| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
MLKL-IN-3 (compound 66): Human MLKL (Cysteine86); no inhibition on human RIPK1 and RIPK3 kinases (10 μM concentration shows no kinase activity inhibition) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. MLKL-IN-3 (compound 66)是人源MLKL的共价抑制剂,在TSZ诱导的HT-29细胞中具有强效抗坏死性凋亡活性,EC₅₀为31 nM [1]
2. MLKL-IN-3 (compound 66)共价结合于人源MLKL的Cys86残基,经LC-MS/MS分析和基于活性的蛋白谱(ABPP)竞争实验证实;它能有效竞争MLKL靶向探针TC13136与MLKL的结合 [1] 3. MLKL-IN-3 (compound 66)在体外对RIPK1和RIPK3激酶活性无抑制作用(10 μM浓度下无明显抑制效果),且不影响TSZ诱导的HT-29细胞中RIPK1和MLKL的磷酸化状态 [1] 4. MLKL-IN-3 (compound 66)在HeLa细胞中不抑制外源性凋亡(TNFα + CHX、TNFα + Smac模拟物)、内源性凋亡(ABT737 + S63845)及铁死亡(PACMA31 + Regorafenib),表明其抗坏死性凋亡活性具有特异性 [1] 5. MLKL-IN-3 (compound 66)在TSZ诱导的HT-29细胞中可部分抑制MLKL寡聚化,但抑制效果弱于TC13172;它能显著抑制MLKL向细胞膜的转运,经可溶性和膜组分的western blot分析及p-MLKL的免疫荧光染色证实 [1] 6. MLKL-IN-3 (compound 66)在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中无抗坏死性凋亡活性,因小鼠MLKL缺乏该化合物靶向的Cys86残基 [1] 7. 在转染MLKL C86S突变体的HT-29 MLKL敲除(KO)细胞中,MLKL-IN-3 (compound 66)的抗坏死性凋亡活性完全丧失,而在转染MLKL F148A或K157A突变体的细胞中仍保留活性 [1] 8. MLKL-IN-3 (compound 66)与谷胱甘肽(GSH)的反应速率显著低于TC13172(低150倍以上),表明其化学稳定性更好,潜在脱靶效应更低 [1] 9. 在无TSZ诱导的情况下,高浓度的MLKL-IN-3 (compound 66)不影响HT-29细胞的存活和增殖 [1] 在 HT-29 细胞中,MLKL-IN-3(化合物 66)(1 μM,24 小时)可防止 MLKL 转位到细胞膜上[1]。 MLKL 和 RIPK1 的磷酸化状态不受 MLKL-IN-3 的影响[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
化合物 66,MLKL-IN-3,在 48 小时内表现出 T1/2,并且与谷胱甘肽 (GSH) 的反应率降低了 150 倍以上,这可能减轻其细胞毒性作用和脱靶后果[1]。
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| 酶活实验 |
1. MLKL-IN-3 (compound 66)的RIPK1激酶活性检测实验:使用纯化的RIPK1激酶在合适的孔板中进行实验,反应体系包含ATP和底物蛋白,通过荧光素酶监测生成的ADP量来评估激酶活性。化合物测试浓度为1 μM和10 μM,以Ponatinib为阳性对照,结果显示对RIPK1激酶活性无抑制作用 [1]
2. MLKL-IN-3 (compound 66)的RIPK3激酶活性检测实验:采用与RIPK1激酶检测类似的实验设置,以纯化的全长RIPK3激酶为靶标,化合物测试浓度为1 μM和10 μM,经ADP生成检测后,未观察到对RIPK3激酶活性的抑制作用 [1] |
| 细胞实验 |
1. MLKL-IN-3 (compound 66)的TSZ诱导坏死性凋亡抑制实验:将HT-29细胞以每孔2×10⁴个细胞的密度接种到96孔板中,37℃、5% CO₂条件下培养过夜;将系列浓度的化合物与TSZ(TNFα 20 ng/mL、Smac模拟物LCL-161 1 μM、ZVAD-FMK 20 μM)共同处理细胞24小时;采用发光法细胞活力检测试剂通过ATP定量测定细胞活力,用酶标仪记录发光值并计算EC₅₀值 [1]
2. MLKL-IN-3 (compound 66)的MLKL共价结合验证实验(ABPP):将HT-29细胞用10 μM该化合物预孵育2小时,再加入10 μM MLKL探针TC13136继续孵育2小时;细胞裂解液与Biotin-C₂H₄-N₃、TBTA、CuSO₄和抗坏血酸钠进行2小时点击反应;富集生物素修饰的蛋白,通过MLKL抗体的western blot分析验证竞争性结合 [1] 3. MLKL-IN-3 (compound 66)的MLKL寡聚化及膜转运实验:HT-29细胞在1 μM化合物存在下用TSZ处理6-8小时;寡聚化检测时,细胞裂解液经western blot分析,与DMSO对照组比较寡聚化MLKL的水平;膜转运检测时,将细胞分离为可溶性组分和膜组分,通过western blot检测各组分中MLKL的水平(以GAPDH为可溶性组分对照,COXIV为膜组分对照),同时采用抗pMLKL抗体进行免疫荧光染色,观察p-MLKL的细胞定位 [1] 4. MLKL-IN-3 (compound 66)的MLKL突变体细胞实验:将野生型MLKL或MLKL突变体(C86S、F148A、K157A)转染至HT-29 MLKL KO细胞中;转染后的细胞用TSZ和该化合物处理24小时,通过ATP定量检测细胞活力,评估化合物活性对特定MLKL残基的依赖性 [1] 5. MLKL-IN-3 (compound 66)的细胞死亡特异性实验:在化合物存在下,HeLa细胞分别被诱导发生外源性凋亡(TNFα 50 ng/mL + CHX或Smac模拟物10 μM)、内源性凋亡(ABT737 5 μM + S63845 2 μM)或铁死亡(PACMA31 1 μM + Regorafenib 10 μM);孵育24小时后通过ATP水平评估细胞活力,验证化合物对坏死性凋亡的特异性 [1] 6. MLKL-IN-3 (compound 66)的跨物种抗坏死性凋亡实验:将小鼠MEF细胞接种到96孔板中,用TSZ和该化合物处理24小时;通过ATP水平测定细胞活力,评估化合物在小鼠细胞中的活性 [1] |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C31H29CLN4O6
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|---|---|
| 分子量 |
589.04
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| 精确质量 |
588.17756
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| CAS号 |
3031406-27-3
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| PubChem CID |
168279716
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
3.5
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| tPSA |
119 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
42
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| 分子复杂度/Complexity |
1240
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=CC=C(C=C1)CCC(=O)NC2=C(N(C(=O)N(C2=O)C)CC#CC3=CC(=C(C=C3)O)CN4C=CC=C(C4=O)OC)Cl
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| InChi Key |
MWDOKDNDKHXYHZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C31H29ClN4O6/c1-20-8-10-21(11-9-20)13-15-26(38)33-27-28(32)36(31(41)34(2)30(27)40)17-4-6-22-12-14-24(37)23(18-22)19-35-16-5-7-25(42-3)29(35)39/h5,7-12,14,16,18,37H,13,15,17,19H2,1-3H3,(H,33,38)
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| 化学名 |
N-[6-chloro-1-[3-[4-hydroxy-3-[(3-methoxy-2-oxo-1-pyridinyl)methyl]phenyl]prop-2-ynyl]-3-methyl-2,4-dioxopyrimidin-5-yl]-3-(4-methylphenyl)propanamide
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| 别名 |
MLKL-IN-3; MLKL-IN 3; CHEMBL5188408; SCHEMBL27384351; MLKL-IN3; 3031406-27-3;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6977 mL | 8.4884 mL | 16.9768 mL | |
| 5 mM | 0.3395 mL | 1.6977 mL | 3.3954 mL | |
| 10 mM | 0.1698 mL | 0.8488 mL | 1.6977 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。