| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
IC50: 4.8 nM (Adapter protein-2 associated kinase 1 (AAK1) in enzyme assays); 7.6 nM (AAK1 in cell assays); 24 nM (BMP-2-inducible protein kinase (BIKE))[1]
LP-922761 hydrate primarily targets adaptor protein-2 associated kinase 1 (AAK1). It also inhibits BMP-2 inducible protein kinase (BIKE). It shows less activity at cyclin G-associated kinase (GAK), opioid, adrenergic alpha2, or GABAa receptors. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
LP-922761水合物是一种强效且选择性的AAK1抑制剂，在酶活性测定中IC50值为4.8 nM，在细胞活性测定中IC50值为7.6 nM。它还能抑制BIKE，IC50值为24 nM。该化合物对GAK、阿片受体、肾上腺素能α2受体或GABAa受体的活性较低。
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| 体内研究 (In Vivo) |
LP-922761 主要局限于小鼠的外周隔室，其脑血浆比为 0.007[1]。
在小鼠中，LP-922761 主要局限于外周组织，其脑血浆比为 0.007。这表明它是一种外周限制性 AAK1 抑制剂，这可能有利于靶向外周 AAK1 功能而不会产生中枢神经系统副作用。 |
| 酶活实验 |
LP-922761水合物的非细胞酶活性测定采用重组AAK1（衔接蛋白-2相关激酶1）酶进行。该测定通常在384孔或96孔板中进行。激酶反应混合物包含50 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、0.01% Brij-35、1 mM DTT、100 uM ATP（或Km浓度）以及肽底物（例如，源自AP-2 micro2亚基的生物素化肽）。加入LP-922761水合物系列稀释液（0.001-1000 nM）。加入重组AAK1酶（1-10 ng/孔）启动反应，并在30℃下孵育30-60分钟。加入EDTA终止反应。使用TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）检测系统检测磷酸化产物：该系统包含铕标记的抗磷酸底物抗体和链霉亲和素标记的受体（APC）。在665 nm和615 nm处测量信号（激发波长340 nm）。使用四参数逻辑模型，根据剂量反应曲线计算IC50值。在选择性测定中，以固定浓度（例如1 uM）测试LP-922761对包括BIKE、GAK和其他非靶标激酶在内的一系列激酶的抑制率，并测定抑制百分比。
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| 细胞实验 |
细胞AAK1抑制实验采用内源性表达AAK1的细胞（例如HeLa细胞、HEK293细胞或原代神经元）。AAK1活性的功能性指标是其底物AP-2的micro2亚基的磷酸化。将细胞接种于6孔或12孔板中，培养至70-80%汇合度。然后用浓度为0.1-1000 nM的LP-922761水合物处理细胞1-6小时。处理后，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞。将裂解液进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，并用针对磷酸化micro2（Thr156）和总micro2的特异性抗体进行免疫印迹分析。通过密度扫描法定量磷酸化micro2与总micro2的比值。 IC50值由剂量反应曲线计算得出。其他检测方法包括测量对转铁蛋白受体内吞作用的影响（因为AAK1参与网格蛋白介导的内吞作用）。可进行转铁蛋白摄取实验：将细胞在无血清培养基中饥饿2小时，用LP-922761处理，然后在37℃下与Alexa Fluor 488标记的转铁蛋白（25 ug/mL）孵育5-15分钟。用酸性缓冲液洗涤细胞以去除表面结合的转铁蛋白，固定细胞，并通过流式细胞术或荧光显微镜测量内吞转铁蛋白的荧光强度。对于增殖或活力检测，将细胞用抑制剂（0.1-10 uM）处理24-72小时，并通过MTT或CellTiter-Glo检测评估细胞活力。
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| 动物实验 |
LP-922761水合物的体内研究通常在小鼠中进行，以评估其药代动力学和外周限制。在药代动力学（PK）研究中，将LP-922761水合物通过灌胃（1-10 mg/kg）或静脉注射（0.5-2 mg/kg）的方式给予雄性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠。在多个时间点（0、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时）通过尾静脉或心脏穿刺采集血样。分离血浆，并用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定LP-922761的浓度。实验结束时，对动物进行经心灌注生理盐水以清除脑组织中的血液，并收集脑组织。将脑组织匀浆，并用LC-MS/MS测定脑匀浆中化合物的浓度。计算脑血浆比值（LP-922761 的脑血浆比值为 0.007）。在疗效研究中，可使用与外周 AAK1 功能相关的动物模型（例如，疼痛、神经炎症或代谢紊乱）。例如，在神经性疼痛小鼠模型（例如，坐骨神经慢性压迫损伤 (CCI)）中，每日一次口服 LP-922761 水合物，剂量为 1-30 mg/kg，持续 7-14 天。在基线和治疗后评估机械性痛觉过敏和热痛觉过敏。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
LP-922761水合物是一种口服有效的AAK1小分子抑制剂（分子量约为414.98）。在小鼠体内，口服给药后，该化合物的吸收达峰时间（Tmax）为0.5-2小时。血浆消除半衰期预计为2-6小时。其最显著的药代动力学特征是外周限制性。在小鼠体内，脑血浆浓度比为0.007，表明其血脑屏障穿透性极低。这一特性有利于靶向外周AAK1，且不产生中枢神经系统（CNS）副作用。该化合物可能通过肝脏CYP450酶（如CYP3A4等）代谢，并通过胆汁和尿液排泄。水合物形式不会显著改变其药代动力学特征。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
基于其作为AAK1抑制剂的作用机制，LP-922761的主要毒性可能与抑制外周组织中网格蛋白介导的内吞作用有关，这会影响受体循环和营养物质的吸收。在细胞实验中，LP-922761在浓度高达10 μM时（MTT法）细胞毒性并不高。动物实验表明，小鼠口服剂量高达30 mg/kg的LP-922761通常耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或行为改变。目前尚未发表正式的毒性研究（例如，28天重复给药毒性试验、遗传毒性试验）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LP-922761 是一种用于研究 AAK1 在外周组织中作用的研究工具，尤其适用于疼痛、内吞作用和病毒感染的研究。AAK1 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，可磷酸化 AP-2 复合物的 micro2 亚基，从而促进网格蛋白介导的内吞作用。由于其作用局限于外周组织，该化合物可用于研究 AAK1 依赖性过程，避免中枢神经系统干扰。该产品尚未获得临床应用的监管批准，仅供研究使用。
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| 分子式 |
C21H26N6O3.1/4H2O
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|---|---|
| 分子量 |
414.98
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| 相关CAS号 |
LP-922761;1454808-95-7
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4098 mL | 12.0488 mL | 24.0975 mL | |
| 5 mM | 0.4820 mL | 2.4098 mL | 4.8195 mL | |
| 10 mM | 0.2410 mL | 1.2049 mL | 2.4098 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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