Toluidine Blue (purity 36%) (Toluidine Blue O (purity 36%))

目录号: V76403 纯度: ≥98%
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)纯度36%,是一种碱性醌亚胺染料(活体染料),对酸性组织成分有很高的亲和力,可以将细胞核染成蓝色,将多糖染成紫色。
Toluidine Blue (purity 36%) (Toluidine Blue O (purity 36%)) 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
100mg
250mg
500mg
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产品描述
纯度为36%的甲苯胺蓝(甲苯胺蓝O)是一种碱性醌亚胺染料(活体染料),对酸性组织成分具有高亲和力,可将细胞核染成蓝色,多糖染成紫色。纯度为36%的甲苯胺蓝可使肥大细胞、黏蛋白和软骨细胞呈现异染性。纯度为36%的甲苯胺蓝可将植物组织和细胞的不同成分染成不同的颜色。纯度为36%的甲苯胺蓝也可作为辅助诊断工具,用于识别恶性病变,例如癌症。
纯度为36%的甲苯胺蓝(甲苯胺蓝O)是一种碱性醌亚胺染料(一种噻嗪类异染性染料),可作为活细胞染料,广泛应用于组织学和显微镜学[31L11-L12]。它对酸性组织成分具有高亲和力,能够将细胞核染成特征性的蓝色,将多糖染成紫色。这种异染性(将不同的成分染成不同的颜色)对于识别特定的细胞成分(例如肥大细胞颗粒、黏蛋白、软骨和植物细胞壁)尤为有用。36%的纯度指的是染料的标准化含量,可确保染色结果的一致性。
生物活性&实验参考方法
靶点
As a biological stain, Toluidine Blue does not have a single molecular target but rather binds electrostatically to negatively charged (anionic) molecules in tissues. It has a high affinity for acidic tissue components such as the sulfate and phosphate groups found in nucleic acids (DNA/RNA) and proteoglycans. The staining mechanism is based on its chemical structure as a cationic dye, which allows it to bind to these polyanionic molecules. This property makes it a valuable tool for visualizing structures such as nuclei (blue), mast cell granules (purple/red), cartilage matrix (purple), and plant cell walls (blue-green).
体外研究 (In Vitro)
操作指南(以下是我们建议的操作流程;请根据您的具体需求进行调整;仅供参考)。肥大细胞浸润的鉴定[1]:1. 首先,将组织样本浸入10%中性缓冲福尔马林溶液中固定一整天。2. 将组织从固定液中取出,浸入70%乙醇溶液中。3. 石蜡包埋:将组织依次浸入以下溶液中30分钟:70%、85%、95%和100%乙醇、二甲苯以及熔化的石蜡。4. 将石蜡包埋的组织切片,厚度为5-7 μm,并将切片转移到载玻片上。5. 使用前,将载玻片在55°C下烘烤至少1小时。 2. 组织染色:1) 将石蜡包埋的组织切片浸入二甲苯(或Histo-Clear)中5分钟,以去除石蜡。2) 将组织依次浸入100%、95%和70%的乙醇中5分钟,最后浸入蒸馏水中2分钟,以进行组织复水。3) 将切片浸入Harris苏木精溶液中70秒。4) 用干净的自来水冲洗切片2-3次,以快速去除残留的苏木精。用纸巾轻拍切片几秒钟,以去除多余的水分。5) 将切片快速浸入70%的乙醇中3次,然后在自来水下冲洗3分钟,重复上述步骤。去除多余的水分。6) 将切片浸入Scott蓝化液中,最多1分钟。在此过程中,苏木精在细胞核内逐渐转化为不溶性蓝色。6) 使用高倍光学显微镜观察玻片,检查细胞核是否染色正确。7) 用新鲜自来水冲洗玻片三分钟,然后沥干多余的水。8) 将玻片浸入浓度约为1.1%、纯度为36%的甲苯胺蓝溶液中四分钟(注1)。9) 用新鲜自来水冲洗玻片三分钟,然后沥干多余的水。10) 将玻片快速浸入70%乙醇溶液中三次,然后浸入5%伊红溶液中五次。11) 为了脱水,将玻片依次浸入70%乙醇溶液(两分钟)、95%乙醇溶液(每次两分钟)和100%乙醇溶液(每次两分钟)。最后,将玻片浸入二甲苯(或Histo-Clear)中,每次两分钟。 12) 使用二甲苯基封片剂,用消毒过的盖玻片将每张载玻片永久封片。13) 在明场显微镜下观察载玻片之前,至少使其干燥60分钟。首先,配制1.1%的36%纯度甲苯胺蓝溶液:将1.1克纯甲苯胺蓝与100毫升0.1 M pH 4的醋酸钠缓冲液混合。充分混匀。为了将pH值降至2.0-2.5,加入几滴1 M盐酸。染色在25℃避光条件下进行。一切准备就绪。使用36%纯度的甲苯胺蓝[2][3]:1. 可染色结缔组织中的粘蛋白,特别是酸性粘蛋白。背景呈蓝色,而组织则染成紫色至红色。2. 肝素和组胺可使肥大细胞颗粒染成紫色。 3. 虽然淀粉样蛋白染色呈蓝色,但在偏振光下会呈现鲜艳的红色双折射。4. 内分泌细胞的颗粒被染成紫色至深红色(染色浓度:0.01%)。5. 硫脂呈红棕色或黄色。脂质只有在酸性足够强,能够引起异染性时才会被染色。6. 在白喉棒状杆菌中可见聚合的无机多聚磷酸盐颗粒,其染色呈红紫色。7. 幽门螺杆菌在颜色不一的背景上呈现深蓝色染色(染色浓度:1%)。8. 由于染色过程快速(10-20秒)且能提高细胞清晰度,冰冻切片可使用纯度为36%的甲苯胺蓝染色。 9. 植物的木质素、韧皮部和植物的其余部分都可以用纯度为 36% 的甲苯胺蓝染成蓝绿色或淡蓝绿色。
在体外,甲苯胺蓝并非用于传统的“活性”检测,而是用于培养细胞或组织切片的染色。例如,在细胞生物学中,它被用作一种简单快速的染色剂,用于评估96孔板中的细胞密度和形态。在植物生物学中,它可用于对木质部、韧皮部和木质化组织进行染色。它还可用于对组织冰冻切片进行染色,以观察组织的整体形态或识别特定特征,例如有丝分裂象、肥大细胞或软骨。与某些蛋白聚糖结合后发生的特征性异染性变色(从蓝色变为紫色/红色)是其活性的关键指标。
体内研究 (In Vivo)
在体内,甲苯胺蓝O通常不用作全身治疗药物,但可用作诊断工具。它在内科和牙科手术中用于识别潜在的癌变病灶(活体染色)。当局部应用于可疑组织时,染料会被快速分裂的细胞吸收,使其染成深蓝色,从而有助于引导活检。它也用于眼科的某些诊断程序。其体内活性基于其对酸性组织成分的亲和力原理。
酶活实验
甲苯胺蓝通常不用于酶/受体结合实验,因为它是一种用于染色和显色的染料。然而,为了进行质量控制或标准化,可以研究该染料与标准底物的结合情况。一个简单的实验方案是:配制甲苯胺蓝溶液(0.1% w/v),溶于缓冲液(例如,0.1 M 醋酸盐缓冲液,pH 4.5)。然后将该溶液加入含有标准量多阴离子分子(如肝素或软骨切片)的微孔板中。短暂孵育(5-10分钟)后,洗涤微孔板,并用溶剂(例如,含0.1 M HCl的50%乙醇)洗脱结合的染料。最后,在染料的特征波长(约630 nm)处测量洗脱液的吸光度,以定量分析其结合情况。
细胞实验
对于标准的体外细胞染色方案,首先去除培养基,并用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞。然后用10%中性缓冲福尔马林等固定液固定细胞10-15分钟,之后用PBS洗涤。接着,用0.1%甲苯胺蓝溶液(溶于蒸馏水)染色1-5分钟。染色后,用蒸馏水轻轻冲洗细胞以去除多余的染料。然后将染色后的细胞风干。在光学显微镜下可以清晰地观察到细胞核和细胞内的异染性颗粒。
动物实验
甲苯胺蓝在体内应用的常见方法是将其作为活体染料用于口腔组织病变的识别。首先清洁并干燥目标区域。用棉签蘸取1%的甲苯胺蓝水溶液,或用清水冲洗,将溶液涂抹于组织表面30-60秒。然后用清水轻轻冲洗。目视检查并记录任何残留的蓝色染色区域,这些区域核酸含量高,疑似存在发育不良或恶性肿瘤。这一简便的操作有助于临床医生进行活检。
药代性质 (ADME/PK)
甲苯胺蓝是一种小分子阳离子染料。当局部用于诊断染色时,通常不会全身给药;因此,传统的药代动力学(吸收、分布、代谢、排泄)参数通常不进行常规测定。其特性在于能迅速与应用部位的组织成分结合。36%纯度的甲苯胺蓝是一种标准化配方,可确保批次间染色强度的一致性,这是该化合物的主要“质量控制”手段。其分布仅限于应用部位,且易于从未结合的组织中洗脱。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
甲苯胺蓝O作为实验室试剂和诊断工具,具有悠久的安全使用历史。然而,它不适用于全身给药。在实验环境中,高剂量的吩噻嗪类染料全身给药与高铁血红蛋白血症和溶血性贫血有关。作为外用药物,它通常耐受性良好,偶尔会在用药部位出现轻微的局部刺激。它还具有轻微的光敏性。由于它会沾染皮肤和衣物,因此应遵循标准的实验室安全预防措施,包括穿戴实验服和手套。它是一种研究用化学品,不可用于人体。
参考文献

[1]. Detection of Infiltrating Mast Cells Using a Modified Toluidine Blue Staining. Methods Mol Biol. 2017;1627:213-222.

[2]. Toluidine blue: A review of its chemistry and clinical utility. J Oral Maxillofac Pathol. 2012 May;16(2):251-5.

[3]. Polychromatic staining of plant cell walls by toluidine blue O. Protoplasma, 1964, 59(2): 368-373.

其他信息
甲苯胺蓝O是一种异染性染料,可用于组织切片、冰冻切片和培养细胞的染色,以便进行显微镜分析。它能区分染色细胞核(蓝色)和多糖、肥大细胞颗粒以及软骨(紫色/红色),因此是识别这些结构的常规组织学染色剂。36%纯度的甲苯胺蓝O是该染料的标准化形式,而生产商的纯度为99.34%。甲苯胺蓝也称为氯化甲苯铵。它常用于基础组织学、病理学和发育生物学实验室。它并非治疗药物,未进行临床试验,也未获准用于人体。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
相关CAS号
Toluidine Blue;92-31-9
外观&性状
Solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们