| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Autocamtide‑3 targets the active site of CaMKII, specifically recognising the CaMKII substrate consensus sequence (RXXS/T). It is phosphorylated by CaMKII on a specific serine residue. The peptide has high selectivity for CaMKII over other kinases, including PKA, PKC, CaMKIV and CaMKI, making it an excellent tool for measuring CaMKII activity in complex biological samples.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 50 μL 的激酶测试程序中，使用 20 μM Autocamtide-3 乙酸酯 (H2N-Lys-Lys-Ala-Leu-His-Arg-Gln-Glu-Thr-Val-Asp-Ala-Leu-COOH) 和 5 μL CaMKII。催化活性由 Autocamtide-3 乙酸酯证明[1]。
在无细胞激酶活性测定中，重组CaMKII以Ca2+/钙调蛋白依赖的方式磷酸化autrocamtide-3乙酸酯。CaMKII的Km值通常为5-15 uM，kcat值在1-5 s-¹范围内，使其成为比通用肽（如syntide-2）更优良的底物。浓度高达100 uM时，PKA、PKC、CaMKIV或其他嗜碱性激酶对该肽的磷酸化作用并不显著。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于autocamtide-3是一种底物而非治疗剂，因此未见其直接的体内活性描述。然而，它可用于体外激酶活性测定，以测量神经系统疾病、心脏肥大和突触可塑性动物模型组织裂解液中CaMKII的激活情况。该肽有助于阐明CaMKII在学习记忆、缺血性损伤和心力衰竭中的作用。
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| 酶活实验 |
标准CaMKII激酶活性测定（放射性）：将Autocamtide-3乙酸盐（终浓度10-200 uM）与重组CaMKII（5-20 nM）在测定缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、10 mM MgCl2、0.5 mM CaCl2、1 uM钙调蛋白、1 mM DTT、0.1 mg/mL BSA）中于30℃孵育10分钟。加入100 uM ATP（每孔0.5 uCi33P-ATP）启动反应。5-20分钟后，将反应液点样至P81磷酸纤维素滤纸上，用0.75%磷酸洗涤3次，并用液体闪烁计数器计数。不添加Ca2⁺/钙调蛋白或添加EGTA（2 mM）的对照组用于测定Ca2⁺非依赖性活性。可以通过向反应混合物中添加抑制剂来计算 CaMKII 抑制剂的 IC50 值。
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| 细胞实验 |
细胞CaMKII活性测定（离体）：将细胞或组织样本（例如，原代神经元、心肌细胞、脑组织裂解液）在含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解。将蛋白浓度标准化（0.5-1 ug/uL）。向裂解液中加入Autocamtide-3乙酸酯（50 uM）、Ca2+/钙调蛋白（0.5 mM CaCl2，1 uM钙调蛋白）和ATP（100 uM）。反应在30℃孵育30分钟。通过将反应转移至链霉亲和素包被的微孔板（如果使用生物素标记的肽）并用抗磷酸化特异性抗体检测或通过测量掺入的33P-ATP来定量磷酸化。CaMKII活性以每毫克蛋白每分钟掺入的磷酸盐的皮摩尔数表示。
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| 动物实验 |
CaMKII活性测定的一般动物实验方案：雄性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠接受调节CaMKII活性的处理（例如，电刺激诱导长时程增强（LTP）、缺血再灌注损伤、横向主动脉缩窄导致的心脏压力负荷过重）。动物通过颈椎脱臼或异氟烷过量麻醉处死。迅速解剖脑组织（海马、皮层）或心脏组织，液氮速冻，并储存于-80℃。活性测定时，将组织在裂解缓冲液中匀浆，并按照细胞分析方案进行处理。酶活性根据总蛋白含量（BCA法）或总CaMKII蛋白水平（Western blot法）进行标准化。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种肽底物，autocamtide-3 乙酸盐由于易被蛋白水解酶快速降解，其血浆半衰期很短（仅几分钟），因此不用作治疗药物。在体外实验中，该肽直接添加到组织裂解液中，因此药代动力学性质不适用。乙酸盐具有良好的水溶性（在水和生理缓冲液中溶解度均大于 10 mg/mL）。冻干粉末应储存在 -20℃ 或 -80℃，并避光防潮。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Autocamtide-3 乙酸酯是一种研究级肽，不适用于人体或治疗用途。在激酶活性测定所用的浓度（10-200 μM）下，该肽对细胞无毒性。动物实验中，不直接给药，仅检测组织裂解液。处理冻干粉末或储备液时，应遵循标准的实验室安全操作规程（佩戴手套、实验服和护目镜）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Autocamtide-3 的肽序列为 KKALRRQEAVDAL（磷酸化位点通常位于 RXXS/T 基序内的丝氨酸残基上；具体序列可能因生产商而异）。它是 autocamtide-2 的改良版本，对 CaMKII 具有更高的选择性和催化效率。该肽的 N 端经乙酰化修饰，C 端经酰胺化修饰，以防止蛋白水解并提高稳定性。Autocamtide-3 广泛应用于神经科学和心血管研究，用于研究 CaMKII 依赖性信号通路，包括突触可塑性、神经元兴奋性、心肌收缩力和肥大。
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| 分子式 |
C67H117N21O22.XC2H4O2
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| 分子量 |
1508.72 (free acid)
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| 相关CAS号 |
Autocamtide-3;142828-10-2
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~100 mg/mL
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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