| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MMP-3 MMP-10
The primary target of NFF-3 TFA is the active site of matrix metalloproteinases (MMPs), specifically MMP-3 and MMP-10. The peptide is hydrolyzed by these enzymes at a specific cleavage site. The high catalytic efficiency (kcat/Km) of MMP-3 for this substrate (218,000 s-¹ M-¹) indicates a strong interaction, making it a preferred substrate. This specificity allows researchers to measure the proteolytic activity of MMP-3 and MMP-10 in complex biological samples. The peptide also serves as a model substrate to study the mechanisms of other proteases, including trypsin, hepatocyte growth factor activator, and factor Xa, which are involved in various physiological and pathological processes. The CyDye-labeled version is used to visualize these proteolytic events in cell-based assays. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞酶活性测定中，NFF-3 TFA 对 MMP-3 和 MMP-10 具有高活性和选择性。其对 MMP-3 的催化效率 (kcat/Km) 为 218,000 s-¹ M-¹，对于荧光底物而言非常出色。对于 MMP-9，其催化效率则低得多 (kcat/Km = 10,100 s-¹ M-¹)，且不会被 MMP-1 或 MMP-2 切割。这种特异性使其成为在其他 MMP 存在的情况下监测 MMP-3 活性的理想选择。在基于细胞的测定中，当用 CyDye 对 (Cy3/Cy5Q) 标记时，由于 FRET 效应，完整的肽段不显示荧光。当被活性 MMP-3 切割时，Cy3 和 Cy5Q 分离，导致 Cy3 荧光强度显著增强，从而可以实时监测蛋白酶活性。这可以直接读取活细胞中 MMP-3 的活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
搜索结果中未提供NFF-3 TFA肽的具体体内数据。然而，它可用作体内分子工具来监测MMP-3活性。局部（例如，瘤内注射）或全身给药时，荧光标记（Cy3/Cy5Q）的NFF-3肽可用于对活体动物体内MMP-3高活性区域进行成像。例如，在纤维肉瘤（HT-1080）异种移植小鼠模型中，注射标记的NFF-3探针后，由于MMP-3和MMP-10的切割作用，肿瘤部位会产生强烈的荧光信号。该信号可使用体内荧光成像系统（例如，IVIS）进行检测。由于该肽成本高昂且灵敏度高，TFA盐主要用于体外和离体实验。它可用作蛋白酶活性的直接化学探针。
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| 酶活实验 |
在96孔黑色板（用于荧光检测）中进行标准的无细胞蛋白酶活性测定。反应混合物（100 uL）包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、10 mM CaCl2、0.05% Brij-35和10 uM NFF-3 TFA底物。加入10-100 ng重组活性人MMP-3或MMP-10酶启动反应。立即将反应板置于荧光酶标仪中，并在37℃下孵育。每1-2分钟监测一次荧光强度（例如，MCA的激发波长为320/40 nm，发射波长为405/20 nm），持续30-60分钟。荧光强度-时间曲线的初始线性部分用于计算反应速率。进行抑制试验时，先将酶与不同浓度的测试化合物（MMP抑制剂）预孵育15分钟，然后再加入底物。通过绘制抑制率与抑制剂浓度对数的关系图来确定IC50值。加入EDTA（终浓度25 mM）螯合MMP活性所需的钙离子，即可终止反应。
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| 细胞实验 |
使用荧光底物NFF-3 (Cy3/Cy5Q-NFF-3) 在96孔板中进行基于细胞的MMP-3活性检测。将人纤维肉瘤HT-1080细胞（高表达MMP-3）以每孔20,000个细胞的密度接种于无血清DMEM培养基中，并使其过夜贴壁。然后用PBS洗涤细胞。向细胞中加入终浓度为1-10 uM的Cy3/Cy5Q-NFF-3肽（溶于无血清培养基中）。将培养板置于37℃孵育2-6小时。使用荧光酶标仪，在544 nm激发波长和590 nm发射波长下，定期测量荧光强度。用广谱MMP抑制剂（例如GM6001，10 uM）处理的细胞作为阴性对照，用于确定背景荧光。细胞培养物中荧光强度随时间增加与 MMP-3/10 活性呈正比。该方案可用于在活细胞环境中筛选潜在的 MMP 抑制剂。对于标准酶标仪，使用 Cy3/Cy5Q 标记对。由于背景自发荧光，用于无细胞检测的 MCA/DNP 标记对不适用于基于细胞的检测。
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| 动物实验 |
对于体内成像研究，可以使用荧光标记的NFF-3（Cy5.5-NFF-3）。将5×10⁶个HT-1080纤维肉瘤细胞皮下注射到6-8周龄的无胸腺裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到200-300 mm³时，用异氟烷麻醉小鼠。将Cy5.5-NFF-3肽（100 μg溶于100 μL PBS）直接注射到肿瘤内（瘤内注射，IT）或经尾静脉注射。对于静脉注射，在注射后0、1、2、4、8、12和24小时，使用体内荧光成像系统（例如IVIS Spectrum）对小鼠进行成像。激发滤光片设置为640 nm，发射滤光片设置为700 nm。图像采集采用一致的曝光时间、像素合并和光圈值。在肿瘤周围绘制感兴趣区域（ROI），以量化平均辐射强度（光子/秒/平方厘米/球面度）。一组小鼠在探针注射前1小时预先注射MMP抑制剂（例如，巴替马司他，30 mg/kg，腹腔注射），作为信号特异性的对照。肿瘤中的信号强度反映了肿瘤微环境中MMP-3的活性水平。该方案提供了一种非侵入性的肿瘤生物学检测方法。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
NFF-3 TFA 的分子式为 C80H111F3N22O22，分子量为 1789.87 g/mol。冻干粉末应储存在 -20℃ 的密封容器中，避光防潮，可稳定保存长达 3 年。溶液储存应在 -80℃ 下保存长达 1 年。它可溶于 DMSO 和水。TFA 盐是肽合成和储存的标准形式。基于 FRET 的设计（MCA/DNP）可实现对酶动力学的高灵敏度连续监测。肽序列包含 Nva（正缬氨酸）和 DNP（2,4-二硝基苯基）标记的赖氨酸。MMP-3 的 Kcat/Km 值为 218,000 s-1 M-1。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本产品仅供研究使用，不可用于人体。它是MMP-3和MMP-10的高特异性底物，用于药物发现和基础研究。它可被其他蛋白酶切割，但切割速率远低于MMP-3和MMP-10。MCA基团的激发峰位于325 nm，发射峰位于395 nm。该肽具有极高的灵敏度和特异性。它是一种化学工具，而非药物。操作时应格外小心，避免被其他蛋白酶污染。务必使用无蛋白酶的吸头和试管。该肽可溶于DMSO和水。避免反复冻融。
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| 分子式 |
C80H111F3N22O22
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|---|---|
| 分子量 |
1789.87
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| 相关CAS号 |
NFF-3;158584-09-9
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~55.87 mM)
H2O :< 0.1 mg/mL |
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.5587 mL | 2.7935 mL | 5.5870 mL | |
| 5 mM | 0.1117 mL | 0.5587 mL | 1.1174 mL | |
| 10 mM | 0.0559 mL | 0.2793 mL | 0.5587 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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