| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ki: 12.2 nM (Neutrophil elastase)[3]
Freselestat selectively targets human neutrophil elastase (HNE), a serine protease released from activated neutrophils during inflammation. HNE is involved in the degradation of extracellular matrix components such as elastin, collagen, and proteoglycans, and contributes to tissue damage in various inflammatory diseases. By inhibiting HNE with high potency (Ki 12.2 nM), Freselestat reduces elastase-mediated tissue destruction and inflammation. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
为了模拟体外循环，使用滚压泵和膜式氧合器，将3.75 U/mL新鲜肝素化人血循环120分钟，分别在有或无1.0 μM Freselestat (ONO-6818)的情况下进行。Freselestat组的中性粒细胞弹性蛋白酶水平显著降低。Freselestat显著降低了C5b-9和白细胞介素8的合成。Freselestat不影响循环过程中L-选择素和CD11b的改变[3]。
在体外，使用新鲜肝素化人血模拟体外循环模型，循环120分钟后，Freselestat (1.0 uM) 可显著降低中性粒细胞弹性蛋白酶水平。Freselestat 治疗显著降低了 C5b-9 和白细胞介素-8 (IL-8) 的合成，表明其具有抗炎活性。该化合物在循环过程中对 L-选择素和 CD11b 的表达无影响，证实其作用于弹性蛋白酶而非中性粒细胞的整体活化。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
弗瑞司他（ONO-6818；口服；10-100 mg/kg；每日一次；疗程8周）治疗可降低支气管肺泡灌洗液中由HNE剂量依赖性引起的血红蛋白、中性粒细胞计数和肺髓过氧化物酶活性升高。ONO-6818可减少肺出血和肺部中性粒细胞积聚，从而预防HNE引起的急性肺损伤[1]。
体内实验表明，每日一次口服10-100 mg/kg剂量的弗瑞司他，持续8周，可剂量依赖性地降低HNE诱导的肺髓过氧化物酶活性、血红蛋白水平以及支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数的升高。弗瑞司他可减少肺出血和肺部中性粒细胞浸润，从而预防雄性Wistar大鼠HNE诱导的急性肺损伤。这些结果表明其具有治疗炎症性肺部疾病的潜力。 |
| 酶活实验 |
在酶抑制试验中，将纯化的人中性粒细胞弹性蛋白酶（0.1-1 nM）与浓度递增的弗司来司他四水合物（0.1-100 nM）在测定缓冲液（100 mM HEPES，500 mM NaCl，0.05% Brij-35，pH 7.5）中于25℃孵育10-15分钟。加入荧光底物MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC（10-100 uM）。在激发波长380 nm、发射波长460 nm处测量荧光强度。利用Cheng-Prusoff方程，根据非线性回归确定的IC50值计算抑制常数（Ki）。
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| 细胞实验 |
中性粒细胞弹性蛋白酶活性测定通常在无细胞条件下进行。对于细胞研究，可培养从新鲜全血中分离的人中性粒细胞或经DMSO分化的HL-60等细胞系。将细胞以1 × 10⁵个/孔的密度接种于培养板中，并在37℃下用Freselestat（1 nM-10 uM）处理30分钟。用PMA（100 ng/mL）或fMLP（1 uM）激活中性粒细胞以诱导弹性蛋白酶释放。收集上清液，加入MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC底物，并测量荧光强度。通过台盼蓝染色排除法评估细胞活力，以确认观察到的效应并非由细胞毒性引起。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型： 人中性粒细胞弹性蛋白酶 (HNE) 诱导的雄性 Wistar 大鼠 (228 g)[1]
剂量： 10 mg/kg，100 mg/kg 给药途径： 口服；每日；持续 8 周 实验结果： 剂量依赖性地减弱了 HNE 诱导的肺髓过氧化物酶活性、血红蛋白和支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数的增加。 对于HNE诱导的急性肺损伤模型，使用雄性Wistar大鼠（约228 g）。每日一次，以10或100 mg/kg的剂量，通过灌胃给予Freselestat四分之一水合物，持续8周。通过气管内滴注人中性粒细胞弹性蛋白酶（HNE）或溶剂对照诱导肺损伤。治疗后，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），检测中性粒细胞计数、血红蛋白和髓过氧化物酶活性。采集肺组织进行组织病理学分析。通过伊文思蓝染料外渗或组织学评分评估肺出血情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
已在临床前动物模型中对弗瑞司他四分之一水合物的药代动力学特性进行了表征。该化合物具有口服活性，表明其口服生物利用度良好。口服给药后，弗瑞司他可达到足够的全身暴露量，从而抑制肺组织中的中性粒细胞弹性蛋白酶。四分之一水合物制剂提高了稳定性和溶解度。分子量为457.03，该化合物可溶于DMSO。储存条件：粉末在-20℃下可保存长达3年，或在4℃下可保存2年；溶剂在-80℃下可保存6个月，或在-20℃下可保存1个月，均需避光防潮。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据临床前研究，弗瑞司他四水合物具有良好的毒性特征。在10-100 mg/kg的有效口服剂量下，未在大鼠中观察到明显的急性毒性。该化合物对中性粒细胞弹性蛋白酶具有高度选择性，对其他蛋白酶的选择性超过100倍，从而降低了脱靶毒性的风险。目前尚无公开的遗传毒性或致癌性数据。应采取标准的实验室安全预防措施。避免吸入细粉。使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
弗瑞司他四水合物又称ONO-6818四水合物和ONO-PO-736四水合物。该化合物由小野药品株式会社开发，旨在作为治疗急性肺损伤、慢性阻塞性肺疾病（COPD）和囊性纤维化等炎症性肺部疾病的候选药物。四水合物形式中每个弗瑞司他分子含有0.25当量水，从而提高了结晶度。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 分子式 |
C23H28N6O4.1/4H2O
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|---|---|
| 分子量 |
457.03
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| 相关CAS号 |
Freselestat;208848-19-5
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1880 mL | 10.9402 mL | 21.8804 mL | |
| 5 mM | 0.4376 mL | 2.1880 mL | 4.3761 mL | |
| 10 mM | 0.2188 mL | 1.0940 mL | 2.1880 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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