Phytohemagglutinins

别名: PHA-P 植物血凝素; 植物血球凝集素-P; 植物血球凝集素PHA-M;Phytohemagglutinins、植霉血凝素;植物血球凝集素;植物血球凝集素(PHA-P);植物血球凝集素(PHA-P) ,BR;植物血球凝集素,PHA;植物血球凝集素PHA-P;植物血球凝聚集素 (植物血凝素);植物血球凝集素(PHA)
目录号: V76632 纯度: Protein Content=86%
植物血凝素 P (PHA-P) 是一种有丝分裂原,可选择性刺激血源或淋巴单核细胞来源的细胞。
Phytohemagglutinins CAS号: 9008-97-3
产品类别: Immunology & Inflammation related
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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纯度/质量控制文件

纯度: Protein Content=86%

纯度: ≥98%

产品描述
植物血凝素 P (PHA-P) 是一种有丝分裂原,可选择性刺激血源或淋巴单核细胞来源的细胞。植物血球凝集素-P(PHA-P;CAS号 9008-97-3)是一种从红芸豆(Phaseolus vulgaris)中提取的糖蛋白凝集素,由红细胞凝集素(PHA-E)和白细胞凝集素(PHA-L)两个亚基组成的异源四聚体。与粘蛋白形式的PHA-M不同,PHA-P是以蛋白质为主的分离物,具有高T淋巴细胞有丝分裂原活性,同时保留红细胞凝集特性。它被广泛用作强效T细胞有丝分裂原,在免疫学研究中刺激淋巴细胞增殖、细胞因子产生,以及评估体内外细胞免疫功能。
生物活性&实验参考方法
靶点
T cells; Apoptosis
体外研究 (In Vitro)
- 在10 µg/mL的浓度下,PHA-P刺激了阳性选择的蜕膜CD8+ T淋巴细胞(1×10⁶细胞/mL)产生细胞因子。孵育24和48小时后,在培养上清液中检测到可检测水平的CSF2、IFNG、IL1B、IL2、IL6、IL8、IL10、IL12和TNF,而IL4水平低于检测范围。具体而言,PHA-P刺激的蜕膜CD8+ T淋巴细胞产生了高水平的IFNG和IL8,以及低水平的GM-CSF、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12和TNF。[1]
- 在胎盘外植体侵袭实验中,PHA-P(10 µg/mL)被用作对照。当胎盘外植体在上室中与含有PHA-P的培养基共同培养7天时,与单独培养基对照组相比,侵袭的绒毛外滋养细胞数量没有差异。[1]
植物血凝素-P(10 μg/ml;24-48 小时)刺激的蜕膜 CD8+ T 细胞产生适量的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (CSF2)、IL1B、IL2、IL6、IL10、IL12 和肿瘤坏死因子,以及高水平的干扰素 γ 和白细胞介素 (IL) 8[2]。
在体外,PHA-P表现出强效的T淋巴细胞有丝分裂原活性。在5至10 μg/mL浓度范围内,它能有效刺激人外周血单核细胞(PBMC)和T细胞的增殖。PHA-P(10 μg/mL;24-48小时)诱导刺激后的蜕膜CD8+ T细胞产生多种细胞因子,包括适量的GM-CSF、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α,以及高水平的IFN-γ和IL-8。通过溴脱氧尿苷掺入法测定,刺激人PBMC的有丝分裂活性阈值≤10 μg/mL。
体内研究 (In Vivo)
给予植物血凝素-P(腹腔注射;25 和 50 毫克/千克;每天 15 天)的雄性 Sprague-Dawley 大鼠表现出纵向骨生长、软骨细胞计数、软骨板厚度、硬组织干骺端质量、钙化百分比的减少软骨核心和每毫米骨表面的成骨细胞数量。此外,PHA-P 提高了每个破骨细胞的平均细胞核数量、标记的破骨细胞核数量以及破骨细胞总数[1]。
在体内,PHA-P表现出免疫刺激作用和情境依赖性免疫抑制效应。在小鼠中,腹腔内给药有效抑制了H-2基因座上的皮肤同种异体移植排斥反应,使移植物存活率提高70-130%,且无明显死亡率或明显毒性。相反,在大鼠模型中,腹腔注射PHA-P(25和50 mg/kg,每日一次,持续15天)会减少长骨生长、软骨细胞计数和软骨板厚度,同时增加破骨细胞数量。在感染旋毛虫的小鼠中,感染前24小时静脉注射PHA-P(10 mg/kg)可刺激空肠黏膜和肌肉炎性浸润中的细胞凋亡,与感染对照组相比,肌肉幼虫数量减少。
酶活实验
作为一种凝集素,PHA-P通过碳水化合物结合发挥作用,而非经典的酶/受体相互作用。采用标准血凝实验来表征其结合活性:在V底96孔板中用磷酸盐缓冲液(PBS)制备PHA-P的连续两倍稀释液。向每孔加入等体积的2%洗涤后的人或动物红细胞(通常为O型人红细胞)悬液。轻轻混合平板,室温孵育1-2小时。通过肉眼观察血凝情况,凝集表现为弥漫性细胞聚集薄层,滴度定义为显示阳性凝集的最高稀释度。使用特异性单糖(如D-甘露糖、N-乙酰-D-半乳糖胺)进行抑制实验可确定其碳水化合物结合特异性。
细胞实验
- 细胞因子产生实验: 将阳性选择的CD8+蜕膜淋巴细胞以1×10⁶细胞/mL的浓度重悬于完全培养基中。将100 µL该细胞悬液分装到圆底96孔板的孔中。加入等体积的浓度为10 µg/mL的PHA-P以刺激CD8+蜕膜淋巴细胞。然后将板孵育24和48小时。孵育后,收集上清液,在微量离心机中以最大速度离心2分钟,以获得无细胞上清液,并于-70°C保存,用于后续细胞因子分析。[1]
- 侵袭实验(对照): 将胎盘外植体置于包被Matrigel的8 µm孔径滤器上建立体系。向下室加入200 µL完全培养基。次日(第1天),向对照孔的上室中加入200 µL含有PHA-P(10 µg/mL)的DMEM-F12培养基,确保绒毛外植体被培养基覆盖。然后在37°C、5% CO₂培养箱中培养7天。7天后,去除Matrigel和外植体,并清洁膜的上侧。将滤膜在10%中性缓冲福尔马林中固定,苏木精和伊红染色,并封片。在x100放大倍数下对滤膜下表面的整个区域进行细胞计数。PHA-P对照组与单独培养基对照组之间侵袭的绒毛外滋养细胞数量没有差异。[1]
典型的PHA-P刺激PBMC增殖实验采用Ficoll密度梯度离心法分离的人外周血单个核细胞。将细胞以2 × 10⁶细胞/mL的密度接种于含完全培养基(DMEM或RPMI-1640,添加10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素和Glutamax)的24孔板中。加入PHA-P至终浓度5-10 μg/mL。在37°C、5% CO₂培养箱中培养24-72小时,具体时间取决于检测终点。对于增殖评估,可在48-72小时后进行5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)掺入实验,或使用MTT法或流式细胞术检测细胞活力。对于细胞因子分析,在24-48小时收集培养上清液进行ELISA或多因子检测。
动物实验
PHA-P的代表性体内研究采用小鼠同种异体移植排斥模型。雌性小鼠(如C3H和C57BL/6品系)在皮肤移植前接受大剂量PHA-P腹腔注射致敏(根据研究不同,剂量范围为10-50 mg/kg),移植后每日腹腔注射较小剂量。通过每日肉眼观察监测移植物存活情况,移植物完全坏死定义为排斥反应。对于感染模型中的免疫调节研究,PHA-P(10 mg/kg)在病原体攻击前24小时静脉给药。检测终点包括通过流式细胞术(Annexin-V染色)分析淋巴细胞凋亡、组织组织学(TUNEL法)和病原体载量定量。
药代性质 (ADME/PK)
标准文献中关于PHA-P的具体药代动力学数据有限。作为一种高分子量糖蛋白(约110-150 kDa),PHA-P经口服途径预计不会被显著吸收。经胃肠外给药(静脉或腹腔注射)后,由于其分子大小和凝集素特性,它可能主要分布于血管和淋巴隔室。推测其通过蛋白水解降解进行代谢,但在已发表的药代动力学研究中,半衰期(t₁/₂)、分布容积(Vd)和清除率(CL)等详细参数尚未得到系统表征。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
PHA-P表现出中等毒性特征。急性毒性主要与其血凝活性有关,高剂量时可导致红细胞聚集和微血管并发症。在动物研究中,大鼠腹腔注射剂量高达50 mg/kg时未见死亡率报告,但对骨形态产生了显著影响。值得注意的是,在免疫抑制剂量下的小鼠同种异体移植研究中,PHA-P被描述为“无明显毒性”。在人类临床应用中(10-40 mg/天)可能引起一过性过敏反应,罕见过敏性休克病例报道。口服含有PHA的未煮熟红芸豆可诱发以恶心、呕吐和腹泻为特征的食物中毒。
参考文献
[1]. Effector activity of decidual CD8+ T lymphocytes in early human pregnancy. Biol Reprod. 2006;75(4):562-567.
其他信息
- PHA-P(10 µg/mL)被用作刺激剂,诱导蜕膜CD8+ T淋巴细胞产生细胞因子,并作为滋养细胞侵袭实验中的对照。[1]
- 使用经PHA-P刺激的蜕膜CD8+ T淋巴细胞的上清液(48小时条件培养基)来评估其对滋养细胞侵袭的影响。与单独的PHA-P对照相比,这些上清液显著增加了绒毛外滋养细胞穿过Matrigel侵袭的能力(相对于PHA-P对照标准化的侵袭细胞平均数量:280 ± 61.3 vs. 100 ± 0,P = 0.006)。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
CAS号
9008-97-3
相关CAS号
Phytohemagglutinin;9008-97-3
PubChem CID
596533
外观&性状
Typically exists as White to light yellow solids at room temperature
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
419
定义原子立体中心数目
0
别名
PHA-P
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O :~10 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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