| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Histone H3. H3K4(Me3) (1-20) is a synthetic peptide corresponding to the N-terminal tail (amino acids 1-20) of human histone H3.1, with trimethylation at lysine 4 (H3K4me3). This post-translational modification (PTM) is a well-characterized epigenetic mark associated with active gene transcription. H3K4me3 is found in euchromatin (transcriptionally active regions) and is highly enriched at the transcription start sites (TSS) of active genes. It is recognized by reader proteins containing chromodomains or PHD fingers (e.g., ING proteins, TAF3, CHD1), which facilitate transcription initiation. The methylation is catalyzed by histone methyltransferases (e.g., SET1/MLL complexes, SETD1A/B, MLL1-4) and removed by demethylases (e.g., KDM5 family, LSD1). The peptide serves as an in vitro substrate for these enzymes, allowing researchers to study their activity. It is not a drug; it is a research reagent for chromatin and epigenetics studies.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，H3K4(Me3) (1-20) 可用作组蛋白去甲基化酶（例如 KDM5A (JARID1A) 和 KDM5B (JARID1B)）的底物。在去甲基化酶活性测定中，将 H3K4(Me3) 肽段与重组 KDM5A（或 KDM5 家族酶）在 α-酮戊二酸、Fe(II) 和抗坏血酸存在下孵育。通过质谱（MALDI-TOF 或 LC-MS）或使用 H3K4me3 特异性抗体的 ELISA 检测，监测三甲基化赖氨酸 4 去甲基化为二甲基化、单甲基化或未甲基化状态的过程。可以测定抑制剂的 IC50 值。此外，H3K4(Me3) 也可作为赖氨酸甲基转移酶（例如 MLL1 复合物、SETD1A）的底物。在甲基化检测中，将未甲基化或单甲基化的H3K4肽段与甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸（SAM）孵育，并通过放射性（3H-SAM）或质谱法定量甲基的掺入。该肽段也可用作抗原，以制备针对H3K4me3的特异性抗体。它可以与载体蛋白（KLH、BSA）偶联用于免疫。它还用于竞争性ELISA，以确认抗体的特异性。在组蛋白结合检测中，可以将肽段（在C端添加生物素标签）固定在链霉亲和素板上，以从核提取物中捕获“读取”蛋白（例如ING2、CHD1）；结合情况通过Western blot或ELISA检测。肽段的TFA盐是常用的；它不影响酶活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
不适用（研究试剂）。H3K4(Me3) (1-20) 不是药物，不用于体内给药。它是一种用于体外和离体研究的生化试剂。它可以作为对照添加到染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验中，或用于基于质谱的定量分析。它不适用于动物。在假设性研究中（不常见），可以将标记版本（例如，13C/15N 标记）注射到动物体内以追踪组蛋白周转，但这并非标准做法。本产品严格用于试管或无细胞体系中的研究用途。
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| 酶活实验 |
对于非细胞结合实验（例如，检测读取蛋白与 H3K4me3 的结合），使用生物素标记的肽段（生物素-H3K4(Me3) (1-20)）。在 96 孔链霉亲和素包被板中，加入生物素标记的 H3K4(Me3) 肽段（0.1-10 uM），溶于结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、0.05% Tween-20、1 mM DTT、0.1% BSA）中，室温孵育 1 小时。洗涤孔板。用 3% BSA 封闭。加入重组读取蛋白（例如，ING2 PHD 指状结构域，1-10 ug/mL），孵育 1-2 小时。洗涤后，加入针对目标蛋白（或His标签蛋白）的一抗（若目标蛋白带有His标签，则加入抗His标签抗体），再加入HRP标记的二抗和TMB底物。在450 nm处测量吸光度。竞争实验中，加入递增浓度的未修饰H3K4(Me3)肽或H3K4(Me2)肽。下拉实验中，将生物素标记的肽与链霉亲和素磁珠孵育，然后加入293T细胞的核裂解液。洗涤、洗脱后进行SDS-PAGE电泳，然后进行目标蛋白（例如，抗ING2）的Western blot分析。对于去甲基化酶活性测定（无细胞）：将 H3K4(Me3) 肽段 (1-10 uM) 与重组 KDM5A (0.1-1 uM) 在反应缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、100 uM α-酮戊二酸、100 uM Fe(NH4)2(SO4)2、2 mM 抗坏血酸、1 mM DTT）中于 37℃ 孵育 30-60 分钟。加入 0.5% TFA 终止反应。脱盐后，使用 MALDI-TOF 质谱进行分析。质量从 1156 Da（三甲基）到 1142 Da（二甲基）的偏移表明发生了去甲基化。或者，也可以使用 H3K4me3 特异性抗体进行 ELISA 检测：反应后，用肽段包被酶标板，然后用抗 H3K4me3 抗体进行检测。对于甲基转移酶活性测定（未标记肽或K4单甲基化肽），将样品与甲基转移酶（0.1-1 uM）和1-10 uM 3H-SAM在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、5 mM DTT、10 mM MgCl2）中孵育30-60分钟。终止反应，将反应液点样于P81滤纸上，洗涤后用液体闪烁计数器计数3H。这些是标准操作流程。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的检测，需要培养细胞（例如HEK293、HeLa细胞）并分离组蛋白。H3K4(Me3)(1-20)肽段不直接添加到细胞中；它是体外检测的底物。虽然可以设计一种细胞渗透性版本（带有Tat细胞穿透肽），将该肽段递送到细胞内，与内源性H3K4me3竞争结合读取蛋白，但这并非标准方法。通常，该肽段用作质谱定量细胞内H3K4me3水平的标准品。例如，从细胞中酸提取的组蛋白（5-20 ug）用内切蛋白酶Arg-C或胰蛋白酶消化。将已知量的稳定同位素标记的H3K4(Me3)肽段（例如13C/15N标记）作为内标添加到消化液中。采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）在选择反应监测（SRM）模式下分析混合物。内源性（未标记）肽与内标的比值可用于H3K4me3水平的绝对定量。该方法用于测量药物处理后或疾病模型中H3K4me3占有率的变化。ChIP对照实验不使用未标记肽。体外竞争实验如上所述。由于该肽不具有细胞渗透性，因此不适用于基于细胞的实验。所有使用分离组蛋白或核提取物的实验均可进行。TFA盐是可接受的；可溶于水或0.1% TFA溶液中配制成1-10 mM的储备液。使用时应使用与酶促反应兼容的缓冲液。
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| 动物实验 |
不适用。H3K4(Me3) (1-20) 不用于动物实验。由于该肽段为体外研究试剂，因此没有体内动物实验方案。它可用于离体实验：例如，将小鼠脑组织匀浆，提取组蛋白，然后将该肽段用作质谱标准品，用于定量分析 H3K4me3。然而，这是一种分析方法，而非动物实验。本产品仅供研究使用，不得用于动物给药。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无H3K4(Me3) (1-20)的药代动力学(PK)数据。该肽段不用于体内给药；因此，其PK参数（吸收、分布、代谢、排泄、半衰期）不适用。该肽段仅供体外研究使用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无H3K4(Me3) (1-20)的毒性数据。作为一种由天然L-氨基酸组成的合成肽，它通常被认为毒性较低。体外实验表明，浓度高达100 μM的该肽不会干扰酶活性测定，且添加到培养基中对细胞无细胞毒性（尽管它不具有细胞渗透性）。然而，由于该肽并非用于体内实验，因此未进行毒理学研究。该肽中含有少量三氟乙酸盐，且为化学计量比，无毒。使用时应采取标准的实验室安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。本产品仅供研究使用，不得用于人体或动物。
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| 参考文献 |
[1]. Mulder KW, et al. Regulation of histone H3K4 tri-methylation and PAF complex recruitment by the Ccr4-Not complex. Nucleic Acids Res. 2007;35(7):2428-2439.
[2]. Fujino T, et al. Alteration of histone H3K4 methylation in glomerular podocytes associated with proteinuria in patients with membranous nephropathy. BMC Nephrol. 2016;17(1):179. Published 2016 Nov 17. |
| 其他信息 |
组蛋白H3K4三甲基化（H3K4me3）是一种公认的组蛋白翻译后修饰（PTM），在活跃转录基因的启动子区域高度富集。它与开放染色质相关，并作为转录起始复合物的停泊位点。H3K4me3标记由SET1/MLL家族的组蛋白甲基转移酶添加，并由KDM5（JARID1）家族的去甲基化酶去除。H3K4me3的异常调控与癌症、发育障碍和神经系统疾病密切相关。H3K4(Me3)(1-20)肽是组蛋白H3 N端尾部（氨基酸残基1-20）的合成版本，其中第4位赖氨酸被三甲基化。它可用作甲基转移酶和去甲基化酶的体外底物、质谱分析的标准品以及研究阅读蛋白的工具。三氟乙酸盐用于提高溶解度和便于储存。本产品并非药物，不具有治疗用途；它是一种用于表观遗传学研究的科研级化学品。
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| 分子式 |
C94H174N35O27
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|---|---|
| 分子量 |
2226.64
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.4491 mL | 2.2455 mL | 4.4911 mL | |
| 5 mM | 0.0898 mL | 0.4491 mL | 0.8982 mL | |
| 10 mM | 0.0449 mL | 0.2246 mL | 0.4491 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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