| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
DAPK (death-associated protein kinase) is a calcium/calmodulin (CaM)-dependent serine/threonine protein kinase that plays a key role in apoptosis, autophagy, and tumor suppression. DAPK Substrate Peptide TFA is not a drug and does not bind to a receptor; rather, it is a peptide sequence recognized and phosphorylated by DAPK. The peptide substrate contains specific amino acid residues (usually an arginine in the -3 position and a hydrophobic residue at the phosphorylation site) that fit into the catalytic pocket of DAPK. DAPK phosphorylates the substrate peptide at a serine or threonine residue, and the reaction can be quantified in vitro.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
该底物肽本身不具有固有的生物活性；其用途在于作为体外测定DAPK酶活性的工具。它可用于测定DAPK的动力学参数（Km、Vmax），筛选DAPK抑制剂或激活剂，以及测定细胞裂解液或免疫沉淀物中的DAPK活性。该肽与DAPK的Km值为9 uM，表明其对活性位点具有中等偏高的亲和力。TFA盐形式用作激酶活性测定中的标准底物。该底物肽不具有其他相关的体外“活性”。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
由于DAPK底物肽TFA是一种研究工具，因此不用于体内给药。它仅用于体外激酶活性测定，不具备体内治疗活性。该底物肽本身如果注射，会被蛋白酶迅速降解，不会产生显著的生物学效应。其作用仅限于用于研究DAPK功能的生化和无细胞实验。目前尚未进行过单独使用该肽的体内动物实验；它仅用作试剂。
|
| 酶活实验 |
DAPK底物肽TFA用于体外激酶活性测定，所用DAPK为纯化的重组DAPK（全长或催化结构域）。DAPK活性测定的标准方案如下：配制激酶反应缓冲液，其中包含50 mM HEPES-NaOH（pH 7.5）、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、1 mM DTT、0.1 mM CaCl2、0.5 uM钙调蛋白（CaM）和50 uM ATP（包括1-10 uCi的γ-32P-ATP或33P-ATP）。将DAPK底物肽（序列衍生自KKALRRQE FVA S，不同供应商的序列可能有所不同）加入反应混合物中，浓度范围为0至200 uM（通常为0、10、25、50、100和200 uM）。反应通过向反应体系中加入DAPK（10-50 ng）启动，最终反应体积为25-50 uL。在30℃孵育15-30分钟后，加入10%三氯乙酸（TCA）或点样至P81磷酸纤维素滤纸上终止反应。对于P81滤纸法，取20 uL反应混合物点样至1 cm2的P81滤纸片上。滤纸片用75 mM磷酸溶液洗涤3次（每次10分钟），再用丙酮洗涤1次，然后干燥。放射性（掺入的32P）通过液体闪烁计数法测定。掺入的磷酸盐量（pmol）根据ATP的比活度计算。动力学参数（Km、Vmax）通过非线性回归（例如使用GraphPad Prism软件）拟合米氏方程（反应速率与底物浓度的关系）获得。对于底物肽，测得其 Km 值为 9 uM。也可计算其周转数 (kcat)。为测定复杂生物样品（例如细胞裂解液）中的 DAPK 活性，可在 DAPK 免疫沉淀后使用该底物肽。对于抑制剂筛选，在加入底物肽之前，先将测试化合物与 DAPK 预孵育 10 分钟。然后计算 DAPK 抑制剂的 IC50 值。
|
| 细胞实验 |
由于DAPK底物肽并非药物，因此不用于标准的细胞活力或增殖检测。然而，它可用于基于细胞裂解液的激酶活性检测。在一个典型的实验方案中，将细胞（例如HeLa细胞、HEK-293细胞或癌细胞）培养于10 cm培养皿中（汇合度为80-90%）。用冰冷的PBS洗涤细胞，然后在RIPA裂解缓冲液或非变性裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠、0.1% SDS、1 mM DTT、1 mM PMSF和蛋白酶抑制剂）中裂解细胞。裂解液在4℃下以13,000 rpm离心10分钟以去除细胞碎片。蛋白质浓度通过BCA法测定。每次反应使用 50-200 ug 细胞裂解液。或者，使用特异性抗 DAPK 抗体和蛋白 A/G 琼脂糖珠从细胞裂解液中免疫沉淀 DAPK。免疫沉淀的琼脂糖珠用激酶缓冲液洗涤 2-3 次。然后按照“酶/受体结合”部分所述进行 DAPK 活性测定，使用 DAPK 底物肽 TFA (50-200 uM) 和 γ-32P-ATP (50 uM，0.5-1 uCi/反应)。反应终止后，将混合物点样至 P81 滤纸上，洗涤后计数。活性以每分钟每毫克细胞裂解液（或每个免疫沉淀物）掺入的磷酸盐的皮摩尔数表示。为了控制 DAPK 的含量，使用相同的细胞裂解液进行平行实验，通过 Western blot 检测 DAPK 蛋白水平。 DAPK底物肽也用于无需放射性的基于FRET或基于发光（ADP-Glo）的激酶活性测定。对于ADP-Glo测定，将10 uL激酶反应体系（40 mM Tris pH 7.5、20 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、50 uM ATP、200 uM底物肽和50 ng DAPK）孵育60分钟。然后加入10 uL ADP-Glo试剂，孵育40分钟，再加入20 uL激酶检测试剂，孵育30分钟，最后读取发光值。发光信号与ADP浓度（激酶活性）成正比。DAPK底物肽TFA在此测定中用作标准底物。
|
| 动物实验 |
该肽是一种实验室试剂，不用于动物疗效研究。然而，它可用于检测从疾病动物模型（例如，肿瘤异种移植、缺血再灌注损伤、神经退行性疾病模型）中获取的组织中DAPK的体外活性。典型的体外实验方案是：处死小鼠或大鼠，迅速切取目标组织（例如，脑、肝、肿瘤），液氮速冻后储存于-80℃。将冷冻组织用组织研磨器或超声破碎仪在裂解缓冲液中研磨匀浆。离心澄清裂解液。使用抗DAPK抗体从裂解液（500-1000 μg总蛋白）中免疫沉淀DAPK。洗涤免疫沉淀物，并按照所述方法，使用DAPK底物肽TFA和32P-ATP测定DAPK活性。通过比较不同处理组（例如，药物处理组与载体组）的结果，确定治疗对体内DAPK活性的影响。在药理学研究中，可在组织采集前向动物施用测试化合物（假定的DAPK抑制剂或激活剂）（例如，通过灌胃或腹腔注射），然后使用底物肽在体外测量DAPK活性。这种方法将分子效应（DAPK活性的变化）与体内治疗联系起来。活体动物实验中不使用肽本身。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
由于该肽仅作为体外研究底物，其药代动力学研究意义不大。它不会进入体循环，也没有治疗用途。三氟乙酸（TFA）反离子可提高该肽的溶解度和固态稳定性，使其可用作实验室试剂。该肽的分子量约为1692.84 Da。在浓度高达10 mg/mL时，该肽可溶于水或PBS缓冲液。配制储备液时，通常将该肽溶于水或50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）中，并分装后储存于-20℃或-80℃，以避免反复冻融。TFA盐形式的肽在-20℃避光防潮干燥条件下可稳定保存2年。除标准实验室安全操作规程外，该肽无需特殊处理。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
DAPK底物肽TFA是一种合成肽（TFA盐），仅用于研究用途。它不适用于人类或兽医用途。该肽的毒理学特性与其他任何基于肽的实验室试剂并无差异。TFA的抗衡离子是三氟乙酸根阴离子，其在最终产品中的残留量（通常<5%）被认为是安全的。急性毒性可忽略不计；由于该化合物不用于体内给药，因此LD50不适用。操作时应采取标准预防措施：佩戴手套、实验服和护目镜。避免吸入粉末，并避免皮肤接触（尽管刺激风险较低）。该化合物目前尚未发现具有致突变性、致癌性或发育毒性。如果意外摄入或注射大量（可能性很小），应立即就医。处置时，请遵循机构关于非危险化学废物的处理指南。为保持稳定性，本产品应储存于-20℃的密封干燥容器中，避光防潮。DAPK底物肽TFA仅供研究使用。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
死亡相关蛋白激酶 (DAPK) 是一种受钙离子/钙调蛋白调控的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是细胞凋亡（程序性细胞死亡）的正向介质。DAPK 参与多种细胞过程，包括细胞凋亡、自噬、细胞骨架重组和肿瘤抑制。由于启动子高甲基化，许多人类癌症（例如非小细胞肺癌、乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌）中均观察到 DAPK 表达或活性降低，这与预后不良和转移潜能相关。因此，DAPK 被认为是一种肿瘤抑制因子。DAPK 底物肽来源于已知的 DAPK 磷酸化位点，通常是肌球蛋白轻链 (MLC) 或高亲和力合成肽。底物序列通常为 RRFS*V（其中 S* 为可磷酸化的丝氨酸）或类似序列。研究级肽的具体序列可能因生产商而异，但其共同结构基序基于MLC磷酸化位点。该肽的Km值为9 μM，这是丝氨酸/苏氨酸激酶肽底物的典型值。三氟乙酸（TFA）盐形式用于将肽从固相合成树脂中转化为稳定、可溶且可结晶的粉末。DAPK底物肽用于DAPK活性测定，用于筛选DAPK抑制剂（例如，用于癌症治疗，因为DAPK的重新激活可能抑制肿瘤生长）或激活剂（用于神经保护）。它也用于旨在调节DAPK活性的药物研发项目。该化合物仅供研究使用。
|
| 分子式 |
C72H116F3N25O19
|
|---|---|
| 分子量 |
1692.84
|
| 相关CAS号 |
DAPK Substrate Peptide;386769-53-5
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~50 mg/mL (~29.54 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.5907 mL | 2.9536 mL | 5.9072 mL | |
| 5 mM | 0.1181 mL | 0.5907 mL | 1.1814 mL | |
| 10 mM | 0.0591 mL | 0.2954 mL | 0.5907 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
