Nuclear factor of activated T-cells 2 (NFAT2).
Urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) (indirectly, through NFAT2 inhibition). [1]

11R-VIVIT (100 nM) 表明，与用正常葡萄糖处理的足细胞相比，用高血糖处理的足细胞中 NFAT2 表达显着降低。 11R-VIVIT 可减少血糖升高引起的足细胞滤过屏障功能障碍[1]。

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在培养的条件永生化小鼠足细胞中，高糖（HG, 30 mM）处理48小时可诱导NFAT2激活（核积聚）并增加uPAR的mRNA和蛋白表达。将11R-VIVIT（100 nM）加入高糖处理的细胞中共同孵育48小时，可完全阻断高糖诱导的NFAT2核积聚。[1]
蛋白免疫印迹分析显示，高糖处理增加了足细胞核提取物中NFAT2的表达，而该效应可被11R-VIVIT（100 nM）处理显著降低。[1]
11R-VIVIT（100 nM）可显著降低培养足细胞中由高糖诱导的uPAR mRNA（Plaur基因）和蛋白表达的上调。[1]
免疫荧光染色显示，11R-VIVIT（100 nM）处理可阻止高糖诱导的培养足细胞中NFAT2核定位（红色荧光）的增加。[1]
使用在Transwell滤膜上生长的足细胞单层进行的白蛋白流入测定表明，高糖（30 mM, 48h）导致跨足细胞单层的白蛋白通量显著增加。使用11R-VIVIT（100 nM）处理可显著减轻这种高糖诱导的滤过屏障功能障碍（白蛋白流入）。[1]

除了减轻肾小球基底膜 (GBM) 增厚和足细胞足突消失之外，11R-VIVIT 还可以部分恢复足细胞数量、抑制 NFAT2 激活并揭示足细胞相关受体 (uPAR) 表达 [1]。 11R-VIVIT 可以显着逆转这些影响。

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在糖尿病db/db小鼠中，与溶媒处理的db/db小鼠相比，使用11R-VIVIT（1 mg•kg⁻¹，腹腔注射，每周三次，持续8周）治疗显著减弱了尿白蛋白排泄量（白蛋白尿）的增加。[1]
与溶媒处理的db/db对照组相比，11R-VIVIT治疗显著提高了db/db小鼠的肌酐清除率（肾功能标志物）。[1]
组织学分析（PAS染色）显示，11R-VIVIT治疗显著改善了糖尿病db/db小鼠肾小球中的系膜基质扩张，该结果通过系膜基质分数进行了量化。[1]
电子显微镜结果显示，11R-VIVIT治疗减轻了db/db小鼠的肾小球基底膜增厚和足突融合。[1]
针对WT1（足细胞标志物）的免疫染色显示，11R-VIVIT治疗显著改善了db/db小鼠中每个肾小球足细胞数量的减少（13.8 ± 0.86 对比 db/db+PBS组的10.85 ± 0.81, P<0.05）。[1]
在db/db小鼠的肾小球足细胞中进行免疫荧光染色显示，11R-VIVIT治疗抑制了NFAT2的激活（核积聚），并恢复了synaptopodin和uPAR的表达。[1]

11R-VIVIT 是一种细胞穿透性肽，旨在选择性抑制 NFAT（活化T细胞核因子）转录因子，同时不影响钙调磷酸酶的酶活性。在典型的非细胞结合或活性测定中，其机制通过竞争性结合模型进行评估。由于其肽类特性，直接的酶动力学研究较少，但 体外 细胞实验表明，11R-VIVIT（例如 100 nM 浓度）能显著抑制 NFAT2 的表达并阻止其核转位 。与直接抑制钙调磷酸酶的传统药物不同，11R-VIVIT 特异性地阻断钙调磷酸酶与 NFAT 之间的相互作用，作为一种底物拮抗剂。标准实验方案通常包括用该肽（溶于水，母液浓度100 mg/mL）处理细胞或分离成分，并测量其对下游转录活性的抑制效果 。

足细胞培养与处理： 条件永生化小鼠足细胞在含10% FBS和IFN-γ的RPMI1640中于33°C下培养。通过在37°C无IFN-γ的条件下培养10-14天诱导分化。在无血清DMEM中同步化24小时后，细胞用正常葡萄糖（NG, 5.3 mM）、高糖（HG, 30 mM）或渗透压对照（NG + 24.7 mM甘露醇）处理48小时。抑制实验中，将11R-VIVIT（100 nM）加入高糖处理的细胞中共同孵育48小时。[1]
培养足细胞的免疫荧光： 足细胞用4%多聚甲醛固定、封闭后，与兔抗NFAT2抗体在4°C下孵育过夜。洗涤后，与山羊抗兔Alexa Fluor 555二抗在室温孵育1小时，然后用DAPI染色细胞核。使用共聚焦显微镜拍摄图像。[1]
蛋白免疫印迹分析： 足细胞用RIPA裂解缓冲液裂解。使用试剂盒提取核蛋白和胞浆蛋白。取30 μg蛋白在10% SDS-PAGE凝胶上分离，转移至PVDF膜，并在4°C下与一抗（抗NFAT2、抗组蛋白3、抗uPAR、抗GAPDH）孵育过夜。随后与HRP标记的二抗在室温孵育1小时，使用ECL法检测信号。[1]
实时定量RT-PCR (qRT-PCR)： 使用Trizol试剂从培养的足细胞中提取总RNA。从2 μg总RNA中合成cDNA。使用SYBR Green Master Mix和针对Plaur（uPAR）及内参GAPDH的特异性引物进行qRT-PCR。使用2⁻ΔΔCt法计算基因表达的倍数变化。[1]
白蛋白流入测定（滤过屏障功能）： 将足细胞（5×10³个）接种到涂有胶原蛋白的Transwell滤膜（3 μm孔径）的上室中，培养10天。血清饥饿后，细胞在有或无11R-VIVIT（100 nM）的条件下预孵育30分钟，然后在有或无30 mM葡萄糖的条件下处理48小时。上室重新加入RPMI 1640培养基，下室加入含40 mg/mL BSA的RPMI 1640培养基。在37°C孵育6小时后，收集上室培养基，使用BCA蛋白测定试剂盒测量白蛋白浓度。[1]

动物： 使用雄性C57BL/KsJ db/db小鼠（2型糖尿病模型）和年龄匹配的野生型BKS小鼠（实验开始时12周龄）。总共使用15只小鼠（每组5只：BKS+PBS， db/db+PBS， db/db+11R-VIVIT）。[1]
治疗方案： 将11R-VIVIT溶解于PBS中，以1 mg•kg⁻¹体重的剂量通过腹腔注射给药。每周注射三次，持续8周。对照组（BKS和db/db）接受相同体积不含11R-VIVIT的PBS。[1]
样本采集与监测： 禁食6小时后，每周从尾静脉采血测量空腹血糖。每周测量体重。每两周一次将单只小鼠置于代谢笼中收集24小时尿液。治疗8周后，用氯胺酮（70 mg•kg⁻¹，腹腔注射）麻醉小鼠，从眼眶后静脉丛采集血样。称量心脏、肝脏和肾脏的重量。[1]
肾脏组织学与分析： 将石蜡包埋的肾脏组织切成4 μm切片，并用高碘酸-雪夫（PAS）染色。使用Image-Pro Plus 6.0软件对系膜扩张进行量化，计算方法为系膜中PAS阳性且无核区域的面积除以肾小球丛面积。[1]
足细胞计数： 在4 μm切片上使用抗WT1抗体进行免疫染色以检测足细胞。每只动物随机选取20个肾小球，计算每个肾小球中WT1阳性细胞的平均数量。[1]
电子显微镜： 将肾脏组织块（1 mm）用2.5%戊二醛固定，1%四氧化锇后固定，脱水后包埋于Epon树脂中。超薄切片（80 nm）用醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色，在电子显微镜下观察。每个样本取2-3个肾小球，每张照片测量5个点的GBM厚度。[1]

关于系统药代动力学（PK）的具体数据，如血浆半衰期 ( � 1 / 2 t 1/2 ​ ) 和生物利用度，在标准产品说明书中并不详尽。然而，功能性测定估计 11R-VIVIT 在 Jurkat T 细胞中的 胞内功能性半衰期 约为 30 小时，表明其内化后具有高稳定性 。该肽极性很高（预测 LogP 为 -17.4），通常意味着口服生物利用度较差；因此，在动物研究中通常通过 腹腔注射（i.p.） 给药（例如 5 mg/kg 的给药方案）。由于含有 11-精氨酸 (11R) 转导结构域，尽管分子量较大（约 3573 g/mol）且具有极性，该化合物仍表现出高细胞穿透性 。

使用11R-VIVIT（1 mg•kg⁻¹，腹腔注射，每周三次，持续8周）治疗不影响糖尿病db/db小鼠或非糖尿病BKS小鼠的体重、食物摄入量或饮水量。[1]
11R-VIVIT治疗不影响db/db小鼠的血糖水平（11R-VIVIT组为29.8 ± 1.1 mmol•L⁻¹，溶媒组为30.8 ± 0.9 mmol•L⁻¹），也不影响BKS小鼠的血糖，表明其肾脏保护作用独立于降糖作用。[1]
各治疗组之间心脏重量无差异，11R-VIVIT显著抑制了db/db小鼠肾重（0.33 ± 0.02 g 对比 db/db+PBS组的0.44 ± 0.01 g）的增加。治疗对肝脏重量无影响（db/db+11R-VIVIT组为2.82 ± 0.18 g，db/db+PBS组为2.83 ± 0.26 g）。[1]

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由于 11R-VIVIT 仅限研究使用（RUO），其具体的毒理学数据有限。现行的材料安全数据表（MSDS）将其分类为“非危险物质或混合物”，并未列出 GHS 标准下的特定靶器官毒性 。体内 动物研究（小鼠）报告显示，11R-VIVIT 给药不会产生传统钙调磷酸酶抑制剂（如环孢素 A 或 FK506）相关的经典副作用，如肾毒性、肝毒性或神经毒性。研究特别指出，在功能剂量下（如 100 nM 至 5 mg/kg），未观察到对心脏和肝脏的毒副作用，且在骨髓巨噬细胞或肾细胞中也未发现细胞毒性 。然而，在获得更多数据之前，标准安全建议仍将其视为普通刺激物（吞咽有害，引起皮肤/眼睛刺激）。

[1]. NFAT2 inhibitor ameliorates diabetic nephropathy and podocyte injury in db/db mice. Br J Pharmacol. 2013;170(2):426-439.

11R-VIVIT 是钙调磷酸酶-NFAT相互作用的选择性抑制剂。与环孢素A不同，它不影响钙调磷酸酶的磷酸酶活性。它最初是基于NFAT家族成员中保守的钙调磷酸酶对接位点（VIVIT基序）开发的。本研究首次证明，这种细胞可渗透的NFAT抑制剂对db/db小鼠糖尿病肾病中的足细胞损伤具有保护作用，其作用机制可能涉及CaN/NFAT2/uPAR信号通路。[1]

C147H259N67O36S

3573.15

3572.024

592517-80-1

11R-VIVIT TFA

16140839

H-Met-Ala-Gly-Pro-His-Pro-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Gly-Pro-His-Glu-Glu-OH
L-methionyl-L-alanyl-glycyl-L-prolyl-L-histidyl-L-prolyl-L-valyl-L-isoleucyl-L-valyl-L-isoleucyl-L-threonyl-glycyl-L-prolyl-L-histidyl-L-alpha-glutamyl-L-glutamic acid

RRRRRRRRRRRGGGMAGPHPVIVITGPHEE

Typically exists as solid at room temperature

-17.4

1740

66

51

131

251

8440

28

CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC4=CN=CN4)NC(=O)[C@@H]5CCCN5C(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)N

VNTCWMOQGXMIQP-PIQGMSCVSA-N

InChI=1S/C147H259N67O36S/c1-12-75(7)109(133(246)208-108(74(5)6)132(245)210-110(76(8)13-2)134(247)211-111(78(10)215)130(243)188-70-104(220)212-58-25-39-97(212)127(240)205-95(62-79-64-171-71-189-79)126(239)203-92(42-44-105(221)222)125(238)204-94(136(249)250)43-45-106(223)224)209-131(244)107(73(3)4)207-129(242)99-41-27-60-214(99)135(248)96(63-80-65-172-72-190-80)206-128(241)98-40-26-59-213(98)103(219)69-187-112(225)77(9)191-115(228)93(46-61-251-11)192-102(218)68-185-100(216)66-184-101(217)67-186-114(227)82(29-15-48-174-138(151)152)194-117(230)84(31-17-50-176-140(155)156)196-119(232)86(33-19-52-178-142(159)160)198-121(234)88(35-21-54-180-144(163)164)200-123(236)90(37-23-56-182-146(167)168)202-124(237)91(38-24-57-183-147(169)170)201-122(235)89(36-22-55-181-145(165)166)199-120(233)87(34-20-53-179-143(161)162)197-118(231)85(32-18-51-177-141(157)158)195-116(229)83(30-16-49-175-139(153)154)193-113(226)81(148)28-14-47-173-137(149)150/h64-65,71-78,81-99,107-111,215H,12-63,66-70,148H2,1-11H3,(H,171,189)(H,172,190)(H,184,217)(H,185,216)(H,186,227)(H,187,225)(H,188,243)(H,191,228)(H,192,218)(H,193,226)(H,194,230)(H,195,229)(H,196,232)(H,197,231)(H,198,234)(H,199,233)(H,200,236)(H,201,235)(H,202,237)(H,203,239)(H,204,238)(H,205,240)(H,206,241)(H,207,242)(H,208,246)(H,209,244)(H,210,245)(H,211,247)(H,221,222)(H,223,224)(H,249,250)(H4,149,150,173)(H4,151,152,174)(H4,153,154,175)(H4,155,156,176)(H4,157,158,177)(H4,159,160,178)(H4,161,162,179)(H4,163,164,180)(H4,165,166,181)(H4,167,168,182)(H4,169,170,183)/t75-,76-,77-,78+,81-,82-,83-,84-,85-,86-,87-,88-,89-,90-,91-,92-,93-,94-,95-,96-,97-,98-,99-,107-,108-,109-,110-,111-/m0/s1

(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[2-[[(2S,3R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-1-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]pentanedioic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。