CL2A

别名: NND-229910;NND229910;(2S)-2-(4-氨基丁基)-35-[4-[[[4-[(2,5 -二氢-2,5-二氧代-1H-吡咯-1-基)甲基]环己基]羰基]氨基]甲基]-1H-1,2,3-三唑-1-基]-N-[4-(羟甲基) )苯基]-4,8-二氧代-6,12,15,18,21,24,27,30,33-九恶烷-3,9-二氮杂十五烷酰胺
目录号: V76146 纯度: ≥98%
CL2A 是一种可裂解的含有 PEG8 和三偶氮的 PBC-肽-mc 连接子。
CL2A CAS号: 2616704-22-2
产品类别: ADC Linker
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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产品描述
CL2A 是一种可裂解的含 PEG8 和三偶氮基团的 PBC-肽-mc 连接子。CL2A 会发生 pH 敏感降解,产生旁观者效应,并通过二硫键与抗体上的半胱氨酸残基结合。拉贝妥珠单抗(Labetuzumab goviteca)的生物活性分子就使用了这种连接子。
CL2A(CAS号:2616704-22-2)是一种可裂解的复杂抗体药物偶联物(ADC)连接子,包含一条PEG8链和一个三唑环。它设计用于通过半胱氨酸残基上的二硫键与抗体进行位点特异性偶联。CL2A的显著特点是其pH敏感的裂解机制,该机制能够释放一种可诱导旁观者效应的有效载荷。其结构包含一个PABC(对氨基苄基氨基甲酸酯)间隔基和一个肽段。拉贝妥珠单抗戈维替康(labetuzumab govitecan)ADC就使用了这种连接子。本产品仅供抗体药物偶联物领域的研究和开发用途。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cleavable Linker
CL2A itself has no direct biological target. It serves as a linker in ADCs, providing the structural connection between an antibody and a cytotoxic agent. The drug linker conjugate targets cells expressing the antibody's specific antigen. The cleavable nature of CL2A is designed to exploit the acidic environment of the tumor microenvironment or the lysosomal compartment of target cells, leading to hydrolysis and subsequent release of the payload. The ultimate target of the delivered payload is the DNA topoisomerase I or the microtubule network, depending on the conjugated drug, inducing cell cycle arrest and apoptosis.
体外研究 (In Vitro)
目前尚无报道显示CL2A单独具有直接生物活性。其“体外活性”需作为抗体药物偶联物(ADC)的一部分进行评估。偶联效率可通过液相色谱-质谱联用(LC-MS)或疏水相互作用色谱(HIC)等方法测定,以确定药物抗体比(DAR)。在基于细胞的检测中,ADC的活性通过其对靶抗原阳性细胞系的IC₅0值来表征。在共培养实验中证实了旁观者效应,即仅有部分细胞表达靶抗原,但ADC仍对邻近的抗原阴性细胞表现出活性。
体内研究 (In Vivo)
目前尚未报道CL2A作为独立化合物的体内活性。其活性是在与抗体和有效载荷偶联后,在人类癌症动物模型中进行评估的。在小鼠异种移植模型中,使用CL2A连接子的抗体药物偶联物(ADC)显示出显著的抗肿瘤活性,可导致肿瘤消退并延长生存期。pH敏感的裂解机制被认为有助于其疗效,因为它能促进有效载荷在酸性肿瘤微环境中的释放,这可能还会增强旁观者效应。这已在抗原表达异质性普遍存在的异种移植模型中得到证实。
酶活实验
针对 CL2A 等 pH 敏感型连接子的典型非细胞检测方法包括在不同 pH 条件下进行稳定性测试。将连接子-有效载荷偶联物在不同 pH 值(例如 pH 5.0、6.0 和 7.4)的缓冲液中于 37℃ 孵育 24 小时。通过在不同时间点取样,并使用高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 分析,监测有效载荷的释放情况,计算每个 pH 值下有效载荷的释放百分比。结果表明,与生理 pH 值 (7.4) 相比,在模拟肿瘤微环境或溶酶体的酸性条件下,有效载荷的释放速度更快。
细胞实验
目前尚无针对连接子本身的标准体外细胞检测方法。对于含有CL2A的抗体药物偶联物(ADC),采用流式细胞术进行内吞作用检测。将细胞与ADC在4℃下孵育以促进结合,然后转移至37℃诱导内吞。在不同时间点,洗涤细胞以去除表面结合的抗体,并使用二抗检测剩余的表面抗体。利用溶酶体示踪剂的共聚焦显微镜观察ADC在酸性溶酶体区室中的共定位,从而确认连接子-有效载荷已递送至目标切割位点。
动物实验
CL2A 的动物研究并非独立进行。对于含有该连接子的抗体药物偶联物 (ADC),典型的体内实验方案是使用携带已建立肿瘤异种移植模型的雌性 NSG 或 BALB/c 裸鼠。将小鼠随机分组,每周一次静脉注射不同剂量的 ADC,持续 2-4 周。每两周测量一次肿瘤体积和体重。在机制研究中,于给药后不同时间点处死小鼠,收集肿瘤组织和血液样本。采用 ELISA 或 LC-MS/MS 定量分析肿瘤和血浆中总抗体、ADC 和释放的有效载荷的浓度,以确认肿瘤特异性递送和释放。
药代性质 (ADME/PK)
药代动力学性质并非针对CL2A本身测定,而是针对完整的抗体药物偶联物(ADC)测定。含有CL2A连接子的ADC,其抗体组分呈现典型的双相药代动力学特征,末端半衰期较长。连接子-有效载荷偶联物在循环中稳定,在7-21天内仅观察到极少量的脱偶联。释放的有效载荷通常能迅速从血浆中清除,半衰期较短,从而确保最低的全身暴露量。ADC的清除机制涉及蛋白水解降解,释放的小分子经肝脏代谢,并通过胆汁/粪便排泄。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
目前尚无CL2A的独立毒性数据。在临床前研究中,含有该连接子的抗体药物偶联物(ADC)的毒性主要归因于有效载荷,通常包括剂量限制性毒性,例如中性粒细胞减少症和胃肠道反应。在动物模型中,最大耐受剂量(MTD)通过剂量递增研究确定。毒理学监测包括血常规及分类计数、血清生化检查以及主要器官(肝脏、肾脏、骨髓、胃肠道)的组织病理学检查,以确定毒性靶器官并建立治疗剂量的安全范围。
参考文献

[1]. Antibody drug conjugates (ADC). Teknisk- naturvetenskaplig fakultet.

其他信息
CL2A并非药物,也未获准用于人体。它是一种研究级化学连接子,专为开发可裂解抗体偶联药物(ADC)而设计。其关键特性是pH敏感裂解,可释放有效载荷并促进旁观者效应,这有利于治疗靶抗原表达异质性的肿瘤。使用该连接子的拉贝妥珠单抗-戈维替康抗体偶联药物(labetuzumab govitecan ADC)是一种已知的构建体。该连接子本身尚未注册任何临床试验。仅供研究使用;不得用于人体治疗。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C50H79N9O16
分子量
1062.21
精确质量
1061.564
CAS号
2616704-22-2
PubChem CID
154573757
外观&性状
Colorless to light yellow viscous liquid
LogP
-3
tPSA
314
氢键供体(HBD)数目
6
氢键受体(HBA)数目
19
可旋转键数目(RBC)
44
重原子数目
75
分子复杂度/Complexity
1620
定义原子立体中心数目
1
SMILES
C1CC(CCC1CN2C(=O)C=CC2=O)C(=O)NCC3=CN(N=N3)CCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NC4=CC=C(C=C4)CO
InChi Key
CJDCJOXHKQMGGB-DBSIFAAZSA-N
InChi Code
InChI=1S/C50H79N9O16/c51-14-2-1-3-44(50(66)54-42-10-6-40(36-60)7-11-42)55-46(62)38-75-37-45(61)52-15-17-67-19-21-69-23-25-71-27-29-73-31-32-74-30-28-72-26-24-70-22-20-68-18-16-58-35-43(56-57-58)33-53-49(65)41-8-4-39(5-9-41)34-59-47(63)12-13-48(59)64/h6-7,10-13,35,39,41,44,60H,1-5,8-9,14-34,36-38,51H2,(H,52,61)(H,53,65)(H,54,66)(H,55,62)/t39?,41?,44-/m0/s1
化学名
N-[[1-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-[2-[[(2S)-6-amino-1-[4-(hydroxymethyl)anilino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-2-oxoethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethyl]triazol-4-yl]methyl]-4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexane-1-carboxamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 200 mg/mL (188.29 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9414 mL 4.7072 mL 9.4143 mL
5 mM 0.1883 mL 0.9414 mL 1.8829 mL
10 mM 0.0941 mL 0.4707 mL 0.9414 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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