保护作用。在心肌缺血再灌注损伤模型中，MRS2768还能缩小梗死面积。这些数据支持P2Y2受体潜在的心脏保护作用，并为该化合物作为治疗先导化合物提供了概念验证。 |
| 酶活实验 |
P2Y2受体siRNA抑制实验[1]
使用针对人P2Y2受体的小干扰RNA。将细胞接种于24孔或96孔板中，培养过夜至70%至80%汇合度，然后按照制造商的说明，使用Lipofectamine RNAiMAX转染试剂将预先设计的siRNA（50 nmol/L）转染至细胞中。使用非靶向siRNA（乱序siRNA）作为阴性对照。48小时后，用UTP或MRS2768处理细胞。再孵育24小时后检测细胞增殖情况。通过定量RT-PCR和/或Western blotting检测P2Y2 mRNA的表达，以验证mRNA的沉默是否成功。 siRNA 使 PANC-1 细胞中 P2Y2 受体的 mRNA 表达降低了 80% 以上。 评估 P2Y2 受体结合的具体方案采用放射性配体结合试验。将稳定表达人 P2Y2 受体的 1321N1 人星形胶质细胞的细胞膜与 [35S]-dATPαS（一种放射性标记的激动剂）以及浓度递增的未标记 MRS2768 四钠盐（1 nM 至 100 uM）在测定缓冲液中于室温孵育 60 分钟。通过 GF/B 滤膜进行快速真空过滤，分离结合态和游离态放射性。在 100 uM ATP 存在下测定非特异性结合。洗涤、干燥滤膜并计数。使用 Cheng-Prusoff 方程计算 Ki 值。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验[1]
细胞类型： 人胰腺导管上皮细胞 PANC-1 测试浓度： 0.01、0.1、1、10、100、1000、10000 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： PANC-1 细胞增殖的影响取决于浓度（0.1 μM 至 1 mM）。刺激增殖达到半数最大效应 (EC50) 的浓度为 0.8±1.7 μM。PANC-1 细胞增殖呈剂量和时间依赖性增加。 在体外细胞实验中，分离并培养新生大鼠原代心肌细胞。将细胞置于氧糖剥夺（OGD）条件下培养2-4小时以模拟缺血，随后进行24小时的复氧处理。在OGD处理前，立即向培养基中加入MRS2768四钠盐（0.1、1、10 uM）。采用MTT法或LDH释放法评估细胞活力。使用荧光底物检测caspase-3/7活性来评估细胞凋亡。P2Y2受体激动剂的保护作用以细胞死亡率相对于仅进行OGD处理的对照组的降低百分比来计算。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性野生型小鼠 (C57BL)[2]
剂量：4.44 μg/kg 给药途径：静脉注射；心肌梗死 (MI) 前 1 小时 实验结果：预处理可减轻心肌损伤。与未处理的小鼠相比，预处理小鼠的损伤显著减轻（25.6±4.5% vs. 39.2±6.3%）。 动物和实验方案[2] 使用雄性野生型小鼠 (C57BL)。本研究设置了三个实验组： 1. 假手术组（不结扎左前降支冠状动脉 (LAD)） 2. 心肌梗死 (MI) 组（结扎 LAD） 3. 心肌梗死前 1 小时静脉注射 MRS2768 (4.44 μg/kg) 的动物 MRS2768 的标准体内实验方案采用小鼠心肌缺血再灌注 (I/R) 损伤模型。雄性 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄）麻醉后，行左前降支 (LAD) 冠状动脉结扎术 30 分钟，随后进行 24 小时再灌注。MRS2768 四钠盐以 4.44 μg/kg 的剂量，经尾静脉单次静脉注射给药，于 LAD 结扎前 5 分钟给药。再灌注 24 小时后，取出心脏。采用伊文思蓝染色法测定危险区域 (AAR)，并采用 TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）染色法评估梗死面积。梗死面积以占 AAR 的百分比表示。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无MRS2768四钠盐的详细药代动力学数据。作为一种核苷酸类似物（四磷酸盐），它带高电荷，预计口服生物利用度较低。通常情况下，体内研究采用静脉注射给药。在血浆中，它可能被外核苷酸酶和碱性磷酸酶快速降解，这些酶会裂解磷酸基团。其较短的半衰期对于急性心脏保护干预措施（例如缺血再灌注损伤模型）而言是可以接受的。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无MRS2768四钠盐的具体毒性数据。作为一种选择性P2Y2受体激动剂，P2Y2的慢性激活可能产生脱靶效应，例如改变上皮组织中的离子转运或免疫调节。标准的安全性筛选包括细胞毒性试验（例如，在原代肝细胞上进行MTT试验）以确定最大无毒浓度。该化合物的使用剂量为低微克/公斤，通常耐受性良好。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
本研究发现，P2Y2受体介导UTP在PANC-1细胞中的增殖。尿酸三磷酸（UTP）是一种强效的P2Y2/P2Y4受体激动剂，而MRS2768是一种选择性P2Y2受体激动剂；两者均以浓度依赖的方式调节胰腺导管上皮细胞的增殖。MRS2768的效力强于UTP，表明UTP通过激活P2Y2受体来调节细胞增殖。此外，P2受体拮抗剂苏拉明显著抑制了UTP和MRS2768诱导的细胞增殖。靶向P2Y2受体的siRNA也显著抑制了UTP和MRS2768诱导的细胞增殖，进一步支持了P2Y2受体的参与。基于P2Y受体mRNA的表达水平，胰腺细胞中P2Y2受体的表达水平高于P2Y1和P2Y4受体亚型。UTP对细胞增殖的调控是通过P2Y2受体介导的。对卵巢癌15,36和结直肠癌21,27中P2Y2受体激活的研究表明，UTP在某些细胞系中促进细胞增殖，而在另一些细胞系中则抑制细胞增殖。这可能是由于癌细胞系、P2受体表达水平以及相关信号通路存在差异所致。此外，UTP的促增殖作用具有血清依赖性，因为在无血清条件下，UTP对胰腺细胞增殖没有影响（数据未显示）[1]。由于缺血组间IκB水平未见差异，我们可以推断NFκB降解并非MRS2768发挥心脏保护作用的机制之一。关于c-Jun N端激酶（JNK）的激活，目前存在相互矛盾的结果。一些研究表明，JNK激活特异性地发生在再灌注期间。我们和其他研究者发现，单纯的缺血即可激活该通路。此外，JNK在心肌缺血/再灌注（I/R）中的作用仍存在争议，因为一些可靠的研究报道了相互矛盾的结果，既有心脏保护作用，也有有害作用。与我们之前的报道相反，我们发现，与单纯心肌梗死（MI）小鼠相比，预先用UTP处理的野生型（WT）小鼠的磷酸化c-Jun表达显著降低（p < 0.05）。这种差异很可能是由于体内半衰期不同所致，即UTP的降解速度快于MRS2768。然而，MRS2768的体内药代动力学和药效学仍有待确定。MRS2768的心脏保护作用似乎部分与c-Jun磷酸化有关。总之，我们已证实MRS2768激活P2Y2受体可保护心脏免受缺血性损伤，最大限度地减少梗死面积，并改善心肌梗死后的心脏功能。尽管抑制心肌缺血损伤的确切机制尚不清楚，但靶向P2Y受体的治疗策略在预防缺血性心肌损伤方面显示出巨大的潜力，值得进一步研究。[2]
MRS2768四钠盐是一种研究级化合物，尚未获准用于临床。其分子量为728.14，分子式为C15H16N2Na4O18P4，纯度≥98%（HPLC）。储存于-80℃。由于其对P2Y2受体的选择性优于P2Y4和P2Y6受体，因此可作为研究P2Y2受体在心血管保护中具体作用的独特药理学工具。该化合物对于验证P2Y2受体作为心肌梗死药物靶点具有重要意义。 |
| 分子式 |
C15H16N2NA4O18P4
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|---|---|
| 分子量 |
728.14
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| 精确质量 |
727.893936
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| CAS号 |
2567869-47-8
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| PubChem CID |
90488893
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| 外观&性状 |
Colorless to light yellow liquid
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| tPSA |
306Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
18
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| 可旋转键数目(RBC) |
12
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| 重原子数目 |
43
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| 分子复杂度/Complexity |
1120
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)OP(=O)([O-])OP(=O)([O-])OP(=O)([O-])OP(=O)([O-])OC[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N3C=CC(=O)NC3=O)O)O.[Na+].[Na+].[Na+].[Na+]
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| InChi Key |
ASYFBNZFGLWLNC-YYXHNCPRSA-J
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H20N2O18P4.4Na/c18-11-6-7-17(15(21)16-11)14-13(20)12(19)10(31-14)8-30-36(22,23)33-38(26,27)35-39(28,29)34-37(24,25)32-9-4-2-1-3-5-9;;;;/h1-7,10,12-14,19-20H,8H2,(H,22,23)(H,24,25)(H,26,27)(H,28,29)(H,16,18,21);;;;/q;4*+1/p-4/t10-,12-,13-,14-;;;;/m1..../s1
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| 化学名 |
tetrasodium;[[(2R,3S,4R,5R)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-oxidophosphoryl] [oxido-[oxido(phenoxy)phosphoryl]oxyphosphoryl] phosphate
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| 别名 |
MRS2768 tetrasodium salt; 2567869-47-8;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Shipping with dry ice.
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3734 mL | 6.8668 mL | 13.7336 mL | |
| 5 mM | 0.2747 mL | 1.3734 mL | 2.7467 mL | |
| 10 mM | 0.1373 mL | 0.6867 mL | 1.3734 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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