| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
The tag's target is the protein of interest it is fused to, as well as anti-FLAG antibodies. The DYKDDDDK peptide (FLAG) is an epitope tag that binds specifically to high-affinity anti-FLAG antibodies. The 3x FLAG format has higher affinity and specificity than a single FLAG tag, allowing for robust detection and purification of fusion proteins, especially those that are low in abundance.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
将表达 HARS 的质粒暂时转染至 HEK293 细胞后，收集细胞并在含有哺乳动物蛋白酶抑制剂混合物的 CelLytic M 溶液中于 4 °C 裂解 20 分钟。根据制造商说明，FLAG 标记的 HARS 通过与抗 DYDDDDK 树脂结合，并在含有 50 mM Tris-HCl pH 7.4 和 150 mM NaCl 的缓冲液中与 3X-DYKDDDDK 肽竞争洗脱进行纯化（人 HARS 的纯化）[2]。
体外活性表现为能够以高特异性和亲和力与抗FLAG抗体结合。3x FLAG标签常用于纯化低丰度的难纯化蛋白。在Western blotting或ELISA实验中，即使没有针对该蛋白的抗体，该标签也能用于检测融合蛋白。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内应用有限；然而，它可用于构建稳定表达3x FLAG标签蛋白的细胞系，从而研究活细胞内蛋白质的功能、定位和蛋白质-蛋白质相互作用。该标签本身不具有体内治疗活性，但却是研究模式生物蛋白质生物学的宝贵工具。
|
| 酶活实验 |
不进行酶结合实验。通常使用表面等离子共振 (SPR) 或酶联免疫吸附试验 (ELISA) 来测量 FLAG 标签与抗 FLAG 抗体之间的结合亲和力 (Kd)。或者，也可以使用抗 FLAG 抗体偶联的磁珠进行下拉实验，以测量复合物裂解液的结合能力。
|
| 细胞实验 |
基于细胞的检测方法是将编码目的基因并融合3x FLAG标签的质粒转染到细胞中。24-72小时后，裂解细胞，并使用抗FLAG抗体磁珠对FLAG标签蛋白进行免疫沉淀。洗脱结合的蛋白，并通过SDS-PAGE和Western blotting分析，以确认其表达和蛋白-蛋白相互作用。
|
| 动物实验 |
3x FLAG标签常用于动物模型中，以研究蛋白质在体内的功能。构建表达3x FLAG标签蛋白的转基因动物或异种移植模型。收集组织，并使用抗FLAG抗体进行免疫沉淀或免疫荧光(IF)检测，以分析目标蛋白的组织特异性表达和定位。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
3x DYKDDDDK 标签 TFA 的分子式为 C125H177F3N30O60，分子量为 3116.90。其粉末在 -20℃ 下可稳定保存 3 年，在水中的溶解度 ≥ 100 mg/mL (32.08 mM)。为确保长期稳定性，建议将其溶液储存在 -80℃ 下，保存时间最长可达 6 个月。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
3x FLAG肽在研究常用浓度下通常被认为无毒。它是一种小肽标签，在细胞中表达时不会产生细胞毒性或免疫原性。TFA反离子在标准浓度下也无毒。该标签是一种标准研究试剂，不适用于人体。
|
| 参考文献 |
[1]. Mishra V. Affinity Tags for Protein Purification. Curr Protein Pept Sci. 2020;21(8):821-830.
[2]. Abbott JA, et al. The Usher Syndrome Type IIIB Histidyl-tRNA Synthetase Mutation Confers Temperature Sensitivity. Biochemistry. 2017;56(28):3619-3631. |
| 其他信息 |
3x DYKDDDDK Tag TFA 是一种用于分子生物学的研究级化学工具。它是标准的 3X FLAG 格式，用于纯化低丰度积累的难纯化蛋白质。该标签仅供研究使用，并非药物、诊断试剂或治疗剂。它未获得 FDA 批准用于人体，严格来说只是蛋白质科学领域的试剂。
|
| 分子式 |
C125H177F3N30O60
|
|---|---|
| 分子量 |
3116.90
|
| 相关CAS号 |
3x DYKDDDDK Tag;921765-76-6
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
H2O :≥ 100 mg/mL (~32.08 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.3208 mL | 1.6042 mL | 3.2083 mL | |
| 5 mM | 0.0642 mL | 0.3208 mL | 0.6417 mL | |
| 10 mM | 0.0321 mL | 0.1604 mL | 0.3208 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
