| 规格 | 价格 | |
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| 1mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
PEGs
ATP‑PEG8‑Biotin targets the ATP‑binding site of ATP‑dependent enzymes, including protein kinases, ATP synthases, helicases, chaperones and other ATPases. The ATP moiety binds to the active site of the enzyme in a manner similar to native ATP, while the biotin tag allows the enzyme to be captured on streptavidin‑coated surfaces (e.g., plates, beads, sensors). This enables pull‑down assays, kinase activity assays and screening of ATP‑competitive inhibitors. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞生化分析中，ATP-PEG8-生物素可作为多种ATP依赖性酶的底物。例如，蛋白激酶可将ATP-PEG8-生物素的γ-磷酸基团转移至肽或蛋白质底物上，使磷酸化产物被链霉亲和素包被的微孔板捕获，并用抗磷酸化特异性抗体进行检测。PEG8间隔基可减少空间位阻，从而提高酶的活性（通常为天然ATP的50-100%，具体取决于酶的种类）。详细的动力学参数（Km、kcat）因酶而异，应通过实验测定。
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| 体内研究 (In Vivo) |
ATP-PEG8-生物素不作为体内治疗剂使用，它仅作为体外生化分析的研究工具。然而，其体外应用包括在细胞裂解液中使用ATP-PEG8-生物素来捕获ATP结合蛋白（例如激酶、热休克蛋白），用于蛋白质组学分析，或在免疫沉淀后测量复杂生物样品中的激酶活性。
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| 酶活实验 |
使用 ATP-PEG8-生物素的标准体外激酶活性测定：制备 96 孔链霉亲和素包被板。在单独的试管中，配制激酶反应混合物，其中包含：1) 重组激酶或免疫沉淀激酶 (0.1-10 ng)，2) ATP-PEG8-生物素 (1-100 uM)，3) 肽或蛋白质底物 (1-100 uM)，4) 激酶缓冲液（例如，50 mM HEPES pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% Triton X-100）。加入 ATP-PEG8-生物素启动反应（或预先混合所有组分）。在 30℃ 下孵育 30-60 分钟。用 EDTA (10 mM) 终止反应。将反应混合物转移至链霉亲和素板，并在 25℃ 下孵育 30-60 分钟以捕获生物素标记的底物（如果底物未直接生物素化，则磷酸化产物将通过 ATP-PEG8-生物素部分被捕获）。用 PBS-T 洗涤板 3 次。加入抗磷酸化特异性检测抗体（例如，抗磷酸化丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸抗体），随后加入 HRP 标记的二抗。加入 TMB 底物，并在 450 nm 处测量吸光度。激酶活性与信号成正比。
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| 细胞实验 |
通用细胞裂解液ATP结合蛋白下拉实验：将细胞（1×10⁷）在非变性裂解缓冲液（例如，20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100、蛋白酶和磷酸酶抑制剂）中裂解。离心去除细胞碎片。向裂解液中加入ATP-PEG8-生物素，使其终浓度为10-50 uM，并在4℃下轻柔旋转孵育1-2小时。加入链霉亲和素-琼脂糖或链霉亲和素-磁珠，并继续孵育1-2小时。用裂解缓冲液洗涤磁珠3-5次，以去除非特异性结合物。结合蛋白可通过在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸或与过量游离生物素（10 mM）或ATP（10 mM）竞争洗脱。洗脱的蛋白经SDS-PAGE分离，并通过Western blot（使用针对特定ATP结合蛋白的抗体）或质谱分析进行鉴定，以进行无偏倚的蛋白质组学分析。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
ATP-PEG8-生物素不用于动物药代动力学研究。作为一种生物素化的ATP类似物，它在体内会被胞外核苷酸酶和其他磷酸酶迅速代谢，全身给药后完整化合物不太可能到达靶组织。因此，通常不测定该试剂的药代动力学参数。该化合物在pH 7.0-8.0的水性缓冲液中可稳定保存数小时，但应新鲜使用或以储备液形式储存于-20℃或-80℃。ATP-PEG8-生物素为研究级试剂，不适用于人体或治疗用途。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该化合物在生化分析所用浓度（1-100 μM）下无毒。处理冻干粉末或储备液时，应遵循标准实验室安全操作规程（佩戴手套、穿实验服）。由于该化合物为试剂而非候选药物，因此未进行专门的毒性研究。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ATP-PEG8-生物素是一种用于研究ATP依赖性酶的多功能工具。PEG8间隔臂提供了一个30-40埃的柔性连接基团，将ATP头部基团与生物素标签隔开，最大限度地减少了对酶活性位点的空间位阻。这使得该缀合物可用作多种不同类型酶的底物，包括蛋白激酶、脂质激酶、ATP酶和合成酶。该化合物以冻干粉末形式储存在-20℃干燥条件下稳定。仅供研究使用；不可用于诊断或治疗用途。ATP-PEG8-生物素常用于高通量筛选（HTS）中，以鉴定激酶和其他ATP结合酶的ATP竞争性抑制剂。
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| 分子式 |
C36H63N8O22P3S
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|---|---|
| 分子量 |
1084.91
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9217 mL | 4.6087 mL | 9.2174 mL | |
| 5 mM | 0.1843 mL | 0.9217 mL | 1.8435 mL | |
| 10 mM | 0.0922 mL | 0.4609 mL | 0.9217 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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