| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 靶点 |
Guanylyl Cyclase C (GC-C). Guanylin (human) TFA is an endogenous peptide that acts as an agonist of guanylyl cyclase C (GC-C), also known as guanylate cyclase 2C (GUCY2C). GC-C is a transmembrane receptor expressed primarily on the luminal surface of intestinal epithelial cells, as well as in the kidneys and other tissues. Upon binding to GC-C, guanylin induces a conformational change that activates the intracellular guanylyl cyclase domain, catalyzing the conversion of GTP to cyclic GMP (cGMP). Elevated cGMP levels activate downstream effectors, including cGMP-dependent protein kinase II (PKG II) and the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR). Activation of CFTR leads to the secretion of chloride (Cl-) and bicarbonate (HCO3-) into the intestinal lumen, while inhibition of the Na+/H+ exchanger (NHE3) reduces sodium absorption. The net effect is increased fluid and electrolyte secretion into the intestinal lumen, contributing to the regulation of intestinal fluid homeostasis. Guanylin is produced by intestinal goblet cells and Paneth cells. The TFA salt does not affect receptor binding.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，人鸟苷素（Guanylin (human) TFA）以浓度依赖的方式激活鸟苷酸环化酶C (GC-C)。在表达GC-C的T84人结肠上皮细胞中，用鸟苷素（0.1-1000 nM）处理可增加细胞内cGMP水平，这可通过cGMP ELISA或HTRF检测法测定。cGMP积累的EC50值通常在低纳摩尔至低微摩尔范围内（例如，1-100 nM）。在利用人结肠黏膜或T84细胞单层进行的Ussing室实验中，鸟苷素（10-100 nM）可增加短路电流（Isc），表明Cl-分泌增加。鸟苷酸环化酶抑制剂LY-83583或CFTR抑制剂（例如，CFTRinh-172）可阻断此效应。在膜片钳研究中，鸟苷素可激活离体膜片中的CFTR通道。鸟苷素还能抑制NHE3活性，从而减少Na+吸收。其三氟乙酸盐可溶于水。在细胞活力测定（MTT）中，浓度高达10 uM的鸟苷素对T84或其他上皮细胞无细胞毒性。在肾上皮细胞中，鸟苷素以类似的方式调节电解质转运。该肽不具有直接的抗菌活性；它是一种内源性液体分泌调节因子。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，已利用动物模型研究了鸟苷素（人）三氟乙酸（TFA）在肠道液体分泌中的作用及其潜在的治疗应用。在啮齿动物中，静脉或腹腔注射鸟苷素（10-1000 ug/kg）可刺激肠道液体分泌，这可通过结扎肠袢中液体的积聚来测量（例如，小鼠闭环试验）。静脉注射鸟苷素（10-100 nmol/kg）可增加小肠的净液体分泌和管腔内碳酸氢盐输出。这种作用是由鸟苷酸环化酶C/环磷酸鸟苷（GC-C/cGMP）和囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）介导的，这已通过GC-C敲除或CFTR缺陷小鼠中该作用的缺失得到证实。鸟苷素还能加速胃肠道转运。在便秘模型（例如，洛哌丁胺诱导的小鼠便秘）中，鸟苷素（10-100 ug/kg，腹腔注射）可增加粪便颗粒排出量和含水量，与FDA批准的鸟苷酸环化酶C（GC-C）激动剂利那洛肽的作用相似。在炎症性肠病（IBD）模型中，鸟苷素水平通常降低，外源性鸟苷素可能通过促进黏膜愈合而发挥有益作用。然而，鸟苷素本身并不作为药物使用；其长效类似物（利那洛肽、普卡那肽）已获FDA批准用于治疗慢性特发性便秘（CIC）和便秘型肠易激综合征（IBS-C）。由于蛋白水解作用，鸟苷素本身的半衰期很短（仅几分钟）。三氟乙酸盐用于研究；在体内研究中，该肽溶解于生理盐水或磷酸盐缓冲液（PBS）中。所有动物实验程序均需获得机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
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| 酶活实验 |
对于非细胞结合分析，表面等离子共振 (SPR) 可用于测量人鸟苷素 TFA 与鸟苷酸环化酶 C (GC-C) 胞外结构域 (ECD) 的结合亲和力。通过胺偶联或抗 His 标签捕获法将重组人 GC-C ECD（His 标签）固定在 CM5 传感器芯片上。将鸟苷素溶解于运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005% P20、1 mM DTT）中，浓度范围为 0.1-1000 nM。在 25°C 下，以 30 uL/min 的流速使溶液流过固定的 GC-C ECD。记录结合（2-3 分钟）和解离（5-10 分钟）阶段。绘制双参考传感器图（减去参考池和缓冲液空白）。通过拟合 1:1 Langmuir 结合模型计算 KD 值。或者，使用 125I 标记的鸟苷酸环化酶进行放射性配体结合实验。将表达 GC-C 的细胞（例如 T84 或 HEK293-GC-C）的膜与 0.05-0.1 nM 125I 标记的鸟苷酸环化酶和不同浓度（0.01-1000 nM）的未标记鸟苷酸环化酶 TFA 在结合缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、5 mM MgCl2、0.1% BSA）中孵育。在 25℃ 下孵育 60-90 分钟。通过预先浸泡在 0.3% PEI 中的 GF/B 滤膜快速过滤，分离结合态和游离态。计数结合态放射性。测定 IC50 值，并计算 Ki 值。对于功能性无细胞检测，可测定膜制备物中的鸟苷酸环化酶C (GC-C) 活性。将膜（20-50 ug）与不同浓度的鸟苷酸环化酶（0.1-1000 nM）在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、1 mM GTP）中于37℃孵育10-30分钟。煮沸终止反应，并通过ELISA测定cGMP含量。由此确定EC50值。TFA盐可溶于水；配制0.1-1 mM的储备液并储存于-80℃。
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| 细胞实验 |
细胞实验中，使用T84人结肠上皮细胞（传代50-70代）。将细胞接种于24孔板中（2-4 × 10⁵个细胞/孔），培养基为含10% FBS的DMEM/F12，培养5-7天直至细胞汇合并分化。cGMP检测中，用PBS洗涤细胞，加入含0.5 mM IBMX（磷酸二酯酶抑制剂）的无血清培养基，预孵育20分钟，然后用鸟苷三氟乙酸（GFA）（0.1-1000 nM）于37℃处理30分钟。裂解细胞，用ELISA法（例如，Cayman Chemical、Enzo Life Sciences）测定cGMP。EC50值由剂量反应曲线确定。对于 Ussing 室实验（短路电流，Isc），将 T84 细胞接种于 Snapwell 透膜支持物（孔径 0.4 um）上培养 7-10 天直至细胞汇合。将 Snapwell 置于 Ussing 室中，浸入林格氏液，并测量 Isc。在 Snapwell 的顶端加入鸟苷素（10-100 nM）。应观察到 Isc 的增加（表明 Cl- 分泌增加）。对于 CFTR 激活实验，使用稳定表达人 CFTR 的 Fischer 大鼠甲状腺 (FRT) 细胞。将细胞接种于 Snapwell 插入物上，培养 5-7 天，置于 Ussing 室中，并在顶端加入鸟苷素（10-100 nM）。Isc 的增加依赖于 CFTR，并可被 CFTRinh-172（10 uM）阻断。细胞活力检测中，用鸟苷素（0.01-100 uM）处理T84细胞24-48小时，然后进行MTT或CellTiter-Glo检测。鸟苷素无细胞毒性。所有实验均应设置三个复孔，且至少进行三次独立传代。对照组：溶剂（水或PBS）。阳性对照：耐热肠毒素STa（1-10 nM）或利那洛肽（1-10 nM）。三氟乙酸盐（TFA）也可使用；用水配制成0.1-1 mM的储备液，储存于-80℃，避免反复冻融。
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| 动物实验 |
对于体内研究，使用雄性或雌性C57BL/6J小鼠（8-12周龄，20-25克）。为了进行小鼠闭环肠液分泌测定，需将小鼠禁食16-20小时（但允许饮水）。使用异氟烷或氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉小鼠。进行正中剖腹手术，用丝线结扎两段3-4厘米长的小肠（近端和远端空肠），保留肠系膜完整。向对照组肠袢注射100微升载体（PBS），向实验组肠袢注射100微升鸟苷素三氟乙酸（Guanylin TFA，0.1-1000微克/毫升）。该肽溶于无菌PBS中。缝合腹部。4-6小时后，处死小鼠，切除肠袢，并测量每段肠袢的长度和重量。计算液体分泌量（mg液体/cm肠道）。与载体对照组相比，鸟苷素应增加液体分泌量。便秘模型：在治疗前30分钟皮下注射洛哌丁胺（3-5 mg/kg）诱导小鼠便秘。腹腔注射鸟苷素（10-100 μg/kg）或载体（PBS）。将小鼠单独饲养在笼中，笼底铺有纸巾以收集粪便。每30-60分钟计数粪便的数量和重量，持续4-6小时。鸟苷素应增加粪便的数量和含水量。结肠炎模型：在饮用水中添加2-3%葡聚糖硫酸钠（DSS）处理小鼠5-7天以诱导结肠炎。从第1天开始，每日腹腔注射鸟苷素（50-200 μg/kg）。每日监测体重、粪便性状和隐血。在第7天处死动物，收集结肠，并通过ELISA法测量结肠长度、组织学评分（H&E染色）和细胞因子水平（IL-6、TNF-α、IL-1β）。鸟苷素可能减轻结肠炎的严重程度（但数据有限）。所有动物实验均需获得IACUC批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无人鸟苷素三氟乙酸盐（GFA）的特定药代动力学（PK）数据。鸟苷素是一种由15个氨基酸组成的肽（分子量约为1.6 kDa），静脉注射后可迅速从血液循环中清除。由于肾脏滤过（肾小球清除）以及血清和组织肽酶（包括二肽基肽酶和中性内肽酶）的蛋白水解作用，其在啮齿动物体内的血浆半衰期极短，约为1-5分钟。鸟苷素不具有口服生物利用度。三氟乙酸盐不影响其药代动力学。进行药代动力学研究时，可向小鼠静脉注射放射性标记或荧光标记的鸟苷素（0.1-1 mg/kg），分别于0、2、5、10、15、30、60和120分钟采集血液样本，并通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）或放射性计数法进行定量分析。该肽代谢迅速。由于半衰期短，鸟苷素不属于治疗候选药物；其作用时间更长的类似物（利那洛肽、普卡那肽）已用于临床。三氟乙酸盐用于研究；体内应用时，该肽应溶解于磷酸盐缓冲液（PBS）中。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于人鸟苷素三氟乙酸盐（GFA）的具体毒性数据。作为一种内源性肽类激素，鸟苷素通常被认为毒性较低。体外实验表明，浓度高达 10 μM 的鸟苷素对 T84 细胞或其他上皮细胞无细胞毒性，这已通过 LDH 释放或 MTT 检测证实。体内实验表明，小鼠急性腹腔注射鸟苷素（剂量高达 1 mg/kg）不会引起明显的毒性反应（例如死亡、严重体重下降、行为改变）。其主要药理作用（增加肠液分泌）呈剂量依赖性且可逆。在高剂量（>5 mg/kg）下，肠液分泌可能导致腹泻和脱水，这些是靶向效应。尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。鸟苷素的三氟乙酸盐含量较低，被认为无毒。应采取标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。本产品仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
鸟苷素是一种内源性肽类激素，主要在胃肠道表达，调节体液和电解质平衡。其结构与细菌耐热肠毒素STa相关，后者通过激活鸟苷酸环化酶C（GC-C）引起分泌性腹泻。鸟苷素以肽前体的形式合成，并加工成具有活性的15个氨基酸形式。该肽含有四个半胱氨酸残基，形成两个二硫键，这对其生物活性至关重要。鸟苷素与鸟苷酸环化酶C（GC-C）受体结合并激活该受体，提高环磷酸鸟苷（cGMP）水平，进而导致CFTR介导的Cl⁻和HCO₃⁻分泌以及NHE3介导的Na⁺吸收受到抑制。最终结果是肠道液体分泌增加。鸟苷素/GC-C通路失调与多种胃肠道疾病有关，包括便秘、腹泻和结直肠癌。利那洛肽（Linzess）和普卡那肽（Trulance）是经FDA批准的GC-C激动剂，用于治疗慢性特发性便秘和伴有便秘的肠易激综合征。鸟苷酸环化酶原（鸟苷酸环化酶原）本身由于半衰期短而不用于临床治疗。其TFA盐用于研究。本产品仅供研究使用，未经批准用于人体治疗。
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| 分子式 |
C60H88F3N15O23S4
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| 分子量 |
1572.68
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| 相关CAS号 |
Guanylin(human);183200-12-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.6359 mL | 3.1793 mL | 6.3586 mL | |
| 5 mM | 0.1272 mL | 0.6359 mL | 1.2717 mL | |
| 10 mM | 0.0636 mL | 0.3179 mL | 0.6359 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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