| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
In plants, Flagelin 22 targets the FLS2 receptor (flagellin-sensitive 2), a leucine-rich repeat receptor-like kinase (LRR-RLK) that recognizes a conserved 22-amino acid epitope (flg22) of bacterial flagellin. FLS2 activation initiates a signaling cascade involving BAK1 (BRI1-associated receptor kinase 1), MAPK cascades, calcium influx, and transcriptional reprogramming leading to plant innate immunity. In algae, Flagelin 22 may activate similar defense mechanisms.
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| 体外研究 (In Vitro) |
鞭毛蛋白22（FLG22）是一种由22个氨基酸组成的肽，能够触发多种植物的免疫反应，包括烟草（Nicotiana tabacum）、马铃薯（Solanum tuberosum）、番茄（Solanum lycopersicum）和拟南芥（Arabidopsis thaliana）。它是一种与鞭毛蛋白高度保守的N端部分相匹配的22个氨基酸肽。海带（Saccharina japonica）雌配子体和孢子体均能响应鞭毛蛋白22（flagelin 22）诱导氧化爆发和过敏反应（HR），表明植物和藻类可能具有相似的病原体识别系统。在含有鞭毛蛋白22、flg15、flg14和flg22D43A的培养基中培养40天后，海带雌配子体在1 μM浓度下对鞭毛蛋白22和flg15均表现出显著的生长抑制反应。经鞭毛蛋白22和鞭毛蛋白15处理的雌配子体的鲜重不足对照组的一半[1]。
体外实验表明，浓度为1-100 uM的鞭毛蛋白22 (flg22) 可诱导植物细胞培养物产生防御反应。在烟草 (Nicotiana tabacum)、马铃薯 (Solanum tuberosum)、番茄 (Solanum lycopersicum) 和拟南芥 (Arabidopsis thaliana) 中，flg22可诱导氧化爆发（活性氧的产生）、胼胝质沉积以及防御相关基因的表达。高浓度flg22还会抑制植物生长。在海带 (Saccharina japonica) 中，1 uM的flg22在40天潜伏期后，可显著抑制雌配子体和孢子体的生长，并诱导氧化爆发和过敏反应(HR)样反应。flg15、flg14和flg22D43A的活性较弱或无活性，证实了flg22表位的特异性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，鞭毛蛋白22 (flg22) 被用作植物研究中的免疫诱导剂。将flg22施用于拟南芥叶片可诱导系统获得性抗性 (SAR)，并保护其免受番茄丁香假单胞菌DC3000等致病菌的后续感染。通常采用浸润法（1-10 uM）或喷洒法将其施用于叶片。在海带等藻类中，向培养物中施用flg22 (1 uM) 可诱导防御反应，并在较长时间内（长达40天）抑制其生长。鞭毛蛋白22也用于植物细胞悬浮培养，以研究早期信号事件（例如钙离子内流、MAPK激活）。在植物体内实验中，使用无针注射器将flg22注射到叶片的细胞间隙中。在从几分钟（氧化爆发、MAPK磷酸化）、几小时（基因表达）到几天（胼胝质沉积、生长抑制）的不同时间点收获处理过的叶片。
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| 酶活实验 |
由于flg22在活细胞中通过植物受体发挥作用，因此无细胞检测方法不适用。若要使用植物膜组分进行受体结合研究：从表达FLS2的拟南芥叶片中分离微粒体膜组分。将膜组分（50 ug）与生物素标记的flg22（10-100 nM）在结合缓冲液（25 mM MES-KOH，pH 5.7，5 mM KCl，1 mM CaCl2，10 mM MgCl2，0.1% BSA）中于4℃孵育30-60分钟。加入链霉亲和素-琼脂糖珠，孵育，洗涤，并洗脱结合的蛋白。通过SDS-PAGE分离，并通过免疫印迹检测FLS2。对于竞争性实验，加入未标记的flg22（1 nM-100 uM）以确定结合亲和力。对于 MAPK 磷酸化测定（无细胞叶片提取物），用 flg22 (1 uM) 处理拟南芥叶片 0-30 分钟，快速冷冻，在液氮中研磨，提取蛋白质，并用抗磷酸化 p44/42 MAPK 抗体（可识别 MPK3 和 MPK6 等植物 MAPK）进行蛋白质印迹分析。
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| 细胞实验 |
对于植物细胞培养实验，将拟南芥细胞悬浮培养物（或叶片原生质体）培养于Murashige和Skoog (MS)培养基中。用浓度为10 nM至10 uM的Flagelin 22 TFA处理细胞5-30分钟（用于检测氧化爆发）或24小时（用于检测基因表达）。通过向培养基中加入鲁米诺（100 uM）和过氧化物酶（20 ug/mL），并在加入flg22后立即测量化学发光强度，来测定氧化爆发（活性氧）。对于胼胝质沉积实验，使用无针注射器将flg22（1 uM）浸润到拟南芥叶片中。 12-24小时后，用95%乙醇冲洗叶片，用苯胺蓝（0.01%溶于150 mM K2HPO4，pH 9.5）染色，并在紫外光下（激发波长365 nm，发射波长420 nm）观察胼胝质沉积物，其表现为黄绿色荧光斑点。使用图像分析软件定量每平方毫米叶片面积的胼胝质沉积物。基因表达分析方面，用flg22（1 uM）处理细胞或叶片圆片0-24小时，提取RNA，进行逆转录，并进行qPCR检测，以检测防御标记基因，例如FRK1（Flg22诱导的受体样激酶1）、WRKY转录因子和PR1（病程相关蛋白1）。以管家基因（例如ACTIN2或UBQ10）进行标准化。对于 MAPK 激活实验，将叶片圆片用 flg22（100 nM-1 uM）处理 0-30 分钟，提取蛋白，并使用抗磷酸化 p44/42 MAPK 抗体进行 Western blot 分析。对于生长抑制实验，将拟南芥幼苗接种于含 0.5% 蔗糖的 MS 液体培养基中，置于 24 孔板中培养，加入 flg22（1 uM）或对照，7-14 天后测量鲜重。对于藻类研究，将海带雌配子体培养于富含 Provasoli 的海水中。加入 flg22（1 uM）或对照肽（flg15、flg14、flg22D43A）。经过 40 天的潜伏期后，通过鲜重测量生长情况，并使用硝基蓝四唑 (NBT) 染色检测超氧化物，使用台盼蓝染色检测细胞死亡（过敏反应）来评估氧化爆发。
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| 动物实验 |
对于植物体内试验，使用拟南芥（生态型 Col-0）或其他植物（烟草、番茄、马铃薯）。在 22℃ 下，于短日照（8-10 小时光照）或长日照（16 小时光照）条件下培养植物 4-6 周。配制浓度为 1-10 μM 的 Flg22 TFA 水溶液（或使用 0.05% Silwet L-77 作为表面活性剂），用于浸润。免疫激活实验中，使用无针注射器将 Flg22 浸润到叶片中（对于拟南芥，注射到完全展开叶片的下表皮）。系统性免疫研究仅处理下部叶片（每株植物 3-4 片叶）。在处理后的不同时间点（0.5、1、2、4、8、12、24、48 小时），收获处理过的叶片或远端（未处理的）叶片。对于氧化爆发测定，在浸润后立即取叶片圆片（直径 6 mm），并按照细胞培养的方法测定 ROS。对于胼胝质沉积测定，在 12-24 小时后进行染色和定量。对于细菌感染测定，在 flg22 处理 24 小时后，用番茄丁香假单胞菌 DC3000（OD600=0.0002-0.002）浸润接种植物。3 天后，收获叶片圆片，匀浆，进行系列稀释后涂布于选择性培养基上，并计数菌落形成单位 (CFU) 以评估细菌生长情况。对于基因表达分析，将叶片样品冷冻于液氮中，研磨，提取 RNA，并进行 qPCR 分析。对于生长抑制测定，每天用 flg22 (1 μM) 喷洒幼苗，持续 7-10 天，并测量莲座叶直径和鲜重。为了在体内激活 MAPK，用 flg22 溶液处理叶片（通过叶柄），并在 0、5、15、30 和 60 分钟时收集组织。对于藻类实验，将海带 (Saccharina japonica) 雌配子体培养在含有 Provasoli 的海水的烧瓶中。加入 1 μM 的 flg22 和对照肽（flg15、flg14、flg22D43A），培养长达 40 天。每周更换培养基。测量生长（鲜重）、氧化爆发（NBT 染色）和细胞死亡（台盼蓝染色）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
鞭毛蛋白22 TFA的分子量为2386.50，分子式为C95H163F3N32O36。TFA盐可提高其水溶性。在植物中，大多数实验中flg22的施用浓度为1-10 μM。该肽在水溶液中于4℃下短期使用稳定，应以粉末形式储存于-20℃（3年）或4℃（2年）；溶剂储存于-80℃（6个月）或-20℃（1个月）。避光防潮保存。体外实验中，用1-10 mM的储备液溶于水或10 mM MES-KOH缓冲液（pH 5.7）中。体内浸润实验中，用水稀释至工作浓度（1-10 μM）。TFA反离子在高浓度下可能影响植物生长；对照样品应包含等浓度的TFA。该肽段对应于鞭毛蛋白的N端区域（前22个氨基酸：QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA）。该序列在多种细菌中高度保守。仅供研究使用；不得用于人类或兽医用途。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据标准化学品安全指南，Flagelin 22 TFA 通常被认为可安全用于实验室。该化合物是一种肽，在植物研究中使用的浓度（1-10 μM）下对哺乳动物无毒。它不可用于人类食用。TFA 盐可能对眼睛、皮肤和呼吸道造成轻微刺激。应采取标准实验室防护措施（手套、实验服、护目镜）。避免吸入细粉。根据机构指南处置废弃物。如不慎接触，请用肥皂和水清洗受影响区域。如接触眼睛，请用水冲洗 15 分钟。根据联合国法规，该化合物不属于危险运输物质。目前尚无遗传毒性或致癌性数据。如需大规模使用，请参阅安全数据表 (SDS)。
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| 参考文献 |
[1]. Bojun Lu, et al. Defense responses in female gametophytes of Saccharina japonica (Phaeophyta) induced by flg22-derived peptides. Journal of Applied Phycology (2016), 28(3), 1793-1801.
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| 其他信息 |
鞭毛蛋白22 TFA (flg22) 是一种由22个氨基酸组成的肽，来源于细菌鞭毛蛋白保守的N端。它是一种特征明确的微生物相关分子模式 (MAMP)，能够触发植物和藻类的模式触发免疫 (PTI)。该肽可被FLS2受体激酶识别，进而引发一系列防御反应，包括MAPK激活、氧化爆发、胼胝质沉积以及防御基因表达的诱导。flg22广泛用于植物免疫研究的阳性对照、PTI缺陷突变体的筛选以及植物-病原体互作的研究。TFA盐形式可提高其溶解度。该肽仅供研究使用，不得用于诊断或治疗用途。
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| 分子式 |
C95H163F3N32O36
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|---|---|
| 分子量 |
2386.50
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| 相关CAS号 |
Flagelin 22;304642-91-9
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~41.90 mM)
H2O :~33.33 mg/mL (~13.97 mM) |
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.4190 mL | 2.0951 mL | 4.1902 mL | |
| 5 mM | 0.0838 mL | 0.4190 mL | 0.8380 mL | |
| 10 mM | 0.0419 mL | 0.2095 mL | 0.4190 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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