Cy3-N3

目录号: V77126 纯度: ≥98%
Cy3-N3 是一种 Cy3 叠氮化物荧光染料,用于检测肽、蛋白质和寡核苷酸中的氨基。
Cy3-N3 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Cy3-N3 是一种 Cy3 叠氮化物荧光染料,用于肽、蛋白质和寡核苷酸中的氨基。Cy3-N3 是一种点击化学试剂。它含有叠氮 (N3) 基团,可以与带有炔基的化合物发生 CuAAc 反应(铜催化叠氮-炔环加成反应)。对于带有 BCN 或 DBCO 基团的化合物,Cy3-N3 也可能发生 SPAAC 反应(应变促进的炔-叠氮环加成反应)。
Cy3-N3 是一种荧光染料(花菁3-叠氮化物),含有叠氮官能团(-N3)。它是一种点击化学试剂,含有叠氮部分,可以与含炔烃的化合物进行铜催化的叠氮-炔烃环加成反应(CuAAc),或与含BCN/DBCO的分子进行应变促进的炔烃-叠氮环加成反应(SPAAC)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cy3-N3 does not bind to a biological target; it is a chemical labeling reagent. The azide group (-N3) is a bioorthogonal functional group that reacts specifically with alkynes via click chemistry. The Cy3 fluorophore provides orange fluorescence (Ex/Em ~550/570 nm) for detection. This approach allows labeling of biomolecules without interfering with their native functions.
体外研究 (In Vitro)
在体外,Cy3-N3 可用于通过点击化学对生物分子(肽、蛋白质、寡核苷酸、碳水化合物)进行荧光标记。对于 CuAAc 反应,将炔基标记的分子与 Cy3-N3(1-5 当量)在含有 CuSO4(1 mM)和抗坏血酸钠(2-5 mM)的 PBS 缓冲液(pH 7.4)中,于 37℃ 孵育 1-12 小时。对于 SPAAC 反应,将 Cy3-N3 与 DBCO 或 BCN 偶联的分子在 PBS 缓冲液(pH 7.4)中于 37℃ 孵育 2-4 小时。标记产物经透析或 HPLC 纯化后用于后续实验。
体内研究 (In Vivo)
CY3-N3 不直接用于体内活性检测,而是通过点击化学反应标记靶向配体。Cy3 标记的缀合物(例如抗体、肽)可用于动物模型,进行可见光范围(激发/发射波长约为 550/570 nm)的荧光成像。然而,由于组织吸收率较高且在较短波长下存在自发荧光,Cy3 与近红外染料(例如 Cy5、Cy7)相比,不太适合深层组织成像。
酶活实验
在体外点击化学偶联反应中,Cy3-N3 可用于无酶或 CuAAc 催化的反应。CuAAc 的标准操作流程如下:将 1 umol 炔基功能化的生物分子溶解于 200 uL 脱气 PBS 缓冲液(pH 7.4,0.2 M)中。加入 1-1.5 umol Cy3-N3(溶于 10-20 uL DMSO)。新鲜配制 100 mM 抗坏血酸钠溶液和 10 mM CuSO4 溶液。向反应混合物中加入 20 uL 100 mM 抗坏血酸钠溶液(终浓度 10 mM)和 20 uL 10 mM CuSO4 溶液(终浓度 1 mM)(最终体积 200-250 uL)。在惰性气氛(N2 或 Ar2)下,于 37℃ 孵育 4-12 小时,并轻柔摇动。对于SPAAC反应,将1 umol DBCO或BCN偶联分子溶解于200 uL PBS缓冲液(pH 7.4)中。加入1-1.2 umol Cy3-N3(溶于10-20 uL DMSO)。于37℃孵育2-4小时。通过薄层色谱(硅胶,10%甲醇/二氯甲烷)或液相色谱-质谱联用(LC-MS)监测偶联反应。采用尺寸排阻色谱(例如Sephadex G-25)或透析(截留分子量3.5-10 kDa)进行纯化。通过测量550 nm(Cy3)和280 nm(蛋白质)处的吸光度来确定标记效率。
细胞实验
对于基于细胞的检测,Cy3标记的探针可用于活细胞或固定细胞成像。将细胞(例如,8孔板中每孔5×10⁴个细胞)接种并培养过夜。向培养基中加入Cy3标记的抗体或肽(1-10 ug/mL),并在37℃下孵育1-4小时。用PBS洗涤细胞(3次)。对于活细胞成像,加入新鲜培养基,并立即使用带有Cy3滤光片(激发波长540-560 nm,发射波长570-590 nm)的荧光显微镜进行成像。对于固定细胞成像,用4%多聚甲醛固定15分钟,洗涤,用Hoechst 33342或DAPI对细胞核进行复染,封片,然后成像。对于抗体结合和内化研究,可考虑使用共聚焦显微镜进行z轴扫描。
动物实验
在体内动物研究中,Cy3标记的偶联物通常通过静脉注射或瘤内注射给药于小鼠。然而,由于Cy3的荧光位于可见光范围内(激发/发射波长约为550/570 nm),其应用通常仅限于组织穿透性要求较低的皮下或表面肿瘤。典型剂量:每只小鼠50-100 μg Cy3标记抗体,溶于100-200 μL PBS缓冲液中。体内荧光成像使用激发波长为540-560 nm、发射波长为570-590 nm的成像系统进行。生物分布可通过安乐死后进行离体器官成像来评估。对于深层组织成像,通常优先选择近红外染料(如Cy5、Cy7)而非Cy3。
药代性质 (ADME/PK)
Cy3-N3 的分子量为 712.88 Da。该化合物为固体,应储存于 -20℃,避光防潮。粉末在 -20℃ 下可稳定保存长达 3 年,在 4℃ 下可稳定保存长达 2 年。DMSO 储备液(10-20 mM)应储存于 -80℃ 下长达 6 个月,或在 -20℃ 下长达 1 个月,并应避光以防止光漂白。Cy3-N3 可溶于 DMSO(例如,10-50 mg/mL),在水中溶解度中等(磺化形式;非磺化形式需要有机溶剂)。用于体内制剂的常用溶剂包括 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% 生理盐水,或 DMSO:玉米油 (1:9)。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Cy3-N3 在典型的研究浓度(用于偶联反应的微摩尔至低毫摩尔浓度范围)下被认为无毒。应遵循标准的实验室安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜;避免吸入粉尘。本产品仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。目前尚未有明显的毒性报告。对于体内研究,应进行标准的安全性监测(体重、行为)。
参考文献

[1]. A combination of metabolic labeling and 2D-DIGE analysis in response to a farnesyltransferase inhibitor facilitates the discovery of new prenylated proteins.

其他信息
Cy3-N3(叠氮化花菁3)是一种用于点击化学的荧光标记试剂。主要特点:(1) Cy3荧光团,激发/发射波长最大值约为550/570 nm,发出明亮的橙红色荧光;(2) 叠氮基团,可通过CuAAc或SPAAC进行生物正交偶联;(3) 磺化衍生物具有优异的水溶性。常见应用包括寡核苷酸(例如,用于FISH)、肽、蛋白质(例如,用于免疫荧光)和小分子的标记。该化合物也用于代谢标记研究(例如,通过含叠氮基团的糖进行聚糖标记)。纯度通常≥98%(HPLC测定)。CAS号:1621101-43-6。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C34H44N6O7S2
分子量
712.88
外观&性状
Brown to black solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4028 mL 7.0138 mL 14.0276 mL
5 mM 0.2806 mL 1.4028 mL 2.8055 mL
10 mM 0.1403 mL 0.7014 mL 1.4028 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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