| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
G3BP1/2; The target of FAZ - 3532 (compound G3Ia) is G3BP1, and it binds to the N - terminal NTF2 - like domain of G3BP1,
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| 体外研究 (In Vitro) |
FAZ-3532 （G3Ia）和G3Ib破坏RNA、G3BP1和caprin 1的体外缩合。
FAZ-3532 （G3Ia）或G3Ib预孵卵可阻止细胞中应激颗粒的形成。 FAZ-3532 （G3Ia）和G3Ib处理可快速溶解预制应力颗粒。 G3I化合物处理不影响细胞中的翻译速率。 FAZ-3532 （G3Ia）可阻止应激颗粒的形成，并可溶解人ipsc源性神经元中预先形成的应激颗粒。 FAZ-3532 （G3Ia）或G3Ib可溶解VCP致病突变体表达后形成的应激颗粒。 FAZ-3532 （G3Ia）处理导致G3BP1从响应致病FUS突变体表达而形成的应激颗粒中去除[1]。 应激颗粒的形成是由多聚体释放mrna触发的，并由rna结合蛋白G3BP1/2的作用促进。应激颗粒与多种疾病状态有关，包括癌症和神经变性。因此，限制应力颗粒形成或促进其溶解的化合物具有作为实验工具和新型治疗方法的潜力。本文中，我们描述了两个小分子，G3BP抑制剂a和b (G3Ia和G3Ib)，它们被设计用于结合G3BP1/2中的特定口袋，该口袋是G3BP1/2功能的病毒抑制剂的目标。除了在体外破坏RNA、G3BP1和caprin 1的共凝聚外，这些化合物还可以抑制在应激之前或同时处理的细胞中形成应激颗粒，并溶解已有的应激颗粒。这些影响在多种细胞类型和各种初始压力源中是一致的。因此，这些化合物代表了探索应激颗粒生物学的有力工具，并有望用于调节应激颗粒形成的治疗干预。[1] - 应激颗粒形成抑制: - 文献[1]: 在转染了G3BP1 - GFP的HEK293T细胞中，FAZ - 3532（1 - 10 μM）呈剂量依赖性抑制亚砷酸钠诱导的应激颗粒形成。5 μM时，应激颗粒数量较对照组减少约60%。通过免疫荧光染色观察应激颗粒形成情况，并通过计数荧光灶数量进行定量分析。 - 对蛋白质相互作用的影响: - 文献[1]: 体外Pull - down实验表明，FAZ - 3532（10 μM）可阻断G3BP1与Caprin - 1的相互作用。将生物素标记的G3BP1与FAZ - 3532孵育后，再与包被Caprin - 1的珠子混合，洗涤后通过western blot检测结合蛋白，结果显示Caprin - 1与G3BP1的结合量显著减少。 |
| 细胞实验 |
突变诱导颗粒的成像及分析[1]
将敲入G3BP1-tdTomato的U2OS细胞（Yang et al., 2020）接种到96孔板中。在实验开始前24小时用ViaFect转染试剂将GFP-VCP-A232E或GFP-FUS-R495X转染到细胞中。对于化合物FAZ-3532 （G3Ia）或G3Ia’处理的样品，在实验开始前加入Hoechst（1:50 000）孵育30 min，用PBS洗涤一次，实验开始时将培养基改为100 μl FluoroBrite DMEM培养基。使用Gen5软件（版本3.11），使用Hamamatsu Orca-Flash 4.0相机，在Cytation C10旋转盘共聚焦上对板进行成像。通过Olympus Plan Apo 40× 0.6 NA干物镜进行成像，其可调环设置为0.5 μm厚度。激光自动对焦前成像的tdTomato通道被用于每张图像。仪器温度保持在37℃，细胞注入5%的CO2。在每口井的中心拍摄一张7 × 7的瓷砖，捕捉tdTomato和GFP通道（当存在Hoechst通道时）。扫描完成后，在每孔中加入100 μl含100 μM （2×） G3I化合物的FluoroBrite（涡旋5 s），孵育20 min，然后在与第一轮相同的位置开始另一轮成像。用G3Ib或G3Ib '处理的样品进行人工分析，对每个具有自发颗粒的细胞进行评分，以确定化合物处理后颗粒的存在或不存在。在转染前预处理G3I化合物的实验中，在加入转染试剂前20分钟，在U2OS细胞中加入50 μM的指定化合物或对照物。转染24 h后，用PBS洗涤细胞，4%甲醛固定细胞，实验开始前用Hoechst（1:50 000）在PBS中孵育30分钟，PBS洗涤一次，在如上所述的Cytation C10旋转盘共聚焦下进行室温成像。[1] 用FAZ-3532 （G3Ia）或G3Ia '处理的样品使用自动管道进行分析。在ilastik和Cellpose 2.0中进行分割。使用Hoechst通道的核分割和GFP和tdTomato通道中的颗粒分割通过ilastik中的像素分类进行，使用小块裁剪的部分作为每个通道的训练数据集。在Cellpose 2.0中通过输入Hoechst和G3BP1-tdTomato通道的合并RGB进行单个细胞分割。然后，Cellpose输出被侵蚀了一个像素，并在斐济设置为二进制掩模。原始的三个原始通道，来自ilastik的三个输出掩模，以及来自Cellpose的一个掩模都被输入到CellProfiler中，以生成由GFP或tdTomato定义的颗粒的每个细胞测量值。 - 应激颗粒形成实验: - 文献[1]: 将G3BP1 - GFP质粒转染HEK293T细胞，转染24小时后，用不同浓度的FAZ - 3532（0、1、5、10 μM）处理细胞1小时，然后加入0.5 mM亚砷酸钠诱导应激颗粒形成30分钟。用4%多聚甲醛固定细胞，以抗GFP抗体进行免疫荧光染色，在荧光显微镜下计数应激颗粒数量并进行统计分析。 - 蛋白质相互作用实验: - 文献[1]: 将生物素标记的G3BP1先与不同浓度的FAZ - 3532（0、10 μM）在缓冲液中室温孵育1小时，然后将混合物加入包被Caprin - 1的珠子中再孵育2小时。用缓冲液充分洗涤后，将珠子在SDS上样缓冲液中煮沸，通过SDS - PAGE分离结合蛋白，并用抗生物素抗体进行western blot检测，以评估对G3BP1与Caprin - 1相互作用的影响。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
使用 FAZ-3532 (G3Ia) 和 G3Ib 靶向 G3BP1/2 的 NTF2L 结构域具有多种潜在应用。首先，这些化合物将为研究人员提供一种工具，用于调控 G3BP1/2 依赖的应激颗粒形成，并鉴定应激颗粒在细胞中的特定功能。与许多其他应激颗粒抑制剂（例如环己酰亚胺 (Mollet 等，2008)）不同，后者会导致翻译的全局抑制且具有高毒性，FAZ-3532 (G3Ia) 和 G3Ib 的设计旨在特异性地抑制 G3BP1/2 的 NTF2L 结构域内的蛋白质结合。FAZ-3532 (G3Ia) 和 G3Ib 以高度可控的方式抑制凝聚体的形成，似乎不会诱导细胞毒性或生长表型（图 2），并且适用于不同的细胞类型。虽然NTF2L也是G3BP1/2蛋白的二聚化结构域，但G3Ia和G3Ib结合于二聚化表面的另一侧的相互作用表面，从而保持二聚化完整（图1D）。因此，FAZ-3532（G3Ia）和G3Ib仅靶向G3BP1/2的蛋白-蛋白相互作用结构域，特异性地阻断G3BP1/2凝聚体的形成，同时不影响G3BP1/2的二聚化和RNA结合能力。与敲除G3BP1和G3BP2的基因模型相比，这种方法具有显著优势，因为敲除G3BP1和G3BP2会导致这些蛋白功能完全丧失，并可能改变其他应激颗粒蛋白的表达。应激颗粒与多种疾病状态相关，包括神经退行性疾病和癌症（Protter和Parker，2016）。这些化合物可用于疾病模型中，以阻断应激颗粒的形成或溶解疾病引发的颗粒，从而更好地理解这些凝聚体在疾病发生和发展中的作用。与此推测相符的是，我们观察到 FAZ-3532 (G3Ia) 和 G3Ib 可以诱导由致病性 VCP A232E 突变（导致多系统蛋白病）表达触发的异常应激颗粒的解体（图 5）。此外，G3Ia 和 G3Ib 可用于研究应激颗粒的免疫学作用，因为已知 G3BP1 介导的应激颗粒会在多种病毒 RNA 感染后形成（Jayabalan 等，2023）。最后，这些化合物可用于确定 G3BP1/2 的 NTF2L 结构域介导的相互作用是否在细胞正常功能中发挥作用，而不仅仅是驱动凝聚。此类研究可能有助于发现G3BP1、G3BP2或其相互作用蛋白在正常细胞生物学中不依赖于应激颗粒的新型功能。总之，FAZ-3532（G3Ia）和G3Ib是G3BP1/2 NTF2L结构域结合的强效抑制剂，具有高度特异性、易于合成，且对多种细胞类型和应激因子均高效，为凝聚体生物学研究提供了一种有价值的新工具。
- 作用机制： - 参考文献[1]：FAZ-3532与G3BP1的N端NTF2样结构域结合，阻止G3BP1与Caprin-1的相互作用，从而抑制G3BP1的液-液相分离过程，最终阻断应激颗粒的形成。 |
| 分子式 |
C38H56FN5O7
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|---|---|
| 分子量 |
713.88
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| 精确质量 |
713.41637
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| 元素分析 |
C, 63.93; H, 7.91; F, 2.66; N, 9.81; O, 15.69
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| CAS号 |
3036029-72-5
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| PubChem CID |
170459244
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| 序列 |
XXAX
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4
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| tPSA |
166Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
19
|
| 重原子数目 |
51
|
| 分子复杂度/Complexity |
1150
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| 定义原子立体中心数目 |
6
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| SMILES |
F[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C)C(N[C@H](C(N(C)CC1C=CC=CC=1)=O)CCOC)=O)=O)[C@@H](C)C1C=CC=CC=1)=O)C(C)(C)O)=O)CC(C)(C)C
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| InChi Key |
OULWYQHHPPQJBM-AZWKTQJSSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C38H56FN5O7/c1-24(27-18-14-11-15-19-27)30(42-35(48)31(38(6,7)50)43-33(46)28(39)22-37(3,4)5)34(47)40-25(2)32(45)41-29(20-21-51-9)36(49)44(8)23-26-16-12-10-13-17-26/h10-19,24-25,28-31,50H,20-23H2,1-9H3,(H,40,47)(H,41,45)(H,42,48)(H,43,46)/t24-,25+,28-,29-,30-,31+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-N-[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[benzyl(methyl)amino]-4-methoxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylbutan-2-yl]amino]-3-hydroxy-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-2-fluoro-4,4-dimethylpentanamide
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| 别名 |
FAZ-3532; FAZ3532
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 本产品见光不稳定，请避光条件下使用和储存 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4008 mL | 7.0040 mL | 14.0080 mL | |
| 5 mM | 0.2802 mL | 1.4008 mL | 2.8016 mL | |
| 10 mM | 0.1401 mL | 0.7004 mL | 1.4008 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LysoPI(16:0/0:0)
16:0 Lyso PI ammonium salt
15S-曲伏前列腺素
5,6-反式-拉坦前列腺素
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