| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MHC class I H-2Db. Gp100 (25-33), mouse is an MHC class I-restricted peptide epitope derived from the melanocyte-specific protein gp100 (Pmel17). In mice, this 9-mer peptide (EGSRNQDWL) binds to the MHC class I molecule H-2Db (mouse MHC class I allele). The peptide-MHC complex is presented on the surface of antigen-presenting cells (APCs) and recognized by CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs). Gp100 (25-33) is a "self/tumor antigen" because it is expressed in normal melanocytes (pigment-producing cells) but is also highly expressed in melanoma cells. This peptide does not target a receptor or enzyme; rather, it is an antigen that, when presented on MHC, can activate specific T cells. It is used to study T cell recognition, activation, and tolerance in melanoma models.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，小鼠 TFA 肽 Gp100 (25-33) 用于刺激培养中的特异性 CD8+ T 细胞克隆或 T 细胞杂交瘤。该肽（浓度为 0.1-10 uM）由表达 H-2Db 的抗原呈递细胞（例如树突状细胞或 T2-Db 细胞系）呈递给 gp100 特异性 T 细胞。T 细胞活化可通过以下方法检测：ELISA 或 ELISpot 法检测细胞因子（IFN-γ、IL-2、TNF-α）的产生；流式细胞术检测活化标志物（CD69、CD25）的上调；或通过 3H-胸苷掺入法检测增殖。该肽还用于四聚体染色：MHC I 类 H-2Db 分子与 Gp100 (25-33) 肽形成四聚体，并进行荧光标记。这些四聚体特异性结合于Gp100特异性CD8+ T细胞上的T细胞受体（TCR），从而可通过流式细胞术定量抗原特异性T细胞。该肽段不具有直接的酶活性或受体调节活性；其活性完全由免疫介导。三氟乙酸盐不影响肽段的呈递。该肽段激活T细胞的EC50值通常在0.1-10 nM至1 uM之间，具体数值取决于T细胞克隆和检测方法。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，小鼠Gp100(25-33)肽段（TFA）被用于研究黑色素瘤小鼠模型中的抗肿瘤免疫反应。在B16-F10小鼠黑色素瘤模型（表达内源性gp100抗原）中，用Gp100(25-33)肽段（与完全弗氏佐剂(CFA)、CpG或树突状细胞疫苗等佐剂联合使用）进行免疫，可诱导针对表达gp100的肿瘤细胞的特异性CD8+ T细胞反应。例如，将50-100 ug的Gp100肽段乳化于CFA中，或与50 ug CpG和IFA混合，皮下注射免疫C57BL/6小鼠。 7-14天后，收集脾细胞，并通过IFN-γ ELISpot或细胞内细胞因子染色（ICS）分析T细胞反应。在肿瘤攻击实验中，小鼠在第-7天和第-3天用肽（含佐剂）进行免疫，然后在第0天皮下注射B16-F10黑色素瘤细胞（5 × 10⁵个细胞）进行攻击。与未免疫小鼠相比，肽免疫可抑制肿瘤生长并延长生存期。然而，由于gp100是一种自身抗原，T细胞反应可能发生耐受，因此在没有免疫检查点抑制剂的情况下，gp100肽疫苗的疗效有限。与抗CTLA-4或抗PD-1抗体联合使用可增强抗肿瘤免疫力。 gp100 (25-33) 肽也用于过继性 T 细胞转移 (ACT) 模型：利用该肽在体外扩增 gp100 特异性 T 细胞，然后将其转移至荷瘤小鼠体内。该肽还可用于生成 T 细胞杂交瘤。小鼠序列 (EGSRNQDWL) 与人 gp100 25-33 表位 (KVPRNQDWL) 不同。因此，该小鼠肽特异性识别小鼠 MHC H-2Db，仅用于小鼠研究。TFA 盐适用于体内注射；注射前，将该肽溶解于 PBS 或 DMSO 中，并用 PBS 稀释。该肽在每只小鼠 200 ug 的剂量下耐受性良好。
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| 酶活实验 |
对于直接结合实验（非细胞实验），可以使用 MHC-肽结合实验来测定 Gp100 (25-33) 小鼠肽与 H-2Db MHC I 类分子的结合亲和力。实验中使用重组 H-2Db 蛋白（含 β2-微球蛋白）。荧光偏振 (FP) 或基于 ELISA 的竞争性实验是标准方法。对于 FP 实验：将纯化的 H-2Db (0.1-1 uM) 与荧光标记的参考肽（例如，FITC 标记的 H-2Db 结合肽）在结合缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% NP-40、1 mM DTT）中孵育。加入不同浓度的未标记 Gp100 (25-33) 小鼠肽（0.001-1000 uM），并在室温下孵育 24-48 小时，以使肽结合和交换。测量荧光偏振（激发波长 485 nm，发射波长 520 nm）。测定 IC50 值（取代 50% 参考肽所需的未标记肽浓度）。可报告 IC50 或 Kd 值。对于基于 ELISA 的检测：将 H-2Db/β2m 复合物包被于 96 孔板上。加入已知生物素标记的 H-2Db 结合肽和不同浓度的未标记 Gp100 (25-33) 小鼠肽；用链霉亲和素-HRP 和 TMB 检测结合情况。计算 IC50 值。或者，可以进行表面等离子共振 (SPR) 检测：将 H-2Db/β2m 蛋白固定在传感器芯片上；以 0.1-1000 uM 的浓度流过肽段；测定其解离常数 (KD)。该肽段对 H-2Db 的亲和力在低微摩尔至高纳摩尔范围内。对于肽段稳定性或降解测定：将肽段在小鼠血清中孵育（37℃，0-24 小时），然后通过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 分析测定其半衰期。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的T细胞活化实验，可使用来自gp100特异性T细胞受体（TCR）转基因小鼠（例如pmel-1小鼠）的脾细胞或纯化的CD8+ T细胞。或者，也可使用表达gp100特异性TCR的T细胞杂交瘤。对于ELISpot实验：将96孔ELISpot板用抗IFN-γ抗体包被过夜。将来自免疫小鼠（或pmel-1小鼠）的脾细胞以1-2 × 10^5个细胞/孔的密度接种于含10% FBS的RPMI-1640培养基中。加入系列稀释度为0.001-1000 nM的gp100(25-33)小鼠肽。如果未使用脾细胞，则可添加表达H-2Db的抗原呈递细胞（例如T2-Db细胞，1 × 10^4个细胞/孔）作为饲养细胞。细胞在37℃培养20-24小时后洗涤，加入生物素标记的抗IFN-γ检测抗体，随后加入链霉亲和素-AP，并用BCIP/NBT显色。使用ELISpot读板仪计数斑点。细胞因子ELISA：将脾细胞（2 × 10⁵个细胞/孔）接种于96孔板中，用肽（0.01-1000 nM）刺激48-72小时。收集上清液，并用ELISA法检测IFN-γ、IL-2或TNF-α。基于流式细胞术的T细胞活化：将脾细胞用肽（0.1-10 uM）刺激6-18小时，并在最后4-6小时加入布雷菲德菌素A。细胞经CD8表面染色后，固定、透化，并进行胞内IFN-γ或IL-2染色。测定IFN-γ+CD8+ T细胞的百分比。增殖实验：CFSE标记的脾细胞用肽（0.01-10 uM）刺激72-96小时；通过流式细胞术分析CD8+ T细胞中CFSE的稀释情况。四聚体染色：使用PE标记的H-2Db/Gp100 (25-33)四聚体对免疫小鼠的脾细胞进行染色。细胞在室温下用四聚体（1-2 ug/mL）染色30分钟，然后用抗CD8抗体染色，并通过流式细胞术进行分析。所有实验均应包含一个无关的对照肽（例如，OVA 257-264）作为阴性对照。将TFA盐溶于DMSO（10 mM储备液）或水中；避免反复冻融。肽纯度≥95%对于获得准确结果至关重要。
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| 动物实验 |
体内免疫研究采用6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠。将小鼠Gp100（25-33）TFA溶于无菌PBS（或DMSO，再用PBS稀释），浓度为1 mg/mL。进行主动免疫时，将肽与佐剂乳化。对于CFA/IFA：将等体积的肽溶液（每只小鼠50-100 μg肽）与完全弗氏佐剂（CFA）混合用于初次免疫，或与不完全弗氏佐剂（IFA）混合用于加强免疫。用注射器混合直至形成稳定的油包水乳液（乳液一滴不溶于水）。将100 μL乳液皮下注射于尾根部或侧腹部。对于基于 CpG 的免疫：将肽（50-100 μg）与 CpG ODN（50 μg）混合于 PBS 缓冲液中（总体积 100 μL），然后皮下或腹腔注射。典型方案：第 0 天：初次免疫（肽 + CFA）。第 7 或 14 天：加强免疫（肽 + IFA）。在第 14-21 天，处死小鼠，并收集脾脏用于 T 细胞检测（ELISpot、ICS、四聚体）。对于肿瘤攻击实验：小鼠在第 -14 天和第 -7 天进行免疫（使用 CFA/IFA 或 CpG）。在第 0 天，将 B16-F10 黑色素瘤细胞（5 × 10⁵ 个，溶于 100 μL PBS）皮下注射到小鼠右侧腹部。每 2-3 天用游标卡尺测量肿瘤体积。监测小鼠的存活情况。联合治疗：在肿瘤攻击后第0、3、6、9天，分别腹腔注射抗PD-1抗体（200 μg）或抗CTLA-4抗体（100 μg）。过继性T细胞转移（ACT）：从pmel-1小鼠中分离CD8+ T细胞，用肽（1 μM）和IL-2（30 IU/mL）在体外激活5天，然后扩增。将这些细胞（5 × 10^6个，溶于200 μL PBS）静脉注射到荷瘤小鼠体内（B16-F10攻击后第7天）。该肽也用于体外扩增T细胞。TFA盐可用于体内实验；但需确保最终溶液的pH值在6-8之间。所有动物实验程序必须经IACUC批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无小鼠TFA佐剂Gp100 (25-33)的详细药代动力学数据。该肽由9个氨基酸组成（分子量约为1.2 kDa），具有很高的水溶性，静脉或皮下注射后可迅速从血液循环中清除。在体内，皮下注射后，该肽可能从注射部位缓慢吸收（尤其是在CFA/IFA乳化剂中）。然而，该肽的作用是作为抗原，被注射部位的抗原呈递细胞（APC）摄取，而非进行全身药代动力学研究。循环中的游离肽会被蛋白酶迅速降解，并通过肾脏清除（半衰期<10分钟）。TFA盐不会改变其药代动力学特性。在免疫研究中，该肽与佐剂结合使用，佐剂会在注射部位形成药物储存库，在数天至数周内缓慢释放肽。因此，游离肽的药代动力学与其免疫原性无关。该肽不是药物；详细的药代动力学参数尚未公布。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于Gp100 (25-33) 和小鼠TFA的具体毒性数据。作为一种源自自身/肿瘤抗原的9个氨基酸肽，它通常具有良好的耐受性。体内实验表明，用该肽（每只小鼠50-100 μg，溶于CFA/IFA佐剂）免疫的C57BL/6小鼠未出现明显的毒性反应（无体重减轻、无行为改变、无死亡）。注射部位反应（肿胀、红斑）可能由佐剂（CFA）引起，而非肽本身。全身细胞因子释放（IFN-γ、IL-2）是预期免疫反应的一部分，而非毒性反应。部分小鼠可能由于免疫系统攻击正常黑素细胞而出现自身免疫性白癜风（毛发/皮毛脱色），这是一种靶向自身免疫效应，而非毒理学危害。该模型常用于研究癌症免疫疗法的自身免疫副作用。未见遗传毒性、器官毒性或致癌性报道。三氟乙酸盐含量极低，被认为无毒。该肽仅供研究使用，未获准用于人类或兽医用途。应采取标准实验室安全防护措施（佩戴手套、穿实验服）。与人源肽不同，鼠源肽仅用于小鼠模型，不适用于人类治疗。
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| 参考文献 |
[1]. Gal Cafri, et al. Production of LacZ inducible T cell hybridoma specific for human and mouse gp100 25-33 peptides. PLoS One. 2013;8(2):e55583.
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| 其他信息 |
gp100 (Pmel17) 蛋白是一种黑素细胞特异性糖蛋白，参与黑素体生物合成和色素沉着。它在黑色素瘤细胞中高表达，并已被广泛研究作为癌症免疫疗法的靶点，包括疫苗、过继性T细胞疗法 (ACT) 和免疫检查点抑制剂。小鼠 gp100 25-33 表位 (EGSRNQDWL) 受 H-2Db 限制，并在 B16-F10 黑色素瘤小鼠中被鉴定为主要的 CD8+ T 细胞表位。相应的人类表位是 gp100 209-217 (ITDQVPFSV) 或 280-288 (YLEPGPVTA)，它们受 HLA-A2 限制。小鼠肽段被用作研究成熟的 B16-F10 黑色素瘤模型中黑色素瘤免疫学的工具。使用三氟乙酸 (TFA) 盐可提高其溶解度。该肽仅供研究使用；它并非获批药物，也未进行过人体试验。本产品不适用于治疗用途。
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| 分子式 |
C48H70F3N15O19
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| 分子量 |
1218.15
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| 相关CAS号 |
Gp100 (25-33), mouse;212370-36-0
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8209 mL | 4.1046 mL | 8.2092 mL | |
| 5 mM | 0.1642 mL | 0.8209 mL | 1.6418 mL | |
| 10 mM | 0.0821 mL | 0.4105 mL | 0.8209 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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