| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NHC-triphosphate tetrasodium directly targets and inhibits viral RNA-dependent RNA polymerases (RdRp). It acts as a weak alternative substrate, meaning the viral polymerase can mistake it for a natural cytidine triphosphate (CTP) and incorporate it into the growing viral RNA chain. Upon incorporation, the compound exhibits a dual mechanism of action: it can act as a non-obligate chain terminator, which prevents the addition of further nucleotides and halts RNA synthesis, or it can cause lethal mutagenesis, where the incorporated analog leads to an accumulation of mutations in the viral genome, rendering the virus non-infectious. This mechanism targets the viral replication machinery and is distinct from that of many other antiviral drugs, making it effective against a wide range of RNA viruses. NHC-TP shows high selectivity for viral polymerases over host DNA polymerases.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在细胞内代谢实验中，用 10 μM 的 3H 标记的 NHC 处理 HCV 复制子细胞。孵育 1、2 和 8 小时后，测量细胞内核苷酸水平。NHC 迅速转化为单磷酸、二磷酸和三磷酸形式；8 小时内，NHC-TP 的浓度可达 71.12 pM[1]。如果 NHC-三磷酸 (NHC-TP) (5–40 μM) 不存在，则会产生全长聚合产物；它可能作为一种弱的替代底物。此外，在无细胞 HCV NS5B 聚合事件中，观察到明显的电泳迁移，并且插入 NHC-TP 而不是 CTP 后，聚合产物的分子量增加 16（多一个氧原子）[1]。将 NHC (10–50 μM；4 小时) 或 NHC 的 McGuigan 磷酰胺前药在 Huh-7 细胞中培养。液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）用于评估细胞内初级化学物质和磷酸化代谢物的水平。虽然NHC-三磷酸仍然是最主要的代谢物，但也能检测到痕量的NHC-单磷酸（MP）和NHC-二磷酸（DP）[2]。NHC-三磷酸（NHC-TP）代谢物能够通过直接靶向病毒聚合酶发挥非必需链终止剂的作用。这一点非常重要，因为它可以通过诱变或链终止抑制早期负链RNA的合成，从而阻碍复制酶复合物的正确组装。
在用 10 uM 3H 标记的 NHC 处理的 HCV 复制子细胞进行的细胞内代谢分析中，结果表明 NHC 可迅速转化为其单磷酸、二磷酸和三磷酸形式。孵育 8 小时后，NHC-三磷酸 (NHC-TP) 的浓度最高可达 71.12 pM，表明其在细胞内高效生成。在无细胞 HCV NS5B 聚合酶活性分析中，NHC-TP (5-40 uM) 可取代 CTP 掺入到正在延伸的 RNA 链中。这种掺入使聚合产物的分子量每次增加 16 道尔顿（相当于一个额外的氧原子），并导致明显的电泳迁移率变化，证实了其作为弱替代底物的作用。用 NHC (10-50 uM，孵育 4 小时) 处理的 Huh-7 细胞显示，通过 LC-MS/MS 测定，NHC-三磷酸仍然是细胞内最丰富的磷酸化代谢物。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无直接在动物体内使用该四钠盐的具体体内数据。其体内活性已通过其母体前药（可透过细胞膜）的研究得到证实。例如，NHC 的前药莫努匹拉韦 (molnupiravir) 已在流感、SARS-CoV-2 和其他 RNA 病毒的小鼠模型中显示出强大的体内抗病毒功效。其体内作用机制涉及前药转化为 NHC，后者进入细胞后被磷酸化为活性三磷酸代谢物 (NHC-TP)。NHC-TP 被认为在抑制早期负链 RNA 合成中发挥重要作用，其作用机制可能是通过链终止或致死性突变，进而干扰正确复制酶复合物的形成。由于带电分子无法透过细胞膜，因此该四钠盐形式主要用于生化分析，而非直接体内给药。
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| 酶活实验 |
无细胞聚合酶活性测定用于评估NHC-三磷酸四钠的直接抑制活性。该测定使用纯化的病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）。反应混合物（50 uL）包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM NaCl、1 mM MnCl2或MgCl2、0.5 uM RNA模板-引物（例如，5'-生物素标记的RNA模板）、100 uM ATP、GTP、UTP以及不同浓度的CTP和竞争性NHC-三磷酸（0.1-100 uM）。加入100 ng纯化的RdRp启动反应，并在30℃下孵育90-120分钟。反应产物可捕获在链霉亲和素包被的微孔板上，并使用比色法或化学发光检测系统检测生物素标记的UTP掺入情况。为了进行更详细的分析，可将RNA产物在聚丙烯酰胺凝胶上进行分离，以观察链终止或电泳迁移率的变化。IC50值可通过绘制RNA合成抑制率与NHC-三磷酸浓度的关系曲线来确定。
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| 细胞实验 |
研究NHC细胞内代谢的标准方案是使用Huh-7细胞。在细胞内转化实验中，将1×10⁶个Huh-7细胞接种于6孔板中，并使其过夜贴壁。然后将细胞与浓度为10-50 uM的母体化合物NHC孵育4小时。孵育结束后，移除培养基，并用冰冷的PBS洗涤细胞两次。通过加入500 uL含有内标（例如¹3C标记的NHC三磷酸）的冰冷70%甲醇/30%水溶液提取细胞内代谢物。刮取细胞，并将裂解液在4℃下以15,000 rpm离心10分钟。收集上清液，并在氮气流下干燥。将干燥的提取物用合适的流动相复溶，并通过LC-MS/MS进行分析。质谱仪采用多反应监测（MRM）模式，同时定量分析NHC-单磷酸酯（MP）、NHC-二磷酸酯（DP）和NHC-三磷酸酯（TP）的含量。四钠盐作为本实验中NHC-TP定量分析的主要参考标准。
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| 动物实验 |
虽然带电荷的NHC-三磷酸四钠不直接用于体内，但其母体前药（例如，莫努匹拉韦）已被广泛应用。在小鼠疗效模型中，6-8周龄的BALB/c小鼠经鼻内感染致死剂量的鼠适应性流感病毒或SARS-CoV-2（例如，每只小鼠10⁵ PFU）。感染后4-24小时开始，小鼠接受前药治疗（例如，100-500 mg/kg），每日两次口服，持续5天。为了分析肺部活性代谢物，在末次给药后的不同时间点收集感染小鼠的肺组织。将组织匀浆化，并提取活性代谢物（包括NHC-TP）。然后使用四钠盐作为标准品，通过LC-MS/MS定量肺匀浆中NHC-TP的浓度。病毒滴度降低（通过 TCID50 或噬斑试验测定）和生存率提高（例如，体重减轻、生存率）是主要终点。该方案展示了前药给药、活性代谢物生成和抗病毒疗效之间的联系。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
该化合物为四钠盐，分子式为C9H12N3Na4O15P3，分子量为587.08 g/mol。它为白色粉末，应储存于-20℃的密封容器中，避光防潮。在此条件下，它可稳定保存长达3年。该化合物易溶于水（最高溶解度可达100 mg/mL，170.33 mM）和DMSO。用于生物测定的储备液可在-80℃下保存长达6个月。由于其高极性和负电荷，缺乏穿过细胞膜所需的亲脂性，因此不具备口服生物利用度。它设计用于分析化学中的参考标准品以及无细胞生化测定中的底物。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
本产品仅供研究使用，不可用于人体诊断或治疗。目前尚无该四钠盐的具体毒性数据。其主要潜在危害在于钠盐的存在，该钠盐通常被认为是安全的（GRAS）。然而，在处理粉末时应遵循标准的化学卫生操作规范，以避免吸入或摄入。该化合物是已知抗病毒药物的活性代谢物，因此具有生物活性。在实验室中应小心操作，以避免意外接触。该盐本身不被认为具有急性毒性，但作为一种核苷酸类似物，它可能掺入快速分裂细胞的DNA中；然而，其结构设计对病毒聚合酶具有高度选择性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
该化合物是核苷类似物N4-羟基胞苷（NHC）的活性三磷酸盐形式，而N4-羟基胞苷是前药莫努匹拉韦（MK-4482/EIDD-2801）的活性代谢物，莫努匹拉韦是一种用于治疗COVID-19的抗病毒药物。这种四钠盐是研究此类重要抗病毒药物的药理学和作用机制的关键研究标准品。它在耐药性研究中发挥着重要作用，使研究人员能够检验病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）（例如SARS-CoV-2）的突变如何影响活性代谢物的掺入效率。它还用于在高通量生化分析中筛选新型病毒RNA聚合酶抑制剂。相关游离酸的CAS号为39023-73-9。
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| 分子式 |
C9H12N3NA4O15P3
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|---|---|
| 分子量 |
587.08
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| 相关CAS号 |
NHC-diphosphate;39023-73-9;NHC-triphosphate tetraammonium;NHC-triphosphate;34973-27-8
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~100 mg/mL (~170.33 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7033 mL | 8.5167 mL | 17.0335 mL | |
| 5 mM | 0.3407 mL | 1.7033 mL | 3.4067 mL | |
| 10 mM | 0.1703 mL | 0.8517 mL | 1.7033 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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