Cy 5 amine TFA (Cyanine5 amine TFA)

目录号: V77127 纯度: ≥98%
Cy 5 amine (Cyanine5 amine) TFA 是一种荧光染料。
Cy 5 amine TFA (Cyanine5 amine TFA) 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
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Other Forms of Cy 5 amine TFA (Cyanine5 amine TFA):

  • Cyanine5 amine HCl
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Cy5胺(花菁5胺)TFA是一种荧光染料。Cy5胺TFA可用于制备Cy5.5标记的化合物或聚合物,用于细胞过程和药物吸收的成像。
氰胺三氟乙酸盐(Cy5 amine TFA)是一种含有伯胺官能团(-NH2)的远红外荧光染料。三氟乙酸盐(TFA)形式可提高其溶解度和稳定性。氰胺5(Cy5)是一种明亮的远红外荧光染料,其激发/发射最大值约为650/670 nm,适用于细胞过程和药物摄取的成像。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cy5 amine TFA does not bind to a biological target; it is a chemical labeling reagent. The primary amine (-NH2) group can react with carboxyl groups via carbodiimide-mediated (EDC/NHS) chemistry to form stable amide bonds, or with activated ester groups (e.g., NHS esters) for covalent conjugation to proteins, peptides, or other biomolecules. The Cy5 fluorophore provides far-red fluorescence for detection.
体外研究 (In Vitro)
在体外,Cy5胺TFA可用于制备Cy5标记的化合物或聚合物,这些化合物或聚合物可用于细胞过程和药物转运的成像。伯胺基团能够通过标准的EDC/NHS偶联化学方法与含有羧基的分子进行偶联。典型步骤:将含羧基的分子(1 umol)溶解于200 uL MES缓冲液(pH 5.5-6.0)中。加入2-5当量的EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)活化羧基,反应15-30分钟。加入1-2当量的Cy5胺TFA(溶于DMSO或水中),并将pH值调节至7.2-7.5。室温孵育2-4小时或在4℃下过夜。标记产物经透析或高效液相色谱纯化后,可用于成像应用。
体内研究 (In Vivo)
Cy5胺TFA不直接用于体内活性研究。它通过胺-羧基偶联化学方法标记靶向配体(例如抗体、肽、纳米颗粒)。Cy5标记的偶联物可用于动物模型进行远红外荧光成像。与Cy3相比,Cy5具有更深的组织穿透深度(可达数毫米),但不如Cy7等近红外染料。本产品适用于皮下肿瘤的体内成像和生物分布研究。
酶活实验
体外标记含羧基分子的EDC/NHS化学方法:(1) 将1 umol含羧基的生物分子(例如,透明质酸、脂肪酸或含游离-COOH的肽)溶解于200 uL 0.1 M MES缓冲液(pH 5.5-6.0)中。(2) 加入2-5 umol EDC和2-5 umol NHS(溶于水)。混合后,室温孵育15-30分钟以活化羧基。(3) 向活化混合物中加入1-2 umol Cy5胺TFA(溶于20 uL DMSO或50 uL水中)。(4) 加入50-100 uL 0.2 M磷酸钠缓冲液(pH 7.5)调节pH至7.2-7.5。 (5) 室温下轻柔摇晃孵育 2-4 小时,或在 4℃ 下过夜。(6) 通过透析(使用合适的截留分子量)或尺寸排阻色谱法(例如 Sephadex G-25 柱)纯化标记产物。(7) 通过测量 650 nm(Cy5)和 280 nm(蛋白质,如果适用)处的吸光度来确定标记程度。对于使用 Cy5 的 NHS 酯形式进行蛋白质标记,胺形式不直接反应;因此,应使用 Cy5 NHS 酯进行胺反应性标记。
细胞实验
对于基于细胞的检测,使用Cy5标记的化合物或纳米颗粒进行细胞摄取成像。将细胞(例如,8孔板中每孔1×10⁵个细胞)接种并培养过夜。向培养基中加入Cy5标记的探针(1-20 ug/mL),并在37℃下孵育1-6小时。用PBS洗涤细胞(3次),用4%多聚甲醛固定(如果不是活细胞成像),用Hoechst 33342或DAPI对细胞核进行复染,并使用带有Cy5滤光片(激发波长640-660 nm,发射波长660-680 nm)的荧光显微镜进行成像。对于药物摄取的活细胞成像,细胞可在洗涤后直接成像。对于定量摄取,可将细胞用胰蛋白酶消化,重悬于 PBS 中,然后使用 Cy5 通道(激发波长 640 nm,发射波长 670 nm)通过流式细胞术进行分析。
动物实验
在体内动物研究中,通常将Cy5标记的缀合物(例如抗体、纳米颗粒)通过尾静脉或腹腔注射给药给小鼠(6-8周龄,20-25克)。剂量:每只小鼠50-100微克标记蛋白,溶于100-200微升PBS缓冲液中。使用激发波长为640-650纳米、发射波长为670-700纳米的成像系统,在不同时间点(例如注射后1、6、12、24、48小时)进行体内荧光成像。对于皮下肿瘤模型,在成像过程中使用异氟烷麻醉小鼠。在实验终点,切除主要器官进行离体成像,以量化生物分布。通过比较肿瘤荧光信号与邻近肌肉或皮肤的荧光信号,计算肿瘤与背景信号比值。
药代性质 (ADME/PK)
Cy5胺TFA的分子量为731.33 Da(TFA盐)。该化合物为固体(棕色至深棕色固体),应在-20℃下避光防潮保存。粉末在-20℃下可稳定保存3年,在4℃下可稳定保存2年。DMSO储备液(10-20 mM)应在-80℃下保存长达6个月,或在-20℃下保存长达1个月。溶解性:DMSO(可溶,典型浓度为10-50 mg/mL);水(由于TFA盐的存在,溶解度中等;可能需要超声处理才能溶解)。体内给药时,应使用标记的偶联物(而非游离染料);游离染料不可直接给药。偶联时,Cy5胺TFA通常溶解于DMSO或水中。与游离碱相比,TFA盐形式的水溶性更佳。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Cy5胺TFA在典型的研究浓度(微摩尔至低毫摩尔范围)下被认为无毒。应遵循标准的实验室安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜;避免吸入粉尘。本产品仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。目前尚未有明显的毒性报告。对于体内研究,应进行标准的安全性监测(体重、行为)。
参考文献

[1]. Carboxylated Cy5-Labeled Comb Polymers Passively Diffuse the Cell Membrane and Target Mitochondria. ACS Appl Mater Interfaces. 2019 Aug 28;11(34):31302-31310.

其他信息
Cy5胺TFA(花菁5胺TFA)是一种用于远红外/近红外区域的荧光标记染料。主要特性:(1) Cy5荧光团,激发/发射最大值约为650/670 nm(典型值)或645/665 nm;(2) 伯胺官能团(-NH2)可通过EDC/NHS化学方法与羧基偶联;(3) TFA盐形式增强了水溶性和稳定性;(4) 远红外发射可降低生物样品的自发荧光背景,适用于体外和体内成像。常见应用:标记纳米颗粒、聚合物、肽和小分子,用于细胞摄取、药物转运和生物分布研究。该化合物还可用于制备Cy5.5标记化合物(Cy5.5是其衍生物,光谱略微红移)。纯度通常≥98%(HPLC测定)。游离碱(Cy5胺)的相关CAS号:1807529-70-9。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C40H54CLF3N4O3
分子量
731.33
相关CAS号
Cy 5 amine;1807529-70-9
外观&性状
Brown to dark brown solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3674 mL 6.8369 mL 13.6737 mL
5 mM 0.2735 mL 1.3674 mL 2.7347 mL
10 mM 0.1367 mL 0.6837 mL 1.3674 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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