JAG-1, scrambled TFA (scJag-1 TFA)

目录号: V76873 纯度: ≥98%
JAG-1,乱序 (scJag-1) TFA 是 JAG-1(Jagged-1 蛋白)的乱序序列。
JAG-1, scrambled TFA (scJag-1 TFA) 产品类别: Peptides | 多肽
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
50mg
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产品描述
JAG-1 乱序片段 (scJag-1) TFA 是 JAG-1(Jagged-1 蛋白)的乱序序列。JAG-1 乱序片段 TFA 与 JAG-1 的活性片段具有相同的氨基酸组成,但氨基酸顺序随机打乱。JAG-1 乱序片段 TFA 常被用作阴性对照 (NC)。
JAG-1,即乱序TFA(scJag-1 TFA),是一种合成的乱序(随机序列)肽,衍生自Jagged-1(188-204)序列。它作为活性Jagged-1肽的阴性对照。该肽的氨基酸序列经过重排,使其丧失与Notch受体结合的能力,同时保持相似的长度和氨基酸组成。
生物活性&实验参考方法
靶点
scJag-1 TFA does not target the Notch receptor or any specific biological target. By scrambling the native sequence, the peptide loses its binding affinity for Notch and cannot activate Notch signaling. Its purpose is to serve as a specificity control in experiments using the active Jagged-1 peptide, ensuring that observed effects are due to Notch engagement and not non-specific peptide properties.
体外研究 (In Vitro)
SOCE的瞬态和平台期成分对人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)没有影响,但用50 μM scJag-1 TFA预处理30分钟后,细胞对储存操纵性Ca2+内流的反应比用溶解scJag-1的溶剂处理的细胞更强[1]。这与JAG-1的作用相反。
在无细胞结合实验(SPR 或 ELISA)中,scJag-1 TFA 在浓度高达 100 uM 时均未显示出与 Notch 胞外结构域的可测量结合,这与活性 Jagged-1 肽截然不同。它也未能诱导 Notch 的任何构象变化。这证实了该乱序肽对 Notch 结合无活性,可作为真正的阴性对照。
体内研究 (In Vivo)
在细胞Notch报告基因检测(例如HEK293 CBF1-荧光素酶)中,scJag-1 TFA(10-100 uM)不会使荧光素酶活性高于溶剂对照组。qRT-PCR结果显示,它也不会上调Notch靶基因(Hes1、Hey1)的表达。此外,当与活性Jagged-1肽共孵育时,该乱序肽也不会抑制其活性,表明其不具有拮抗作用。因此,它在功能上是中性的。
酶活实验
为确认无结合,我们按照活性肽的方法进行无细胞SPR检测。将重组Notch1-ECD固定在传感器芯片上。注入scJag-1 TFA(1-100 uM),并记录响应单位。未检测到明显的结合。同样,在包被有Notch-ECD的酶标板上进行ELISA检测,并使用生物素标记的对照肽,结果显示无高于背景的信号。此外,我们还通过动态光散射检测了肽的聚集情况,以确保其溶解性。
细胞实验
将HEK293 Notch报告基因细胞用scJag-1 TFA(10-100 uM)处理24-48小时,并检测荧光素酶活性。未观察到激活。在对照实验中,同时测试了活性Jagged-1肽,以验证检测灵敏度。此外,还评估了用scJag-1 TFA处理的细胞的活力和形态;预期与未处理的对照组相比没有变化。在与活性肽(1:1摩尔比)的共处理实验中,也使用乱序肽作为对照。
动物实验
在小鼠模型中,scJag-1 TFA 的给药剂量和途径与活性 Jagged-1 肽相同(例如,10-30 mg/kg,腹腔注射,每日一次,持续 5-14 天)。分析组织中 Notch 靶基因(Hes1、Hey1)的表达和组织学变化。不应出现 Notch 信号通路激活或表型改变。活性肽处理组和对照肽处理组之间的任何差异均表明存在 Notch 特异性效应。该对照对于验证体内疗效至关重要。
药代性质 (ADME/PK)
scJag-1 TFA 与活性肽具有相似的理化性质:分子量约为 2100 Da,水溶性高,由于蛋白水解作用,血浆半衰期短(数分钟)。TFA 盐可提高其溶解度。该重组肽在 -20°C 下以粉末形式稳定。用于体内实验时,需在注射前立即用无菌 PBS 缓冲液复溶。其药代动力学特征与活性肽相同,因此是理想的对照品。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
研究剂量(小鼠最高剂量 30 mg/kg)下,scJag-1 TFA 未见毒性报道。该肽缺乏生物活性,预计无毒。注射部位可能出现轻微反应。该化合物仅供研究使用;尚无临床安全性数据。标准实验室操作防护措施(戴手套、穿实验服)即可。阴性对照应与活性肽使用相同浓度。
参考文献

[1]. Activation of Notch signaling by short-term treatment with Jagged-1 enhances store-operated Ca(2+) entry in human pulmonary arterial smooth muscle cells. Am J Physiol Cell Physiol. 2014 May 1;306(9):C871-8.

其他信息
scJag-1 TFA 是一种研究级肽,仅用作 Jagged-1 (188-204) 活性肽的阴性对照,不具有任何治疗用途。该肽的序列经过打乱,旨在保持相似的净电荷和疏水性,但破坏 Notch 的特异性结合基序。该对照对于在 Notch 信号通路研究中验证靶向效应至关重要。请于 -20℃ 干燥保存。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C95H128F3N25O28S3
分子量
2221.37
相关CAS号
JAG-1, scrambled;402941-23-5
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~100 mg/mL (~45.02 mM)
H2O :~10 mg/mL (~4.50 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.4502 mL 2.2509 mL 4.5017 mL
5 mM 0.0900 mL 0.4502 mL 0.9003 mL
10 mM 0.0450 mL 0.2251 mL 0.4502 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们