| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TLR9 (Toll-like receptor 9). ODN 2216 interacts with TLR9 in the lysosomes of CD4+ T cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs), activating feedback-dependent signaling pathways through the IRAK4/IRF7 axis. This interaction induces robust type I interferon responses, particularly IFN-alpha and IFN-beta, leading to strong Th1-like immune activation and potent CD8+ T-cell responses. As a Class A CpG ODN, ODN 2216 preferentially activates pDCs and induces high levels of IFN-alpha, distinguishing it from other CpG ODN classes that primarily stimulate B cells. The FITC label does not interfere with TLR9 binding specificity.
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| 体外研究 (In Vitro) |
ODN 2216 通过 IRAK4/IRF7 轴诱导 I 型干扰素（IFN-α、IFN-β）、IL-6 和 TGF-β 的产生，同时提高细胞内 ATP 水平。它不仅能诱导 CD4+ T 细胞分化为抗炎性 Th3 样调节表型，从而抑制自身增殖，还能增强 CD8+ T 细胞介导的针对靶细胞的特异性细胞毒性。在乳腺癌细胞模型中，ODN 2216 可增强 CD8+ T 细胞对表达乳球蛋白 A 的癌细胞的细胞毒性。FITC 标记的 ODN 2216 保留了完整的生物活性，因此适用于平行摄取和功能研究。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，ODN 2216 可诱导强烈的 Th1 样免疫激活，其特征是 I 型干扰素（IFN-α 和 IFN-β）分泌旺盛以及 CD8+ T 细胞反应激活。在系统性红斑狼疮小鼠模型中，ODN 2216 的给药可调节免疫反应并影响疾病进展。在肿瘤模型中，它可增强抗原特异性 CD8+ T 细胞反应，从而促进抗肿瘤免疫。该化合物还能诱导浆细胞样树突状细胞 (pDC) 的成熟和激活，进而引发下游细胞因子级联反应。给药后可通过 ELISA 检测血浆细胞因子水平以确认免疫激活。静脉或皮下注射 FITC 标记的 ODN 2216 后，可通过测量淋巴器官中的荧光强度来追踪其组织分布。
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| 酶活实验 |
对于非细胞TLR9结合实验，可采用标准的基于ELISA的结合实验。简而言之，将重组人TLR9蛋白固定在96孔板上，4℃过夜。用1% BSA的PBS溶液封闭后，加入不同浓度的FITC标记的ODN 2216（0-1000 nM），室温孵育2小时。洗涤去除未结合的ODN。使用抗FITC-HRP偶联物和TMB底物检测结合的FITC标记的ODN，并在450 nm处测量吸光度。或者，也可以使用SPR：将TLR9固定在CM5芯片上，然后流过FITC标记的ODN 2216以测量结合亲和力（KD）。通过将TLR9与标记的ODN孵育并测量荧光偏振，可以评估基于荧光的直接结合。
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| 细胞实验 |
为了研究细胞摄取和TLR9激活，将人外周血单核细胞（PBMC）、浆细胞样树突状细胞（pDC）或表达TLR9的HEK293报告细胞接种于96孔板中（2-5 × 10^5 个细胞/孔），培养基为含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基。用浓度范围为0.1-10 uM的FITC标记的ODN 2216处理细胞4-24小时。通过共聚焦激光扫描显微镜（激发波长495 nm，发射波长520 nm）观察细胞内定位，或通过流式细胞术进行定量分析，以评估细胞摄取情况。通过收集上清液，并使用ELISA法定量检测IFN-α、IL-6和TNF-α，来评估功能激活情况。为了验证 TLR9 特异性，在 TLR9 拮抗剂 ODN 2088 存在的情况下进行检测。可以进行活细胞成像来追踪内体运输动态。
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| 动物实验 |
在体内分布研究中，动物（通常为小鼠）接受单次静脉（尾静脉）、腹腔或皮下注射FITC标记的ODN 2216，剂量范围为10-50 mg/kg。在注射后不同时间点（0.5、2、6、12、24、48小时），通过心脏穿刺采集血液，并收集淋巴器官（脾脏、淋巴结）、肝脏和肾脏。将组织匀浆制备于裂解缓冲液中，并使用荧光酶标仪测量FITC荧光（激发波长485 nm，发射波长528 nm）。对于组织学分析，将冷冻组织切片用DAPI复染，并通过荧光显微镜观察，以确定细胞在淋巴滤泡和其他免疫细胞器内的定位。通过 ELISA 检测血浆细胞因子水平（IFN-α、TNF-α、IL-6），以将摄取与功能性免疫激活联系起来。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
A类CpG寡核苷酸（如ODN 2216）由于其部分磷酸二酯骨架，在全身给药后血浆清除迅速，在小鼠体内的血浆半衰期约为30-60分钟。该化合物主要分布于淋巴组织，包括脾脏、淋巴结和骨髓，以及肝脏和肾脏，这归因于网状内皮系统的摄取。硫代磷酸酯修饰的聚G尾赋予其部分核酸酶抗性，与未修饰的寡核苷酸相比，可延长其组织停留时间。相反，中心磷酸二酯回文序列可促进内体快速酸化并激活TLR9。被浆细胞样树突状细胞（pDC）摄取后，ODN 2216在早期内体中积累，然后重新分布到溶酶体区室，TLR9就位于该区室。尿液排泄是ODN代谢物的主要清除途径。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在临床前毒性评估中，ODN 2216 在免疫调节剂量（小鼠 10-50 mg/kg）下通常耐受性良好。高剂量可能引起细胞因子介导的毒性，包括发热、低血压和短暂性淋巴细胞减少，这与 TLR9 激动剂类药物的效应一致。在重复给药研究中，观察到轻度肝细胞空泡化和肝转氨酶短暂升高，这归因于免疫刺激而非直接肝毒性。在治疗剂量下，尚未报道 A 类 CpG ODN 具有遗传毒性或致癌性。FITC 标记不会引入除母体 ODN 之外的额外毒性。建议在体内实验中仔细调整剂量，以平衡免疫激活和耐受性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
FITC标记的ODN 2216是一种研究工具，用于研究CpG ODN的细胞摄取、胞内转运至含TLR9的内溶酶体区室以及TLR9介导的信号传导。未标记的ODN 2216作为一种人特异性TLR9激动剂，广泛应用于免疫学研究，用于研究pDC活化、I型干扰素生物学以及疫苗佐剂的开发。它也用于乳腺癌和系统性红斑狼疮的研究。ODN 2216尚未获得用于人体治疗的监管批准；它是一种研究性化合物。FITC标记使得利用共聚焦显微镜和流式细胞术等荧光技术可以实时观察和定量ODN的分布和细胞摄取。
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| 相关CAS号 |
ODN 2216;332437-00-0;Biotin-labeled ODN 2216 sodium
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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