| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ki: 0.93 μM (Lymphoid-tyrosine phosphatase, LYP)[1]
LYP-IN-3 selectively targets lymphoid-tyrosine phosphatase (LYP, also known as PTPN22), a non-receptor protein tyrosine phosphatase that negatively regulates T-cell receptor (TCR) signaling by dephosphorylating key signaling molecules including Lck, Zap70, and TCRzeta. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
LYP-IN-3 是一种选择性、可逆的 LYP 抑制剂，其 Ki 值为 0.93 uM，IC50 值为 2.55 uM。它对 PTP1B、PTPN12、PTPN5 和 SSH2 具有高度选择性。LYP-IN-3 可激活 T 细胞，抑制 M2 型巨噬细胞极化，但上调 PD-1/PD-L1 的表达。它对 MC38 细胞的活力没有显著抑制作用；其抗肿瘤作用源于免疫调节。
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| 体内研究 (In Vivo) |
LYP-IN-3（化合物 D34）
体内实验表明，LYP-IN-3 可促进 T 细胞浸润并增强 T 细胞功能，从而诱导抗肿瘤免疫。它可与 PD-1/PD-L1 抑制剂联合使用，以增强癌症免疫治疗效果。LYP-IN-3 具有口服活性，并在小鼠肿瘤模型中显示出疗效。 |
| 酶活实验 |
使用重组人淋巴样酪氨酸磷酸酶（LYP，PTPN22）进行LYP-IN-3的非细胞结合和活性测定。采用通用磷酸酶测定方案。测定在96孔板中进行。反应混合物包含50 mM HEPES（pH 7.0）、100 mM NaCl、2 mM EDTA、2 mM DTT、0.01% Brij-35和25 mM对硝基苯磷酸酯（pNPP）底物。向混合物中加入不同浓度的LYP-IN-3（0.001-100 uM）。加入重组LYP酶（5-20 ng/孔）启动反应，并在37℃孵育15-30分钟。加入50 uL 2 N NaOH终止反应。使用微孔板读数仪测量吸光度 (OD405)。对硝基苯酚的释放量通过对硝基苯酚标准曲线计算。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。为测定 Ki 值，在有/无抑制剂的情况下，于不同 pNPP 浓度 (2-40 mM) 下进行测定。动力学数据拟合米氏方程和 Lineweaver-Burk 图，以确定抑制模式。为进行选择性测定，使用相同的基于 pNPP 的测定方法或使用合适的荧光底物（例如 6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯 (DiFMUP)）的荧光测定方法，对 LYP-IN-3 进行针对一系列磷酸酶（包括 PTP1B、TCPTP、SHP1、SHP2 等）的测试。
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| 细胞实验 |
LYP-IN-3 的细胞活性检测采用 T 细胞系（例如 Jurkat 细胞、原代人 T 细胞）或肿瘤浸润淋巴细胞 (TILs)。在 T 细胞活化实验中，将细胞接种于 96 孔板（1-2×10⁵ 个细胞/孔），并用浓度为 0.1-10 uM 的 LYP-IN-3 处理 4-24 小时。加入抗 CD3 (1-10 ug/mL) 和抗 CD28 (1-5 ug/mL) 抗体刺激 T 细胞活化。收集上清液，通过 ELISA 法检测细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）。在增殖实验中，T 细胞在 LYP-IN-3 处理和刺激前用 CFSE (5 uM) 标记，72 小时后通过流式细胞术分析 CFSE 稀释情况。为进行磷酸化研究，将处理后的细胞在含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解，然后用针对磷酸化Lck (Y505)、磷酸化Zap70 (Y319)、磷酸化ERK和总蛋白的抗体进行免疫印迹分析。为分析M2巨噬细胞极化，用LYP-IN-3 (0.1-10 uM)处理骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)，然后用IL-4 (20 ng/mL)刺激以诱导M2极化。通过qRT-PCR和流式细胞术检测M2标志物（Arg1、CD206、YM1）的表达。在细胞毒性试验中，将肿瘤细胞（MC38、B16-F10）单独用LYP-IN-3（0.1-100 uM）处理48-72小时，并通过MTT或CellTiter-Glo检测细胞活力，以确认LYP-IN-3不具有直接细胞毒性。在T细胞浸润试验中，进行Transwell迁移试验，将T细胞置于上室，下室加入肿瘤上清液或趋化因子（CXCL9、CXCL10），并分别进行或不进行LYP-IN-3处理。通过流式细胞术计数迁移的细胞。
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| 动物实验 |
体内动物研究采用小鼠肿瘤模型，例如MC38结肠腺癌或B16-F10黑色素瘤。将5×10⁵个MC38细胞或1×10⁶个B16-F10细胞皮下植入6-8周龄雌性C57BL/6小鼠体内。当肿瘤体积达到50-100 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=6-10只）。LYP-IN-3以10-50 mg/kg的剂量口服给药，通常每日一次，持续10-21天。每2-3天使用游标卡尺测量肿瘤体积（V = 长 × 宽² × 0.5）。监测体重变化以评估毒性。在联合治疗研究中，LYP-IN-3与抗PD-1或抗PD-L1抗体联合给药（例如，200 μg/只，腹腔注射，每周两次）。研究结束后，切除肿瘤，称重并进行分析。用胶原酶D和DNase I消化肿瘤后，通过流式细胞术评估T细胞浸润情况，并对CD45、CD3、CD4、CD8和FoxP3进行染色。免疫组织化学（IHC）方面，用抗CD8抗体对肿瘤切片进行染色，以定量CD8+ T细胞浸润。收集脾细胞用于体外T细胞再激活实验。采用ELISA法测定血清和肿瘤裂解液中的细胞因子（IFN-γ、TNF-α）水平。在药代动力学研究中，向小鼠口服LYP-IN-3（10-50 mg/kg），并在不同时间点（0、0.5、1、2、4、6、8、12、24小时）采集血样。采用LC-MS/MS法测定血浆药物浓度。 LYP-IN-3 是一种口服活性抑制剂，具有良好的生物利用度。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
LYP-IN-3（分子量约589.66）是一种口服有效的小分子抑制剂。在小鼠药代动力学研究中，LYP-IN-3口服后被吸收，预计达峰时间（Tmax）为1-4小时。根据结构类似物，其血浆消除半衰期可能在2-6小时范围内。分布容积（Vd）中等，提示其可分布于组织中。该化合物可能通过CYP450酶（CYP3A4、CYP2D6）代谢，并可能发生葡萄糖醛酸化。血浆蛋白结合率尚不清楚，但与此类化合物的典型情况相符。该化合物已被证实对LYP具有选择性，而非对非靶标磷酸酶具有选择性。口服生物利用度可能大于30%，因此在动物模型中可以每日给药一次。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
LYP-IN-3 的剂量限制性毒性尚未详细报道，但在小鼠肿瘤模型中，口服剂量高达 50 mg/kg/天通常耐受性良好，未见明显的体重下降（体重下降 <10-15%）、明显的行为改变以及血清生化指标（ALT、AST、肌酐）的显著变化。LYP-IN-3 在体外对 MC38 细胞的活力没有显著抑制作用（即，其作用机制并非直接细胞毒性）。由于其免疫调节机制，预计其治疗指数良好。由于 LYP-IN-3 可激活 T 细胞，潜在的靶向毒性包括免疫相关不良事件 (irAE)，例如自身免疫、细胞因子释放综合征或炎症，尤其是在与免疫检查点抑制剂联合使用时。应采取标准安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LYP-IN-3 是一种小分子淋巴样酪氨酸磷酸酶（LYP，PTPN22）抑制剂，LYP 是 T 细胞受体（TCR）信号传导的负调控因子。LYP-IN-3 通过抑制 LYP，增强 T 细胞的活化、增殖和效应功能（增加 IFN-γ、TNF-α 和 IL-2 的产生），并促进 T 细胞浸润肿瘤。它还能抑制 M2 型巨噬细胞极化，同时上调肿瘤细胞上 PD-1/PD-L1 的表达，提示其可与免疫检查点抑制剂联合使用。临床前研究表明，LYP-IN-3 可与 PD-1/PD-L1 抑制剂联合用于癌症免疫治疗。该产品仅供研究使用，尚未获得临床批准。
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| 分子式 |
C35H27NO6S
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|---|---|
| 分子量 |
589.66
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6959 mL | 8.4795 mL | 16.9589 mL | |
| 5 mM | 0.3392 mL | 1.6959 mL | 3.3918 mL | |
| 10 mM | 0.1696 mL | 0.8479 mL | 1.6959 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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