M2e, human TFA

目录号: V76801 纯度: ≥98%
M2e,人TFA由M2(甲型流感病毒的第三个整合膜蛋白)的23个胞外残基组成,在所有人甲型流感病毒株中显着保守。
M2e, human TFA 产品类别: Influenza Virus
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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  • M2e, human
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产品描述
M2e,即人源TFA,由M2(甲型流感病毒的第三种整合膜蛋白)的23个胞外残基组成,在所有人类甲型流感病毒株中高度保守。M2e,即人源TFA,是一种针对人类甲型流感病毒株的有效且用途广泛的候选疫苗。
M2e,即人TFA,是一种合成肽,由甲型流感病毒M2蛋白的23个胞外氨基酸残基(SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD)组成,M2蛋白是甲型流感病毒的第三个整合膜蛋白。该序列在所有人类甲型流感病毒株中高度保守,使其成为一种有效且用途广泛的候选疫苗。
生物活性&实验参考方法
靶点
M2e, human TFA targets the immune system, specifically inducing antibodies that bind to the extracellular domain of the influenza A virus M2 ion channel protein expressed on the surface of infected cells, leading to antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC).
体外研究 (In Vitro)
M2e(人源TFA)是一种有效且用途广泛的候选疫苗,可对抗包括季节性流感和流行性流感在内的多种甲型流感病毒株。作为一种合成肽,当与佐剂适当配制时,它可以诱导交叉保护性免疫反应。
体内研究 (In Vivo)
体内动物研究表明,基于M2e的疫苗能够诱导针对异源甲型流感病毒攻击的保护性免疫反应。当与适当的佐剂一起经鼻内或肠外途径给药时,M2e可诱导产生抗体,从而降低病毒载量并预防发病和死亡。
酶活实验
通常进行M2e肽的非细胞结合试验以评估其免疫原性或检测抗M2e抗体。对于检测抗M2e抗体的ELISA,将96孔板用1-5 ug/mL的M2e肽和人TFA溶于PBS中包被,并在4℃下孵育过夜。室温下用3% BSA或5%脱脂奶粉封闭2小时,然后用含0.05% Tween-20的PBS-T洗涤。将系列稀释的血清样本(来自免疫动物)加入孔中,孵育2小时。洗涤后,加入HRP标记的抗小鼠(或抗人)IgG,随后加入TMB底物。用H2SO4终止反应,并在450 nm处测量吸光度。对于肽-MHC结合试验,可采用计算方法或使用纯化的MHC II类分子进行体外复性试验。或者,可以使用 M2e 特异性单克隆抗体进行表面等离子共振 (SPR) 来确定结合亲和力。
细胞实验
M2e 和人 TFA 的细胞学检测采用从 M2e 免疫小鼠或人体内分离的原代免疫细胞(脾细胞、外周血单核细胞)。对于 T 细胞记忆反应,将 5×10⁵ 个脾细胞接种于 96 孔板中,并用 1-50 ug/mL 的 M2e 或人 TFA 刺激 48-72 小时。收集细胞培养上清液,并通过 ELISA 检测细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10)的产生。对于 T 细胞增殖,在 M2e 刺激前用 CFSE(5 uM)标记细胞,并在 72-96 小时通过流式细胞术分析增殖情况(CFSE 稀释)。对于 B 细胞 ELISpot 检测,将 96 孔 PVDF 板包被抗小鼠 Ig 捕获抗体,然后加入脾细胞和 M2e 肽。 16-24小时后,使用HRP标记的检测抗体和AEC底物检测抗体分泌细胞,并使用自动ELISpot读板仪计数斑点。对于细胞内细胞因子染色(ICS),将细胞用M2e肽和布雷菲德菌素A刺激4-6小时,固定和透化后,进行表面标志物(CD4、CD8)和细胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2)染色,然后进行流式细胞术分析。
动物实验
在体内免疫研究中,6-8周龄的雌性BALB/c或C57BL/6小鼠接受M2e(一种人源TFA)免疫,该TFA与佐剂(例如弗氏佐剂、明矾或更先进的佐剂,如CpG ODN或AddaVax)配制而成。小鼠每次接受10-50 μg的M2e肽,可通过腹腔注射、皮下注射或鼻内给药,通常间隔2-4周,分2-3次给药。在基线和每次免疫后10-14天,通过眼眶后静脉丛取血,并通过ELISA检测血清抗体滴度。在攻毒试验中,末次免疫后4-6周,小鼠用异氟烷麻醉,经鼻内感染致死剂量(例如1-10×LD50)的甲型流感病毒(例如H1N1、H3N2或禽流感H5N1)。每日监测小鼠体重和存活率,持续14-21天。感染后3-7天,处死小鼠以测定病毒载量。将肺组织在PBS中匀浆,离心澄清,然后使用MDCK细胞进行噬斑试验或通过流感M基因的定量RT-PCR (qRT-PCR)测定病毒滴度。同时,将肺组织样本固定、切片,并用苏木精-伊红(H&E)染色,用于炎症和肺损伤的组织病理学分析。
药代性质 (ADME/PK)
作为一种基于肽的免疫原,人TFA M2e(分子量约为2738.83 Da)并非传统药物,其药代动力学特性尚未得到充分研究。当与佐剂联合使用时,该肽会在注射部位停留数天至数周(药物储存效应),具体时间取决于佐剂配方。注射部位的抗原呈递细胞(树突状细胞、巨噬细胞)通过吞噬作用和巨胞饮作用摄取该肽。内化后,M2e经加工处理,并通过MHC II类分子呈递给CD4+ T细胞,并通过MHC I类分子交叉呈递给CD8+ T细胞。TFA盐形式可提高制剂的溶解度。完整肽的全身吸收极少。由于其免疫原作用机制,消除半衰期并不重要。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
由于M2e(人源TFA)是一种研究性肽,因此其具体的毒性数据有限。在使用M2e肽和佐剂进行动物免疫研究中,毒性主要取决于佐剂而非肽本身。在典型的免疫剂量(每只小鼠10-50微克)下,M2e肽通常耐受性良好,未观察到明显的全身毒性迹象。局部注射部位反应(轻微肿胀、发红)可能由佐剂成分引起。由于该化合物仍处于研究阶段,因此尚无长期安全性研究数据。高剂量下,TFA反离子可能引起刺激。
参考文献

[1]. Improved design and intranasal delivery of an M2e-based human influenza A vaccine. Vaccine. 2006 Nov 10;24(44-46):6597-601.

其他信息
M2e(基质蛋白2胞外结构域)在人类甲型流感病毒株中高度保守,因此是开发“通用”流感疫苗的关键靶点,该疫苗无需每年重新配制即可提供针对多种毒株的保护。M2e(人源三氟乙酸盐)被用作此类疫苗研发的研究工具。其作用机制是诱导产生与感染细胞上的M2蛋白结合的抗体,从而通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)清除病毒。该肽尚未获得用于人体的监管批准,但已在临床前和早期临床试验中得到广泛研究。三氟乙酸盐形式可提高其溶解度和稳定性,使其更适合研究用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C109H171F3N32O43S2
分子量
2738.83
相关CAS号
M2e, human;251359-24-7
外观&性状
White to off-white solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~100 mg/mL (~36.51 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.3651 mL 1.8256 mL 3.6512 mL
5 mM 0.0730 mL 0.3651 mL 0.7302 mL
10 mM 0.0365 mL 0.1826 mL 0.3651 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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