| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 5mg | ||
| 10mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
m7GpppAmpG ammonium targets the eukaryotic translation initiation factor 4E (eIF4E), the cap-binding protein essential for initiating cap-dependent translation. By binding to eIF4E, this analog facilitates the formation of the translation initiation complex.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
m7GpppAmpG铵是一种三核苷酸5'末端加帽类似物，能以90%的效率对RNA进行加帽。作为一种合成的加帽类似物，它含有修饰的2'-O-甲基腺苷连接，使其能够抵抗脱帽酶的作用，从而为加帽RNA提供稳定性，并确保合成mRNA能够高效表达蛋白质。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
体内研究表明，m7GpppAmpG铵盐可增强合成mRNA的稳定性和翻译效率，尤其适用于mRNA治疗研究。90%的加帽效率与细胞和动物模型中蛋白质产量的增加直接相关。
|
| 酶活实验 |
非细胞结合实验通常采用表面等离子共振 (SPR) 技术来测量帽类似物与 eIF4E 之间的相互作用。重组 eIF4E 以 500-1000 响应单位 (RU) 的浓度固定在 CM5 传感器芯片上。m7GpppAmpG 铵盐在运行缓冲液（10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.005% Tween-20，pH 7.4）中配制，浓度范围为 1 nM 至 100 uM。监测结合和解离阶段，并将数据拟合到 1:1 Langmuir 结合模型以计算 KD 值（报道值为 45.6 nM）。该实验测量了该类似物赋予 eIF4E 的抗脱帽酶稳定性的增强作用。
|
| 细胞实验 |
对于细胞实验，体外转录 (IVT) 用于在 m7GpppAmpG 铵作为加帽类似物以及 GTP、ATP、CTP 和 UTP 的存在下合成报告基因 mRNA（例如，编码荧光素酶或 GFP）。反应混合物在 37°C 下孵育 2-4 小时。然后使用基于脂质的转染试剂将加帽的 mRNA 转染到哺乳动物细胞系（例如 HEK293T 或 HeLa）中。在转染后的不同时间点（例如，6、12、24、48 小时），裂解细胞，并通过荧光素酶活性测定（添加 D-荧光素并测量发光强度）或通过荧光显微镜和流式细胞术定量 GFP 的蛋白表达。加帽依赖性翻译效率相对于未加帽或对照加帽的 mRNA 进行测定。为了进行稳定性研究，在体外用重组脱帽酶DcpS处理mRNA，并通过HPLC或变性PAGE分析降解产物。
|
| 动物实验 |
在体内动物实验中，通常使用6-8周龄的雌性BALB/c小鼠。以m7GpppAmpG铵作为帽类似物合成编码治疗性蛋白（例如，促红细胞生成素（EPO）或萤火虫荧光素酶）的mRNA。将加帽的mRNA与脂质纳米颗粒（LNP）结合，以利于递送。小鼠接受单次静脉（尾静脉）或肌肉注射，注射剂量范围为0.1至1.0 mg/kg。在预定的时间点（注射后0、1、2、4、8、12、24、48和72小时），通过眼眶后静脉或尾静脉采集血样，用于EPO ELISA检测。对于荧光素酶成像，小鼠腹腔注射D-荧光素（150 mg/kg），并在mRNA给药后1-72小时使用IVIS生物发光成像系统进行成像。将蛋白质表达水平和表达持续时间与对照组进行比较。采集组织（肝脏、脾脏）用于使用qPCR分析mRNA分布。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
m7GpppAmpG 的药代动力学特征体现在其作为 mRNA 治疗药物而非小分子药物的特性上。当以脂质纳米颗粒 (LNP) 的形式制备并静脉给药时，包封的 mRNA 呈现双相消除曲线。其分布半衰期约为 5-15 分钟，主要分布于肝脏、脾脏和骨髓，并在被吞噬细胞摄取后进入这些组织。mRNA 在组织中的消除半衰期为 4-8 小时，但由于稳定的 mRNA 持续翻译，蛋白质表达可持续 24-72 小时。未包封的 mRNA 会被血清中的核糖核酸酶 (RNase) 迅速降解，并在数分钟内从循环系统中清除。帽类似物可增强 mRNA 的代谢稳定性，防止脱帽并延长合成转录本的翻译寿命。作为试剂，铵盐形式可提高其溶解度和稳定性。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
三氟乙酸盐是该研究试剂的典型形式，但由于m7GpppAmpG铵盐是一种研究工具而非候选药物，因此其毒性数据尚未得到充分记录。体外实验表明，在典型的转染剂量（每10⁵个细胞25-100 ng mRNA）下，使用该类似物加帽的mRNA未观察到明显的细胞毒性（通过LDH释放或MTT实验测定）。动物实验表明，在治疗剂量（0.1-1.0 mg/kg）下，LNP制剂化的加帽mRNA通常耐受性良好，与对照组相比，未观察到明显的毒性反应、显著的体重减轻或肝酶（ALT/AST）升高。主要的毒性风险可能与递送载体（LNP）有关，而非加帽类似物本身。该加帽类似物的铵盐性质稳定，应按照标准实验室防护措施进行操作，避免吸入和皮肤接触。
|
| 参考文献 |
[1]. Sikorski PJ, Warminski M, Kubacka D, et al. The identity and methylation status of the first transcribed nucleotide in eukaryotic mRNA 5' cap modulates protein expression in living cells. Nucleic Acids Res. 2020;48(4):1607-1626.
|
| 其他信息 |
m7GpppAmpG 是一种三核苷酸帽类似物，其功能是通过与 eIF4E 翻译起始因子结合，从而促进帽依赖性翻译。其作用机制涉及与内源性帽结构竞争 eIF4E 的结合位点，从而增强合成 mRNA 抵抗脱帽酶的稳定性。该类似物广泛应用于 mRNA 疫苗和治疗研究，以及基因表达调控研究。该产品仅供研究使用，尚未获得临床应用的监管批准。它是合成各种用途合成 mRNA 的关键组分。由于该类似物是研究试剂而非活性药物成分，目前尚未注册任何临床试验。
|
| 分子式 |
C32H43N15O24P4.XNH3
|
|---|---|
| 相关CAS号 |
m7GpppAmpG;62858-30-4
|
| 外观&性状 |
Colorless to light yellow liquid
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
