| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Caspase-4, Caspase-5, and other proteases with a preference for cleaving after aspartic acid residues.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
该底物对特定蛋白酶,特别是参与非经典炎症小体通路的 caspase-4 和 caspase-5,表现出高度选择性。当被靶蛋白酶切割时,Ac-IEPD-AMC 肽在天冬氨酸残基的 C 端发生水解,释放出荧光标记的 AMC 基团。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
Ac-IEPD-AMC 的体内活性可作为蛋白酶激活的指标。例如,在脓毒症休克或炎症性疾病模型中,组织裂解液中该底物裂解的增加表明靶蛋白酶活性升高。它是研究体内非经典炎症小体通路的重要工具。
|
| 酶活实验 |
主要的非细胞实验方案包括将Ac-IEPD-AMC TFA底物与纯化的重组蛋白酶在测定缓冲液(例如,50 mM HEPES,pH 7.4,100 mM NaCl,0.1% CHAPS,10 mM DTT)中孵育。通过加入底物使其最终浓度达到10-100 uM来启动反应。在37℃下连续测量荧光强度(激发波长355 nm,发射波长460 nm)30-60分钟。使用曲线的初始线性部分来计算酶活性。
|
| 细胞实验 |
在体外细胞实验中,将细胞(例如 HEK293T 或 THP-1 巨噬细胞)接种于培养板中,并用实验化合物处理以诱导蛋白酶活化。处理后,用含 0.1% Triton X-100 的缓冲液裂解细胞。将裂解液与 Ac-IEPD-AMC TFA 底物在 37℃ 下孵育 1-2 小时。然后用酶标仪测量释放的 AMC 的荧光强度。
|
| 动物实验 |
在动物模型中,从处理组或对照组动物中获取目标组织(例如肝脏、脾脏或脑组织)。将组织在裂解缓冲液中匀浆。使用BCA法测定裂解液的蛋白浓度。然后将等量的蛋白与Ac-IEPD-AMC TFA底物在测定缓冲液中于37℃孵育1-2小时。测量荧光强度以确定裂解液中的蛋白水解活性。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
作为底物,Ac-IEPD-AMC TFA 本身并不具有药代动力学特征。其用途在于测定蛋白酶活性,而非作为全身用药。理论上可以进行体内分布研究,但此类研究并不常见。其主要药代动力学特性是其在被靶标切割前于生物基质中的稳定性。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
尚未对该生化试剂进行毒性研究。不建议在体内高剂量使用。在研究实验室操作时,采取标准安全预防措施即可。AMC基团可与DNA相互作用,但尚未有急性毒性报告。
|
| 参考文献 |
[1]. Scott JI, et, al. A Functional Chemiluminescent Probe for in Vivo Imaging of Natural Killer Cell Activity Against Tumours. Angew Chem Int Ed Engl. 2021 Mar 8;60(11):5699-5703.
|
| 其他信息 |
该底物用于高通量筛选 (HTS),以鉴定 caspase-4 和 caspase-5 的新型抑制剂。释放的 AMC 产物具有独特的荧光,可进行连续监测。本产品仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。
|
| 分子式 |
C32H41N5O11.XC2HF3O2
|
|---|---|
| 分子量 |
671.69 (free acid)
|
| 相关CAS号 |
Ac-IEPD-AMC;216757-33-4
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。