| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Lys-Pro-AMC diTFA is a substrate for prolyl oligopeptidase (POP), a cytosolic serine protease that cleaves proline-containing peptides. It may also be a substrate for dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) and other proline-specific peptidases.
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| 体外研究 (In Vitro) |
Lys-Pro-AMC diTFA 可作为脯氨酰寡肽酶 (POP) 和其他脯氨酸特异性肽酶的荧光底物。当赖氨酸-脯氨酸肽键被酶促裂解后，会释放出游离的 AMC，从而产生荧光信号。该化合物可用于实时测定酶活性和筛选抑制剂。
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| 体内研究 (In Vivo) |
该化合物并非设计用于体内实验；它是一种用于生化和细胞分析的研究工具。它不具有直接的体内治疗活性。
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| 酶活实验 |
使用纯化的脯氨酰寡肽酶 (POP) 进行 Lys-Pro-AMC diTFA 的非细胞酶活性测定。测定缓冲液由 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、150 mM NaCl 和 1 mM DTT（或 2-巯基乙醇）组成。在 96 孔板中制备 Lys-Pro-AMC diTFA 的系列稀释液（最终浓度为 0.1 至 200 uM）。向每个孔中加入 2-10 ng 纯化的重组 POP（总体积 100-200 uL）以启动反应。将反应混合物在 37℃ 下孵育 15-60 分钟。使用微孔板读数仪，在激发波长 360 nm 和发射波长 460 nm 下（或更常见的 AMC 的发射波长 380/460 nm）定期（例如，每 2-5 分钟）测量荧光强度。在动力学模式下监测相对荧光单位 (RFU) 的增加。初始速度 (v0) 由反应进程曲线的线性部分计算得出。动力学分析中，在不同的底物浓度 (0.1-200 uM) 下进行测定，并使用非线性回归将数据拟合到米氏方程，从而计算动力学参数 (Km、Vmax、kcat)。抑制剂筛选中，将酶与不同浓度的测试抑制剂 (0.1 nM-100 uM) 在室温下预孵育 10-30 分钟，然后加入底物 Lys-Pro-AMC diTFA（最终浓度接近或等于 Km）。反应进程按所述方法监测。半数抑制浓度 (IC50) 由剂量反应曲线（log[抑制剂] 与活性百分比）计算得出。对于酶特异性测定，可以使用类似的方案，对底物进行针对其他脯氨酸特异性蛋白酶（如二肽基肽酶 IV (DPPIV) 和成纤维细胞激活蛋白 (FAP)）的测试。
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| 细胞实验 |
Lys-Pro-AMC diTFA 的细胞活性测定采用表达靶蛋白酶的活细胞进行。对于脯氨酰寡肽酶 (POP) 活性测定，将 SH-SY5Y（人神经母细胞瘤）、HeLa 等细胞系或原代神经元以 1-2×10⁴ 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，并使其过夜贴壁。用含 0.1-1% DMSO 的无血清测定缓冲液（PBS 或 HBSS，pH 7.4）替换培养基，以溶解底物。最后加入 Lys-Pro-AMC diTFA，使其终浓度为 50-200 uM。将细胞置于荧光酶标仪中，在 37°C 下孵育，并在不同时间点（0、15、30、60、90 和 120 分钟）测量荧光强度（激发波长 380 nm，发射波长 460 nm），以监测细胞内 POP 对底物的裂解情况。为确保信号特异性，在加入底物前，对照孔预先用特异性 POP 抑制剂（例如，浓度为 10-50 uM 的 Z-Pro-Prolinal）处理 30 分钟。对于基于抑制剂的细胞检测，在加入底物前，将细胞与不同浓度的测试化合物预孵育 30-60 分钟，并测量荧光信号的降低。或者，对于细胞裂解液检测，收集细胞，通过超声破碎或冻融循环裂解细胞，然后离心去除细胞碎片。将上清液（50-100 微克蛋白质）与荧光底物在测定缓冲液中孵育，并按照纯化酶测定的方法进行动力学荧光测量。
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| 动物实验 |
Lys-Pro-AMC diTFA 是一种生化研究工具，不适用于体内动物实验。若用于体内成像，它会成为蛋白酶的底物。在动物实验中，它可用作评估组织提取物中酶活性的底物。对于组织匀浆分析，从小鼠或大鼠中收集动物组织（例如，脑、肾、肝），在裂解缓冲液（例如，20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1% Triton X-100、蛋白酶抑制剂）中匀浆，然后离心。将上清液（50-150 μg 总蛋白）与 Lys-Pro-AMC diTFA（50-200 μM）在 37°C 下孵育，并进行动力学荧光测量。对于 POP 活性失调的疾病模型（例如，神经退行性疾病），可将疾病模型的组织样本与对照组进行比较。然而，目前尚无针对该底物的特定动物模型的广泛发表数据。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Lys-Pro-AMC diTFA 是一种合成的荧光底物（diTFA 盐的分子量约为 833 g/mol）。作为一种研究用化学品，其药代动力学性质尚未明确。该化合物可溶于 DMSO 和水性缓冲液（需超声处理）。diTFA 盐可提高其溶解度。该化合物不适用于体内实验，因此没有 ADME 数据。对于体外实验，该底物对 POP 的典型 Km 值在 10-50 μM 范围内，具体数值取决于实验条件。该化合物以粉末形式储存于 -20℃ 避光条件下稳定。溶液应分装后储存于 -20℃，以避免反复冻融。AMC 荧光团对光敏感，因此化合物和溶液均应避光保存。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于 Lys-Pro-AMC diTFA 毒性的具体数据记录。作为一种研究用化学品，它仅用于体外试验，并应按照标准实验室防护措施进行操作。AMC 荧光团在高浓度下可能具有潜在的细胞毒性，但在典型的试验浓度（50-200 μM）下，短期细胞试验（2-6 小时）中预计不会出现急性毒性。当使用适当的个人防护装备（手套、实验服、护目镜）时，diTFA 盐通常被认为对研究用途安全。尚未进行 LD50 数据、致癌性或致突变性研究。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Lys-Pro-AMC diTFA 是一种荧光底物，用于酶动力学和抑制剂筛选实验，尤其适用于脯氨酰寡肽酶 (POP) 家族酶。AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）荧光团与肽结合后荧光猝灭，但被切割后会发出强烈的荧光（激发波长约 380 nm，发射波长约 460 nm），从而可以灵敏地实时检测酶活性。Lys-Pro 序列可被脯氨酸特异性肽酶（包括 POP 和二肽基肽酶 IV）特异性识别和切割。该底物常用于高通量筛选 (HTS)，以鉴定可用于治疗神经系统疾病和代谢性疾病的新型 POP 抑制剂。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于临床。它也被用作研究酶机制的底物。
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| 分子式 |
C25H30F6N4O8
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| 分子量 |
628.52
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| 相关CAS号 |
Lys-Pro-AMC;133066-53-2
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5910 mL | 7.9552 mL | 15.9104 mL | |
| 5 mM | 0.3182 mL | 1.5910 mL | 3.1821 mL | |
| 10 mM | 0.1591 mL | 0.7955 mL | 1.5910 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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