Cy 3 (Non-Sulfonated) (triethylamine) (Cyanine3 triethylamine)

目录号: V77128 纯度: ≥98%
Cy 3 非磺化 (Cyanine3) 三乙胺是一种氰化物 (Cy) 染料,是蛋白质和核酸的荧光标记,具有绿色通道。
Cy 3 (Non-Sulfonated) (triethylamine) (Cyanine3 triethylamine) 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
Other Sizes

Other Forms of Cy 3 (Non-Sulfonated) (triethylamine) (Cyanine3 triethylamine):

  • Cy 3 (Non-Sulfonated) (potassium)
  • CY3
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产品描述
非磺化氰基三乙胺(Cy3)是一种氰基(Cy)染料,可作为蛋白质和核酸的荧光标记物,具有绿色通道。非磺化氰基三乙胺是氰基五在光激发下发生光转化而产生的荧光产物。非磺化氰基三乙胺可用于活细胞的高密度单颗粒追踪,无需紫外光照射和细胞毒性添加剂。其激发波长为470 nm,发射波长为515 nm和565 nm。
Cy 3(非磺化)(三乙胺)(花菁3三乙胺)是一种带有三乙胺反离子的非磺化花菁染料。它是一种用于标记蛋白质和核酸的荧光染料,其激发/发射波长最大值分别约为470 nm (Ex) 和515/565 nm (Em),发出绿色荧光。它是花菁5在光激发下经光转化产生的荧光光产物。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cy 3 (Non-Sulfonated) (triethylamine) does not bind to a biological target; it is a chemical labeling reagent. As a non-sulfonated Cy3 dye, it has a hydrophobic character compared to sulfonated versions. The dye can be used for non-covalent (electrostatic or hydrophobic) interactions or covalently incorporated via functional groups (if present; the triethylamine salt form is typically for storage and the dye may be used as a free acid or NHS ester). The Cy3 fluorophore provides green fluorescence for detection.
体外研究 (In Vitro)
操作指南:以下是建议的操作步骤。本方案仅提供指导,应根据您的具体需求进行调整。蛋白质标记[2]:1. 将100 μL蛋白质加入到预先配制有Cy3非磺化三乙胺的96孔黑色微孔板中,于37 °C孵育50分钟。然后按照常规方案进行细胞培养。2. 使用BioTek扫描微孔板,并在激发波长470 nm和发射波长515 nm及565 nm处采集数据。
在体外,Cy3(非磺化)三乙胺可用于活细胞的高密度单颗粒追踪,无需紫外光照射和细胞毒性添加剂。典型的蛋白质标记方案:将100 uL蛋白质(例如,浓度为0.1-1 mg/mL的抗体)加入到96孔黑色微孔板中预先配制的Cy3非磺化三乙胺溶液中。在37℃下孵育50分钟。然后按照标准方案进行细胞孵育。扫描微孔板,并在470 nm激发波长和515 nm及565 nm发射波长下采集数据。
体内研究 (In Vivo)
Cy 3(非磺化)三乙胺不直接用于体内活性测定。非磺化形式的疏水性强于其磺化形式,这会影响其溶解度和生物分布。它可用于标记亲脂性生物分子或用于需要最小电荷的应用。对于体内成像,通常优选磺化(水溶性)形式。本产品更适用于体外和离体标记应用。
酶活实验
对于体外蛋白质标记(通过 NHS 酯形式,如果三乙胺盐已转化或染料以 NHS 酯形式获得):将 1 mg 蛋白质(例如,牛血清白蛋白 (BSA) 或抗体)溶解于 1 mL 0.1 M 碳酸氢钠缓冲液(pH 8.3)中。配制浓度为 1-10 mM 的 Cy3 NHS 酯(由三乙胺盐合成)的无水 DMSO 溶液。向蛋白质溶液中加入 5-20 当量的 Cy3 NHS 酯(例如,对于 1 mg/mL 的蛋白质溶液,加入 10 uL 浓度为 10 mM 的 Cy3 DMSO 溶液;DMSO 浓度 <5%)。在室温下轻柔混合孵育 1 小时。避光反应。通过透析或尺寸排阻色谱法(例如,Sephadex G-25)去除未反应的染料。标记程度 (DOL) 是通过测量 550 nm (Cy3) 和 280 nm (蛋白质) 处的吸光度来计算的。
细胞实验
对于基于细胞的检测,使用Cy3标记的蛋白质(例如抗体、凝集素)进行荧光显微镜观察。将细胞(例如,8孔板中每孔5×10⁴-1×10⁵个细胞)接种并培养过夜。将Cy3标记的探针加入培养基中,使其最终浓度为1-20 ug/mL,并在37℃下孵育1-4小时。对于活细胞成像,用PBS洗涤细胞(3次),并立即使用配备Cy3滤光片组(激发波长~540-560 nm,发射波长~570-590 nm)的荧光显微镜进行成像。对于固定细胞成像,洗涤细胞,用4%多聚甲醛固定(室温下15分钟),再次洗涤,用DAPI或Hoechst 33342对细胞核进行复染,封片后进行成像。对于需要单颗粒追踪的研究,可将细胞与低浓度(例如 0.1-1 ug/mL)的 Cy3 标记探针孵育,以实现单分子分辨率,并使用全内反射荧光 (TIRF) 显微镜或高时间分辨率的共聚焦显微镜进行成像。与磺化型 Cy3 相比,非磺化 Cy3 染料可能表现出更强的疏水相互作用,这可能会影响其膜分配和细胞摄取。这种特性可能有利于某些应用,例如亲脂性药物追踪或膜标记。
动物实验
Cy3(非磺化)三乙胺通常不单独用于动物实验。标记的偶联物(例如,Cy3标记的抗体)可通过尾静脉注射给小鼠(6-8周龄,20-25克),用于浅表靶点(例如,皮下肿瘤)的成像。典型剂量为50-100微克标记蛋白溶于100-200微升PBS缓冲液中。由于Cy3的发射波长在可见光范围内(激发/发射波长约为550/570纳米),其组织穿透深度有限;它适用于皮下或表面组织的成像,但不适用于深层组织成像。体内成像使用配备Cy3滤光片组(激发波长540-560纳米,发射波长570-590纳米)的成像系统进行。成像过程中,小鼠使用异氟烷麻醉。成像可在注射后不同时间点进行(例如,注射后 1、6、12 和 24 小时)。在终点时间点,可对采集的器官进行离体成像,以评估生物分布。
药代性质 (ADME/PK)
Cy 3(非磺化)(三乙胺)的分子量为 1255.06 Da(三乙胺盐形式)。该化合物为固体粉末,应在 -20℃ 下避光防潮保存。粉末在 -20℃ 下可稳定保存长达 3 年,在 4℃ 下可稳定保存长达 2 年。DMSO 储备液(例如 10 mM)应在 -80℃ 下保存长达 6 个月,或在 -20℃ 下保存长达 1 个月。溶解性:非磺化形式的水溶性低于磺化形式;通常将其溶解于 DMSO 或 DMF 中用于偶联反应。三乙胺反离子用于中和染料(可能以羧酸或磺酸游离酸形式存在),以改善操作性和稳定性。对于体内应用,使用的是标记的偶联物(而非游离染料),其在生理盐水或PBS中的溶解度取决于偶联物本身。偶联时,染料通常溶于DMSO溶液中。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Cy 3(非磺化)三乙胺在典型的研究浓度(微摩尔级)下被认为无毒。应遵循标准的实验室安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜。本产品仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。目前尚未有明显的毒性报告。与磺化形式相比,非磺化形式的生物学特性可能略有不同(例如,细胞膜分配增加),这可能会影响高浓度下的毒性;然而,在标签浓度下,预计不会产生不良反应。
参考文献

[1]. Mechanism of Cyanine5 to Cyanine3 Photoconversion and Its Application for High-Density Single-Particle Tracking in a Living Cell. J Am Chem Soc. 2021 Sep 8;143(35):14125-14135.

[2]. Silver enhanced ratiometric nanosensor based on two adjustable Fluorescence Resonance Energy Transfer modes for quantitative protein sensing. Biosens Bioelectron. 2017 Jan 15;87:428-432.

其他信息
Cy3(非磺化)(三乙胺)(花菁3三乙胺)是一种非磺化花菁染料,带有三乙胺反离子。主要特点:(1) 非磺化结构,使染料具有更强的疏水性,适用于需要最小电荷相互作用的应用;(2) 激发/发射最大值:激发波长约为470 nm,发射波长为515 nm和565 nm(某些配方的Cy3具有典型的双峰发射光谱);(3) 无需紫外激发即可用于活细胞中高密度单颗粒追踪;(4) 三乙胺反离子用于形成盐和稳定化合物。该产品通常用作蛋白质和核酸的荧光标记。纯度通常为≥98%(HPLC测定)。游离碱(非磺化Cy3)的相关CAS号:146397-20-8。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C49H65N5O14S2
分子量
1255.06
相关CAS号
Cy 3 (Non-Sulfonated);146397-20-8
外观&性状
Solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.7968 mL 3.9839 mL 7.9677 mL
5 mM 0.1594 mL 0.7968 mL 1.5935 mL
10 mM 0.0797 mL 0.3984 mL 0.7968 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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