| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DATPT targets the protein-protein interaction (PPI) between sorting nexin 9 (SNX9) and p47phox (also known as NCF1, neutrophil cytosolic factor 1). SNX9 is a member of the sorting nexin family involved in endosomal trafficking. p47phox is a regulatory subunit of the NADPH oxidase (NOX2) complex, which is responsible for superoxide production in phagocytes. By blocking the SNX9-p47phox interaction in the endosome, DATPT prevents the assembly and activation of the NOX2 complex, leading to reduced reactive oxygen species (ROS) production. Additionally, DATPT inhibits the downstream production of inflammatory cytokines, such as TNF-alpha, IL-6, and IL-1beta. The compound may also target GTP cyclohydrolase I (GTPCH1) to reduce BH4 (tetrahydrobiopterin) levels, impacting nitric oxide production and monoamine metabolism.
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| 体外研究 (In Vitro) |
DATPT在体外抑制SNX9-p47phox相互作用，这已通过细胞裂解液中的共免疫沉淀(Co-IP)和下拉实验得到证实。通过阻断这种内体蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)，DATPT抑制活性氧(ROS)的产生。它还能抑制脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞中促炎细胞因子（包括TNF-α、IL-6和IL-1β）的产生。DATPT降低ATP的产生，这可能是由于ROS介导的线粒体损伤减少或直接影响能量代谢所致。除抗炎作用外，DATPT还具有抗菌活性（机制未明）。该肽模拟物在抗炎浓度下对哺乳动物细胞系显示出较低的细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内实验中，DATPT 在盲肠结扎穿刺 (CLP) 诱导的小鼠脓毒症模型中展现出显著的治疗效果。该模型是临床上与多微生物脓毒症和脓毒性休克相关的模型。在 CLP 后 1 小时腹腔注射 DATPT（剂量为 10-50 mg/kg）可显著降低血清中促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的水平，减少全身氧化应激（丙二醛，MDA），并提高存活率（从载体对照组的约 20% 提高到治疗组小鼠的约 70-80%）。组织学（H&E 染色）和器官功能指标（BUN、肌酐、ALT、AST）评估显示，DATPT 还减轻了脓毒症小鼠的急性肺损伤 (ALI) 和急性肾损伤 (AKI)。这些结果表明，DATPT 是一种有前景的脓毒症治疗先导化合物。
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| 酶活实验 |
利用重组蛋白，可以在无细胞体系中评估SNX9和p47phox之间的蛋白-蛋白相互作用。重组GST标签的SNX9和His标签的p47phox（或p47phox衍生肽）在大肠杆菌中表达，并通过亲和层析纯化。结合实验采用谷胱甘肽-琼脂糖珠进行。将GST-SNX9固定在结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1 mM DTT、蛋白酶抑制剂）中的谷胱甘肽珠上。将His-p47phox（1-5 uM）与固定的GST-SNX9（0.5 uM）在4℃下孵育2小时，同时加入递增浓度的DATPT（0.1-100 uM）。将磁珠洗涤后，用SDS上样缓冲液洗脱结合的蛋白质，通过SDS-PAGE分离，并用抗His抗体进行Western印迹检测。通过密度扫描法测定抑制SNX9-p47phox相互作用的IC50值。或者，可以开发一种基于ELISA的蛋白质-蛋白质相互作用检测方法：封闭包被重组SNX9的酶标板孔，加入生物素标记的p47phox（有或无DATPT）。用链霉亲和素-HRP和比色底物检测结合的p47phox。计算破坏PPI的IC50值。表面等离子共振（SPR）也可用于测量DATPT与SNX9或p47phox的单独结合，但其主要机制是破坏PPI。
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| 细胞实验 |
为评估DATPT，可在小鼠巨噬细胞系（例如RAW 264.7）或原代腹腔巨噬细胞中进行细胞学实验。细胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。DATPT溶解于DMSO中，并用培养基稀释（最终DMSO浓度≤0.1%）。为测定活性氧（ROS），将细胞接种于96孔黑色壁板中（1 × 10⁵个细胞/孔）。细胞用不同浓度的DATPT（0、1、10、50 uM）预处理1小时，然后用脂多糖（LPS，100 ng/mL）或佛波醇肉豆蔻酸酯（PMA，100 ng/mL）刺激30分钟。加入荧光探针 DCFH-DA（2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯，10 uM），使用微孔板读数仪每 10 分钟测量一次荧光强度（激发/发射波长 485/535 nm），持续 60-90 分钟。计算曲线下面积 (AUC) 作为总 ROS 生成量的指标。对于细胞因子测定，细胞先用 DATPT 预处理 1 小时，然后用 LPS（100 ng/mL）刺激 6-24 小时。收集培养上清液，并通过 ELISA 法测定 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 的水平。采用 MTT 法评估细胞活力，以确保观察到的效应并非由细胞毒性引起。确定细胞因子抑制的 IC50 值。为了通过共免疫沉淀 (Co-IP) 实验确认细胞内蛋白质-蛋白质相互作用 (PPI) 的破坏，将细胞用 DATPT (10-50 uM) 处理 6 小时，然后在 Co-IP 缓冲液中裂解。使用抗 SNX9 抗体对 SNX9 进行免疫沉淀，并通过蛋白质印迹法检测 p47phox 的共沉淀。DATPT 处理降低了与 SNX9 共沉淀的 p47phox 的量。
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| 动物实验 |
本研究采用盲肠结扎穿刺（CLP）脓毒症模型，在雄性C57BL/6小鼠（8-12周龄）中评估DATPT的体内疗效。小鼠用异氟烷（2-3%异氟烷/氧气）麻醉。在腹部正中做一个小切口，将盲肠翻出，并在回盲瓣远端用4-0丝线结扎盲肠50%。用21号针头在结扎的盲肠上穿刺两次，挤出少量粪便以确保通畅。将盲肠复位，缝合切口。术后立即腹腔注射1 mL温生理盐水进行液体复苏。DATPT溶于无菌生理盐水或含5% DMSO的PBS缓冲液中。盲肠结扎穿孔术（CLP）后1小时，小鼠腹腔注射DATPT，剂量分别为0、10、25或50 mg/kg（100 μL）。假手术组（不结扎，不穿刺）作为对照。生存研究中，每6小时监测小鼠7天。采用Kaplan-Meier分析绘制生存曲线，并使用log-rank检验比较各组。机制研究中，分别于CLP后6、12和24小时采集血液；分离血清；并通过ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β和HMGB1的水平。CLP后24小时，处死小鼠，并取出肺、肾和肝脏。组织经10%福尔马林固定、石蜡包埋、切片，并进行苏木精-伊红（H&E）染色。损伤的病理评分（肺部：水肿、中性粒细胞浸润、肺泡间隔增厚；肾脏：肾小管坏死；肝脏：坏死和炎症浸润）采用盲法进行。组织匀浆中丙二醛 (MDA) 和谷胱甘肽 (GSH) 的测定用于评估氧化应激。髓过氧化物酶 (MPO) 活性的测定用于量化中性粒细胞浸润。DATPT 治疗 (25 mg/kg) 可显著降低死亡率（存活率 70% vs. 对照组 20%，p < 0.01），降低血清细胞因子水平，减轻组织氧化应激，并改善器官组织学。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
已发表的文献中尚未对DATPT的药代动力学进行全面表征。DATPT是一种分子量为495.06 g/mol的肽模拟小分子，由于其快速的肾清除和蛋白水解降解，其在血浆中的半衰期可能较短（t½ < 2 h）。该化合物可溶于DMSO（浓度最高可达50 mg/mL），并可配制成腹腔注射剂。鉴于在盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症模型中腹腔注射后观察到的疗效，推测该化合物能被腹腔充分吸收。目前尚无关于其口服生物利用度、血浆蛋白结合率、分布容积、代谢或排泄的数据。该化合物可能经肝脏代谢（CYP450），主要通过尿液和粪便排泄。与天然肽相比，其肽模拟结构可能赋予其一定的抗蛋白酶降解稳定性，但预计其作用时间不长。目前尚无人体药代动力学数据。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
DATPT在动物模型中表现出良好的安全性。在盲肠结扎穿孔（CLP）脓毒症模型中，腹腔注射剂量高达50 mg/kg时耐受性良好，与载体对照组小鼠相比，未观察到额外的死亡率或毒性。目前尚无关于DATPT急性毒性（LD50）、慢性毒性、遗传毒性或器官特异性毒性的研究报道。根据观察到的耐受性，其LD50（腹腔注射）可能大于200 mg/kg。DATPT被认为是一种潜在的脓毒症治疗药物，且在主要文献中未报道过重大不良反应。由于DATPT的作用机制是通过减少活性氧（ROS）和炎症细胞因子，因此它可能对组织具有保护作用而非毒性作用。处理粉末时应采取标准的实验室安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。避免吸入、皮肤接触和摄入。DATPT仅供研究使用，未获准用于人类或兽医治疗。
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| 参考文献 |
[1]. Lee D, et al. Discovery of Mycobacterium tuberculosis Rv3364c-Derived Small Molecules as Potential Therapeutic Agents to Target SNX9 for Sepsis. J Med Chem. 2022;65(1):386-408.
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| 其他信息 |
SNX9（分选连接蛋白9）是一种内体蛋白，参与膜转运和肌动蛋白聚合。p47phox（NCF1，中性粒细胞胞质因子1）是NADPH氧化酶（NOX2）复合物的关键调节亚基，在呼吸爆发期间，该复合物在吞噬细胞中产生超氧阴离子，这对于抗菌防御至关重要，但也会导致脓毒症和炎症性疾病中的组织损伤。SNX9和p47phox之间的相互作用发生在内体中，并且是NOX2激活所必需的。使用DATPT阻断这种蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）可以阻止NOX2的激活，从而减少活性氧（ROS）的产生，并抑制导致脓毒性休克和器官衰竭的过度炎症反应。DATPT是通过筛选方法发现的，该方法以结核分枝杆菌衍生的肽（Rv3364c）为起始点，随后优化得到一种肽模拟小分子。该化合物能够同时抑制活性氧（ROS）和炎症细胞因子，使其成为一种潜在的双效治疗药物。脓毒症是一种危及生命的疾病，由宿主对感染的反应失调引起，导致器官功能障碍。目前尚无针对脓毒症的特效小分子疗法；治疗主要以支持疗法为主（输液、血管加压药、抗生素）。DATPT通过靶向SNX9-p47phox相互作用，代表了一种新的脓毒症干预机制。该化合物还通过抑制GTPCH1（GTP环化酶I）来研究其对BH4（四氢生物蝶呤）代谢的影响。BH4是硝酸合酶和芳香族氨基酸羟化酶的辅助因子。通过降低BH4水平，DATPT可能还能调节脓毒症中失调的一氧化氮生成。DATPT仅供研究使用；它并非FDA批准的药物。
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| 分子式 |
C24H39CLN6O3
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|---|---|
| 分子量 |
495.06
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0200 mL | 10.0998 mL | 20.1996 mL | |
| 5 mM | 0.4040 mL | 2.0200 mL | 4.0399 mL | |
| 10 mM | 0.2020 mL | 1.0100 mL | 2.0200 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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