| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 靶点 |
WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA is a substrate for aminopeptidase enzymes. The decapeptide is designed such that the tryptophan (Trp, W) residue is protected from fluorescence by its proximity to the DNP quencher on the modified lysine. Upon cleavage of the peptide bond adjacent to the quencher by an aminopeptidase, the tryptophan is released from the DNP quencher, resulting in a significant increase in fluorescence (typically measured at excitation ~280 nm, emission ~350 nm for tryptophan). The primary target is the family of aminopeptidases, including but not limited to aminopeptidase N (APN/CD13), aminopeptidase B, and other cytosolic or membrane-bound aminopeptidases. APN (CD13) is a zinc-dependent metalloprotease involved in angiogenesis, immune regulation, and cancer progression, making it an important therapeutic target. This substrate allows for the screening of potential inhibitors or activators of these enzymes. The specific cleavage site is between the quencher and tryptophan, although the exact cleavage pattern may depend on the particular aminopeptidase.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，WRVYEKC(dnp)ALK 四三氟乙酸 (tetraTFA) 本身不具有生物活性；它是一种底物，其裂解情况可作为氨肽酶活性的指标。该化合物通常用于荧光酶活性测定。在优化条件下，重组或纯化的氨肽酶（例如氨肽酶 N、CD13）可裂解该底物，并监测荧光强度随时间的变化。该反应的动力学参数包括：KM（米氏常数）、Vmax（最大反应速率）和 kcat（催化速率常数）。此类肽底物的典型 KM 值范围为 1-50 uM。该底物在测定条件下稳定，且在没有酶的情况下不会发生非特异性水解。荧光信号与酶活性成正比，因此可以进行精确的定量分析。该化合物无细胞毒性，且在测定浓度（通常为 1-50 uM）下不会干扰其他细胞过程。
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| 体内研究 (In Vivo) |
WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA 通常不进行体内研究，因为该化合物被设计为体外荧光底物而非治疗剂。该化合物用于离体组织匀浆或生物体液中，以测量氨肽酶活性。例如，可将肿瘤异种移植组织的裂解液或血浆与该底物孵育，以评估氨肽酶活性水平或测试氨肽酶抑制剂的体外疗效。然而，该肽本身不适用于活体动物。同行评议的文献中尚未报道该化合物在动物体内的疗效或安全性研究。它严格来说是一种研究用生化工具。如果用于体内（例如，活体成像），可以局部注射该底物并监测荧光，但此类应用并不常见。
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| 酶活实验 |
WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA 的标准非细胞检测方法是连续荧光氨肽酶活性检测。该检测通常在 96 孔黑色侧壁、透明底的微孔板中进行。反应混合物 (100-200 uL) 包含检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM ZnCl2，0.01% Brij-35 或 Triton X-100，用于维持酶的稳定性）、重组氨肽酶（例如，人氨肽酶 N/CD13，0.1-10 nM）和底物 WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA（通常终浓度为 1-50 uM）。底物以 DMSO 或水配制成储备液 (10-100 mM)，然后用检测缓冲液稀释至工作浓度。将酶加入含有底物的孔中即可启动反应。使用配备有激发波长为 280 nm、发射波长为 350 nm（用于检测色氨酸荧光）或其他设置（例如，如果使用红移更大的荧光染料，则使用激发波长 320 nm、发射波长 420 nm）的微孔板读数仪，在 30-37°C 下测量荧光强度。每 30-60 秒读取一次读数，持续 10-30 分钟。初始线性荧光强度增加速率（ΔRFU/min）与酶活性成正比。对于抑制剂筛选，在加入底物之前，将测试化合物与酶预孵育 5-10 分钟。扣除背景荧光（无酶存在）后，根据剂量-反应曲线确定抑制剂的 IC₅0 值。
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| 细胞实验 |
使用 WRVYEKC(dnp)ALK 四三氟乙酸 (tetraTFA) 的体外细胞分析通常涉及测量细胞裂解液、膜组分或完整细胞中的氨肽酶活性。对于细胞裂解液：将细胞（例如，HT-1080、MDA-MB-231 等癌细胞系或原代细胞）培养于合适的培养基（DMEM、RPMI-1640 + 10% FBS）中，直至汇合度达到约 90%。收集细胞，用 PBS 洗涤，并在冰上用裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1% Triton X-100、蛋白酶抑制剂混合物）裂解 30 分钟。通过离心（10,000×g，10 分钟，4℃）去除细胞碎片。使用 BCA 或 Bradford 法测定蛋白质浓度。酶活性测定中，将5-50 ug蛋白（细胞裂解液）加入96孔黑色板中的测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM ZnCl2、0.01% Triton X-100）中，随后加入WRVYEKC(dnp)ALK四三氟乙酸底物（终浓度10-100 uM）。在37℃下，于激发波长280 nm/发射波长350 nm处，每1-2分钟测量一次荧光强度，持续30-60分钟。完整细胞测定中：将细胞接种于96孔黑色板中，培养至汇合，用PBS洗涤，然后在无血清培养基中加入底物进行孵育。随时间推移测量荧光强度。使用氨肽酶抑制剂（例如，贝斯他汀）作为阳性对照，以验证活性特异性。通过 MTT 检测评估细胞活力，以确保化合物处理不会引起细胞毒性。
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| 动物实验 |
由于 WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA 是一种体外生化工具，因此其体内动物研究并非标准方法。然而，该化合物可用于离体研究。例如，为了测定动物模型组织样本中的氨肽酶活性：将携带皮下肿瘤异种移植瘤（例如 HT-1080 纤维肉瘤）的雌性 BALB/c 裸鼠（6-8 周龄）安乐死，收集肿瘤组织，称重后在裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1% Triton X-100、蛋白酶抑制剂混合物）中匀浆。匀浆液经离心（10,000×g，10 分钟，4℃）去除细胞碎片，收集上清液。采用 BCA 或 Bradford 法测定蛋白质浓度。氨肽酶活性测定中，将10-50 μg组织裂解液蛋白与测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM ZnCl₂、0.01% Triton X-100）和WRVYEKC(dnp)ALK四三氟乙酸底物（终浓度10-50 μM）混合于96孔黑色板中。使用酶标仪在37℃下，于激发波长280 nm/发射波长350 nm处测量30-60分钟内的荧光强度。计算初始速率（ΔRFU/min）并根据蛋白浓度进行标准化。该方法可用于体外组织中氨肽酶活性的定量分析。此外，也可使用动物血浆或血清样本来测定循环氨肽酶活性。所有动物实验程序均须经机构动物护理和使用委员会批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
WRVYEKC(dnp)ALK 四三氟乙酸盐的药代动力学 (PK) 特性无关紧要，因为该化合物并非拟用作体内治疗剂。它是一种荧光肽底物，仅用于体外生化分析。目前尚未开展或报道该化合物的 ADME（吸收、分布、代谢、排泄）研究。该化合物并非设计用于穿过细胞膜；它用于细胞裂解液（膜破裂后）或完整细胞中，在细胞可能通过内吞作用或被动扩散摄取底物的条件下，但尚未对此进行系统研究。四三氟乙酸盐形式用于提高其在水性缓冲液中的溶解度。该化合物在标准实验室储存条件下（-20℃，避光防潮）稳定。仅供研究使用；不得用于人体或动物给药。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
WRVYEKC(dnp)ALK tetraTFA 并非药物，也不用于治疗用途。它是一种生化研究工具（荧光肽底物），用于体外和离体测定氨肽酶活性。该化合物含有 DNP 猝灭剂，可抑制色氨酸的固有荧光；氨肽酶的酶促切割作用使色氨酸与猝灭剂分离，从而导致荧光强度显著增加。这种比率或连续测定方法可实时监测酶活性，适用于氨肽酶抑制剂的高通量筛选 (HTS) 或酶动力学参数的测定。tetraTFA 盐可提高溶解度。除作为氨肽酶底物外，该化合物没有已知的其他生物活性。在工作浓度下，它在基于细胞的测定中不具有细胞毒性。尚未注册临床试验。仅供研究使用；不得用于人体诊断或治疗。
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| 分子式 |
C74H100F12N18O26S
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| 分子量 |
1917.74
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.5214 mL | 2.6072 mL | 5.2145 mL | |
| 5 mM | 0.1043 mL | 0.5214 mL | 1.0429 mL | |
| 10 mM | 0.0521 mL | 0.2607 mL | 0.5214 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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