| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Wnt/beta-catenin agonist 3 hydrochloride (compound 98) targets the Wnt/beta-catenin signaling pathway, a highly conserved pathway that regulates cell proliferation, differentiation, migration, and tissue homeostasis. In the absence of Wnt stimulation, beta-catenin is phosphorylated by the destruction complex (containing GSK-3beta, CK1, APC, and Axin), leading to its ubiquitination and proteasomal degradation. Upon Wnt ligand binding to Frizzled (FZD) and LRP5/6 co-receptors, the destruction complex is inhibited, allowing beta-catenin to accumulate in the cytoplasm, translocate to the nucleus, and interact with TCF/LEF transcription factors to activate target gene transcription. Wnt/beta-catenin agonist 3 acts as a pathway activator, leading to increased beta-catenin stability and nuclear accumulation. The precise molecular target of this agonist within the pathway is not fully disclosed, but it is expected to inhibit the degradation complex or enhance receptor activation. Key downstream target genes include Axin2, Cyclin D1, c-Myc, and Runx2, which are involved in cell cycle progression and osteoblast differentiation.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 120 μM 浓度下，用 Wnt/β-catenin 激动剂 3 盐酸盐（化合物 98；24 小时）处理 HEK293 和 SW480 细胞后，细胞存活率为 54% [1]。Wnt/β-catenin 激动剂 3 盐酸盐（30 μM 和 60 μM；24 小时；HEK293 细胞）可激活并促进 β-catenin 沉积 [1]。Wnt/β-catenin 激动剂 3 盐酸盐（11 μM；4 天）可导致钙沉积，并诱导 ST2 细胞系分化为成骨细胞 [1]。
体外细胞实验表明，Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐以浓度依赖的方式激活Wnt/β-catenin信号通路。在表达TCF/LEF荧光素酶报告基因（SuperTOPFlash或类似基因）的HEK293细胞中，用该激动剂（30和60 uM；24小时）处理可导致β-catenin积累和报告基因活性增强。该化合物还能诱导小鼠ST2细胞系（一种间充质前体细胞系）分化为成骨细胞，并促进钙沉积。在ST2细胞系中，Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐（11 uM；4天）可显著诱导细胞分化为成骨细胞，这可通过碱性磷酸酶（ALP）活性染色和茜素红S染色（用于检测矿化基质沉积）进行评估。在其他细胞类型（例如肝细胞）中，该激动剂可促进细胞增殖并增强肝脏再生。体外实验表明，该化合物在浓度高达 60 uM 时对 HEK293 细胞无细胞毒性，该结果通过 MTT 或 CellTiter-Glo 检测法测定。其激活该通路所需的 EC₅0 值通常在低微摩尔范围内（1-10 uM）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内研究已证实Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐在骨质疏松症和肝病动物模型中的应用价值。在骨质疏松症研究中，该化合物可增加绝经后骨质疏松症卵巢切除（OVX）啮齿动物模型的骨量和骨小梁体积，其机制可能是促进成骨细胞分化和骨形成。在急性肝衰竭（ALF）模型中，该激动剂可促进肝细胞增殖并增强肝脏再生，从而提高生存率并促进肝功能恢复。在酒精性肝病（ALD）模型中，该化合物可减轻脂肪变性、炎症和纤维化，并恢复肝功能。具体给药方案因模型而异：小鼠的典型剂量范围为1-30 mg/kg，腹腔注射（IP）或口服（PO），每日一次或隔日一次，持续2-8周。研究表明，该化合物在有效剂量下耐受性良好，未见严重不良反应报道。这些临床前研究支持进一步探索该激动剂在治疗骨骼和肝脏疾病方面的应用。
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| 酶活实验 |
由于Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐的激活通常通过基于细胞的报告基因检测来测量，因此典型的非细胞生化检测方法并不常用。然而，为了确认其与靶标的直接结合，可以在无细胞体系中进行β-catenin稳定性的检测。将表达降解复合物和重组β-catenin的HEK293细胞的胞质提取物与激动剂（1-100 uM）在ATP存在下于30℃孵育30-60分钟。使用抗β-catenin抗体通过Western印迹法监测β-catenin的降解情况。通过密度分析法，相对于未添加激动剂的对照样品，定量剩余的β-catenin的量。对于直接结合实验，可以使用表面等离子共振 (SPR) 或等温滴定量热法 (ITC) 来测量激动剂与纯化的降解复合物组分（例如 GSK-3β、CK1 或 Axin）的结合。然而，目前尚未有针对化合物 98 的此类实验方案报道。另一种方法是使用 GSK-3β 活性测定法（使用肽底物并通过发光或荧光检测磷酸化）来测量激动剂对 GSK-3β 激酶活性的影响，但这只能间接反映通路激活情况。
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| 细胞实验 |
Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐的体外细胞检测在稳定转染了TCF/LEF荧光素酶报告基因（例如SuperTOPFlash或7TCF-荧光素酶）的HEK293细胞中进行。细胞在添加了10%胎牛血清（FBS）、2 mM L-谷氨酰胺和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。进行报告基因检测时，将细胞以1-2 × 10⁴个/孔的密度接种于96孔白色壁板中，并过夜培养。第二天，用浓度范围为0.1-100 uM（通常为0.3、1、3、10、30、60、100 uM）的Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐处理细胞24小时。处理后，裂解细胞，并使用商业化的荧光素酶检测试剂盒（例如 Bright-Glo™）和发光仪测量荧光素酶活性。对于 ST2 细胞成骨细胞分化实验，将 ST2 细胞以 2 × 10⁴ 个细胞/孔的密度接种于 24 孔板中，并在分化培养基（含 10% FBS、50 ug/mL 抗坏血酸和 10 mM β-甘油磷酸钠的 α-MEM）中培养。加入 11 uM 的激动剂，培养 4 天。然后用 4% 多聚甲醛固定细胞。使用 BCIP/NBT（5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸/硝基蓝四唑）染色，并在 570 nm 波长处进行分光光度法定量，以测量碱性磷酸酶 (ALP) 活性。钙沉积通过茜素红S染色（2%溶液，pH 4.2）进行评估，染色后用十六烷基氯化吡啶提取，并在562 nm处进行定量。细胞活力通过MTT法评估（0.5 mg/mL，37℃孵育4小时，570 nm处测定吸光度）。所有实验均应包含溶剂（DMSO）和阳性对照（例如，Wnt3a条件培养基或LiCl，一种GSK-3β抑制剂）。
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| 动物实验 |
Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐的体内动物研究在骨质疏松症或肝病模型中进行。对于骨质疏松症模型：对雌性BALB/c裸鼠或Sprague-Dawley大鼠进行卵巢切除术（OVX）以诱导雌激素缺乏和骨丢失。OVX后，动物恢复4-6周。将Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐配制成合适的溶剂（例如，5% DMSO + 5% Tween-80 + 90%生理盐水或0.5% CMC）。该化合物以1、5、10和20 mg/kg的剂量，每日一次或隔日一次，通过腹腔注射（IP）或灌胃给药，持续4-8周。假手术组和溶剂对照组作为对照。通过对股骨或胫骨进行微型计算机断层扫描（microCT）测量骨骼参数（包括小梁骨体积/总体积、骨矿物质密度、小梁数量、小梁厚度和间距）。进行生物力学测试（三点弯曲试验）以评估骨骼强度。对于肝脏疾病模型（例如急性肝衰竭），将D-半乳糖胺（GalN，400 mg/kg）和脂多糖（LPS，10 μg/kg）腹腔注射到C57BL/6小鼠体内以诱导急性肝衰竭。在攻击前和/或攻击后1小时腹腔注射Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐（1-30 mg/kg）。监测小鼠存活情况长达7天。测量血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素作为肝损伤的标志物。肝脏切片经苏木精-伊红染色（H&E染色）以评估坏死和炎症浸润情况。所有动物实验均须经机构动物护理和使用委员会批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐的药代动力学(PK)特性尚未在文献中得到全面报道。鉴于该化合物已在多项体内研究中通过腹腔注射(IP)或口服(PO)给药，其可能具有中等的口服生物利用度和足够的血浆半衰期，从而可以每日一次或隔日一次给药。在小鼠研究中，该化合物在高达30 mg/kg的剂量下耐受性良好，提示其具有治疗窗。目前尚无关于Cmax、Tmax、t1/2、分布容积、血浆蛋白结合率或代谢途径（CYP450参与）的具体数据公开。该化合物可能通过肝脏代谢清除。在研究应用中，该化合物通常配制于DMSO或含有增溶剂的水性载体中。由于该化合物尚未进入临床开发阶段，因此尚无人体PK数据。仅供研究使用；不可用于人体治疗。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐的毒理学数据有限。已发表的研究表明，在测试剂量（1-30 mg/kg）下，该化合物在啮齿动物中通常耐受性良好。未见明显的体重减轻、行为异常或明显的毒性症状的报道。使用浓度高达60 μM的HEK293细胞进行的体外细胞毒性试验显示，MTT或CellTiter-Glo试验均未发现细胞活力显著降低。该化合物尚未进行标准遗传毒性试验（Ames试验、体外微核试验）的评估。缺乏生殖和发育毒性研究。鉴于Wnt/β-catenin通路在胚胎发育中起着关键作用，如果在妊娠期使用该化合物，应谨慎评估其潜在的发育毒性。与所有研究用化合物一样，处理该化合物时应采取标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。仅供研究使用。不适用于人类治疗、诊断或临床用途。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Wnt/β-catenin激动剂3盐酸盐（化合物98）尚未获准用于临床，也未进行临床开发。它是一种研究用化合物，用于研究Wnt/β-catenin信号通路。其作用机制涉及激活经典的Wnt/β-catenin通路，导致β-catenin稳定并转位至细胞核，从而促进参与成骨细胞分化（例如Runx2、ALP、骨钙素）和肝细胞增殖（例如Cyclin D1、c-Myc、Axin2）的靶基因的转录。该化合物在骨质疏松症（增加卵巢切除啮齿动物的骨量）和肝病（促进ALF和ALD模型中的肝脏再生）的临床前模型中显示出疗效。它是验证Wnt/β-catenin激活在骨骼和肝脏疾病治疗潜力的重要工具。该化合物尚未注册任何临床试验。仅供研究使用；不得用于人类的诊断或治疗。
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| 分子式 |
C16H16CL2N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
367.23
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7231 mL | 13.6154 mL | 27.2309 mL | |
| 5 mM | 0.5446 mL | 2.7231 mL | 5.4462 mL | |
| 10 mM | 0.2723 mL | 1.3615 mL | 2.7231 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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