L-ANAP hydrochloride

目录号: V76838 纯度: ≥98%
L-ANAP HCl 是一种基因编码的极性敏感荧光非天然氨基酸 (AA),用于成像生物学研究。
L-ANAP hydrochloride 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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Other Forms of L-ANAP hydrochloride:

  • L-ANAP TFA
  • L-Anap methyl ester hydrochloride
  • L-ANAP
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产品描述
L-ANAP HCl 是一种基因编码的、对极性敏感的荧光非天然氨基酸 (AA),用于成像生物学研究。
L-ANAP 盐酸盐是一种可基因编码且对极性敏感的荧光非天然氨基酸 (Uaa),用于分子和细胞生物学应用中的特定荧光标记。
生物活性&实验参考方法
靶点
L-ANAP targets specific sites within proteins when incorporated during translation. It is not a drug targeting a disease-related receptor or enzyme, but rather a tool for imaging and studying protein conformations by sensing changes in the local polarity of the environment.
体外研究 (In Vitro)
对于特定的荧光标记,可以使用荧光非天然氨基酸L-ANAP[1]。L-ANAP是一种极性敏感且可进行基因编码的荧光非天然氨基酸(Uaa)。分子和细胞生物学对荧光Uaa,例如L-丹酰丙氨酸、L-(7-羟基香豆素-4-基)乙基甘氨酸和L-ANAP,尤为感兴趣,它们可以增强和补充常用的荧光蛋白(FPs)[2]。
L-ANAP是一种极性敏感的荧光非天然氨基酸。L-ANAP的荧光特性会随其局部环境的疏水性或极性而改变,这使得研究人员能够监测活细胞中蛋白质的构象变化、蛋白质-蛋白质相互作用以及局部结构动态。
体内研究 (In Vivo)
L-ANAP 不作为药物或治疗剂在体内使用。当通过基因工程将其整合到细胞表达的蛋白质中时,它可用于研究生物系统中蛋白质的折叠、动力学和相互作用。它已被用于研究受体和离子通道的构象变化。
酶活实验
L-ANAP的非细胞结合分析并非基于受体-配体相互作用。相反,该化合物用于标记纯化的目标蛋白。利用基因密码扩展技术,在大肠杆菌或哺乳动物细胞中表达含有L-ANAP的重组蛋白。然后通过荧光光谱分析纯化的蛋白,以表征其发射特性。通常,荧光激发波长为360-400 nm,发射光谱记录波长范围为400-600 nm。通过测量荧光强度变化或发射最大值(λmax)的偏移来评估其对极性的敏感性,这些变化是对溶剂条件变化(例如,盐酸胍或尿素等变性剂浓度的变化,或pH值的变化)的响应。可以进行时间分辨荧光测量来测量荧光寿命,荧光寿命也对局部环境敏感。这种极性敏感性使得L-ANAP能够作为蛋白质结构的局部探针,以高空间分辨率反映氨基酸周围环境的疏水性。
细胞实验
L-ANAP 的细胞检测可使用哺乳动物细胞系(例如 HEK293、HeLa 或 CHO 细胞)或细菌细胞(例如大肠杆菌)进行。对于哺乳动物细胞,将正交 tRNA/氨酰-tRNA 合成酶对(例如,来自詹氏甲烷球菌或迷宫甲烷八叠球菌)与编码目的基因的质粒共转染,该目的基因在特定位置含有琥珀终止密码子 (TAG)。细胞在添加了 0.1-1 mM L-ANAP 盐酸盐的培养基中培养 24-48 小时。表达后,用 PBS 洗涤细胞,并使用合适的滤光片组(激发波长约 400 nm,发射波长约 450-550 nm)通过共聚焦或宽场荧光显微镜观察荧光。对于活细胞成像,细胞在 37°C、5% CO2 的无酚红培养基中培养。对于流式细胞术分析,细胞经胰蛋白酶消化后,重悬于PBS缓冲液中,并在配备有紫色激光器(405 nm激发)和相应发射滤光片的流式细胞仪上进行分析。对于蛋白质相互作用研究,如果将L-ANAP与另一个荧光团相邻或与荧光蛋白联用,则可测量荧光共振能量转移(FRET)。对于构象研究,使用荧光酶标仪测量L-ANAP荧光强度随配体添加、温度变化或其他刺激而发生的变化。
动物实验
L-ANAP 的动物实验主要在秀丽隐杆线虫或斑马鱼等无脊椎动物模式生物中进行,这些模式生物已建立了遗传密码扩展技术,可将非天然氨基酸掺入特定组织表达的蛋白质中。对于斑马鱼,将编码工程化 tRNA 和氨酰-tRNA 合成酶的 mRNA,以及编码带有琥珀密码子的目标蛋白的 mRNA 或质粒 DNA,在含有 L-ANAP 盐酸盐(0.1-1 mM)的注射缓冲液中,显微注射到单细胞期胚胎中。将胚胎在含有 L-ANAP(0.1-0.5 mM)的鱼缸水中孵育 24-72 小时。使用配备水浸物镜的共聚焦或宽场荧光显微镜进行荧光成像。对于秀丽隐杆线虫(C. elegans),将线虫培养在接种了表达靶蛋白的大肠杆菌或添加了含L-ANAP培养基的线虫生长培养基(NGM)琼脂平板上,并使用荧光显微镜观察活体线虫的荧光。由于全身递送非天然氨基酸存在挑战,且正交翻译机制需要器官特异性表达,因此哺乳动物的研究受到限制。不过,目前已开发出表达正交tRNA/合成酶对的转基因小鼠模型,用于组织特异性掺入非天然氨基酸。
药代性质 (ADME/PK)
L-ANAP盐酸盐是一种小分子荧光非天然氨基酸(盐酸盐的分子量为308.76),作为研究用化学品供应。由于L-ANAP并非用于治疗,因此其在动物体内的药代动力学特性尚未得到充分表征。当添加到细胞培养基中(通常浓度为0.1-1 mM)时,L-ANAP可通过氨基酸转运蛋白(例如LAT1 (SLC7A5) 和L系统转运蛋白)被细胞吸收。进入细胞后,它通过正交tRNA/合成酶对在翻译过程中掺入蛋白质。未掺入的L-ANAP被认为通过正常的氨基酸分解代谢途径和肾脏清除进行代谢或排泄。该化合物在37℃的细胞培养基中可稳定保存24-48小时。由于L-ANAP并非用于药物开发,因此尚未确定其半衰期、分布容积和血浆蛋白结合率等详细参数。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
L-ANAP盐酸盐是一种荧光非天然氨基酸,仅用于研究目的,不作为治疗药物;因此,尚未进行正式的毒性研究。根据其化学结构,在采取标准实验室预防措施的情况下,L-ANAP盐酸盐预计具有较低的急性毒性。该化合物应被视为潜在刺激物;安全数据表(SDS)建议避免吸入、摄入和皮肤接触。在典型浓度(0.1-1 mM)下用于细胞培养时,L-ANAP在HEK293、HeLa和CHO细胞中经标准检测(MTT、CellTiter-Glo)证实,未表现出明显的细胞毒性或对细胞活力的不良影响。尚未进行长期毒性研究。在秀丽隐杆线虫和斑马鱼等无脊椎动物模型中,L-ANAP的使用浓度高达0.5-1 mM,未见明显的毒性或发育异常的报道。盐酸盐直接接触黏膜可能引起轻微刺激。目前尚无L-ANAP盐酸盐的致突变性或遗传毒性数据。
参考文献

[1]. Measuring distances between TRPV1 and the plasma membrane using a noncanonical amino acid and transition metal ion FRET. J Gen Physiol. 2016 Feb;147(2):201-16.

[2]. Enantiospecific synthesis of genetically encodable fluorescent unnatural amino acid L-3-(6-acetylnaphthalen-2-ylamino)-2-aminopropanoic acid. J Org Chem. 2011 Aug 5;76(15):6367-71.

其他信息
L-ANAP(氨基萘-丙氨酸-苯丙氨酸,更准确地说是3-(6-乙酰萘-2-基氨基)-2-氨基丙酸)是一种荧光非天然氨基酸,可进行基因编码且对极性敏感,这意味着其荧光性质会根据局部环境的疏水性而改变。与传统荧光蛋白相比,L-ANAP的主要优势在于其体积小,并且能够以最小的蛋白质结构扰动将其定位到目标蛋白的特定位置。这使得研究人员能够以接近原子分辨率研究蛋白质构象变化,实时监测蛋白质折叠路径,追踪蛋白质-蛋白质相互作用,并绘制配体或其他蛋白质的结合位点。L-ANAP已被用于研究G蛋白偶联受体(GPCR)、离子通道(包括电压门控钾通道)和酶的构象动力学。激发波长最大值约为360-400 nm,发射波长最大值范围为450-550 nm,具体数值取决于环境极性。L-ANAP是不断扩充的荧光非天然氨基酸工具包中的一种,该工具包可作为常用荧光蛋白(FP)的补充,使研究人员能够以更高的空间分辨率和更小的空间位阻研究蛋白质的结构和动力学。该化合物仅供研究使用,未经批准用于临床或诊断应用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C15H17CLN2O3
分子量
308.76
相关CAS号
L-ANAP;1313516-26-5
外观&性状
White to yellow solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~33.33 mg/mL (~107.95 mM)
H2O :~1 mg/mL (~3.24 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.2388 mL 16.1938 mL 32.3876 mL
5 mM 0.6478 mL 3.2388 mL 6.4775 mL
10 mM 0.3239 mL 1.6194 mL 3.2388 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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