| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Mitochondrial metabolism
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| 体外研究 (In Vitro) |
Tim44是线粒体内膜(TIM)复合物移位酶的重要组成部分,介导核编码的线粒体前体穿过内膜的运输。在这里,我们通过用膜不可渗透的3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物细胞素(MPB)探测线粒体,然后对修饰的蛋白质进行特异性免疫沉淀,研究了Tim44的拓扑结构。我们的数据表明,位于酵母Tim44 C末端结构域的单个半胱氨酸残基Cys-369暴露于线粒体膜间空间[1]。
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| 酶活实验 |
MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物胞素标记。[1]
将线粒体蛋白(800微克)重新悬浮在1毫升缓冲液中,该缓冲液含有0.6 M山梨醇、20 mM Hepes-KOH(酵母线粒体pH 7.4)和0.23 M甘露醇、70 mM蔗糖、20 mM Hepes-KOH(大鼠肝线粒体pH 7.2)。加入MPB(0.5 mM),将线粒体悬浮液分成两份。一个样品在4°C下与MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物细胞素一起孵育30分钟。通过与2 mM DTT在4°C下孵育10分钟来停止反应。将线粒体溶解在0.5%Triton X-100中,以14000 rpm,10分钟的速度离心。使用针对线粒体蛋白的抗血清在4°C下对上清液进行3-4小时的免疫沉淀,然后用ProteinA-Sepharose孵育。用TBS吐温缓冲液洗涤颗粒四次,加入Laemmli增溶缓冲液并煮沸5分钟。将第二份线粒体悬浮液(第2级)作为前一份样品处理,不同的是在MPB处理开始时用Triton X-100增溶线粒体。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物素是一种肽。图1显示了在有无Triton X-100存在的情况下,用MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物素标记酵母线粒体的结果。标记后,用相应的抗体对蛋白质进行免疫沉淀(左列),然后用亲和素-过氧化物酶进行Western印迹分析(右列)。在完整的线粒体中,线粒体外膜蛋白Tom40和Tom70很容易被MPB标记。用去垢剂溶解线粒体膜后,Tom70的标记程度更高。需要指出的是,通过用相应的抗体对印迹进行染色(未显示)验证,两个样品中免疫沉淀的蛋白质量相等。 Imp1在完整线粒体和溶解的线粒体中均被标记,这与之前描述的该蛋白的拓扑结构一致。Tim44是另一种可在完整线粒体中被MPB标记的内膜蛋白。Tim44被MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物素标记的程度在完整线粒体和溶解的线粒体中相似,表明唯一存在的Cys-369是游离的,并暴露于膜间隙。另外两种内膜蛋白Yta10和Yta12,以及位于线粒体基质的α-MPP,仅在用Triton X-100溶解线粒体后才被生物素化,表明内膜确实对MPB不通透。需要强调的是,据报道,高浓度(≥200 μM)的MPB可以穿透哺乳动物细胞的质膜[18]。在我们使用完整线粒体的实验中,即使MPB浓度高达500 μM,我们也未观察到基质蛋白中半胱氨酸残基发生任何显著修饰(≤5%)。在较低浓度的MPB下,蛋白质修饰效率降低,但不同线粒体内区室的蛋白质标记模式相似。
大鼠Tim44含有三个半胱氨酸残基,其中一个残基位于Tim44 C端附近。我们还研究了分离的大鼠肝线粒体中Tim44的拓扑结构。在所用条件下,即使在溶解的线粒体中,大鼠Tim44也无法被MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物素修饰,这表明所有半胱氨酸均无法被MPB修饰。大鼠线粒体膜溶解后,mHsp70 被 MPB 强烈标记;此外,标记的 mHsp70 可与抗 Tim44 抗体发生共免疫沉淀(数据未显示)。此前,我们观察到,体外合成的烟草 ATP 合酶 F1β 亚基前体只有在其于线粒体表面展开时才能被 MPB 修饰。由于 MPB 的亲水性和体积较大,折叠蛋白中隐藏的半胱氨酸无法被修饰。大鼠 Tim44 的情况可能也是如此。此外,半胱氨酸残基还可以形成分子间或分子内二硫键,从而阻止其被修饰。酵母和大鼠 Tim44 的序列比对显示,它们 C 端结构域中半胱氨酸的位置并不保守(图 2A)。与植物和哺乳动物线粒体蛋白输入系统不同,酵母线粒体蛋白输入对巯基特异性试剂的处理不敏感。综上所述,这些数据表明酵母和其他物种的Tim44中半胱氨酸残基具有不同的特征。 总之,我们已证明,在完整的酵母线粒体中,位于Tim44 C端结构域的单个半胱氨酸Cys-369被膜不通透的马来酰亚胺MPB/3-(N-马来酰亚胺丙酰基)生物素标记。预测多种物种的Tim44 C端部分具有位置保守的疏水性氨基酸序列。在酵母Tim44中,该片段包含Cys-369,可从内膜外侧接近。综合这些结果可知,Tim44 的 C 端部分暴露于线粒体膜间隙。[1] |
| 分子式 |
C23H33N5O7S
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| 分子量 |
523.60
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| 精确质量 |
523.21
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| CAS号 |
102849-12-7
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| PubChem CID |
127195
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
962.5±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
535.9±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.569
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| LogP |
-1.5
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| tPSA |
199.31
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
15
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| 重原子数目 |
36
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| 分子复杂度/Complexity |
893
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
C1[C@H]2[C@@H]([C@@H](S1)CCCCC(=O)NCCCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CCN3C(=O)C=CC3=O)NC(=O)N2
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| InChi Key |
KWNGAZCDAJSVLC-OSAWLIQMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H33N5O7S/c29-17(7-2-1-6-16-21-15(13-36-16)26-23(35)27-21)24-11-4-3-5-14(22(33)34)25-18(30)10-12-28-19(31)8-9-20(28)32/h8-9,14-16,21H,1-7,10-13H2,(H,24,29)(H,25,30)(H,33,34)(H2,26,27,35)/t14-,15-,16-,21-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-6-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-2-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoic acid
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| 别名 |
3-(N-Maleimidopropionyl)biocytin; 102849-12-7; N-(3-Maleimidopropionyl)biocytin; 3-MPB; 3-(N-Maleimidylpropionyl)biocytin; (2S)-6-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-2-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoic acid; Nalpha-(3-Maleimidylpropionyl)Biocytin; 3-(N-Maleimido-propionyl)biocytin;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9099 mL | 9.5493 mL | 19.0985 mL | |
| 5 mM | 0.3820 mL | 1.9099 mL | 3.8197 mL | |
| 10 mM | 0.1910 mL | 0.9549 mL | 1.9099 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。