BIBO3304 diTFA   中文名称: BIBO 3304 三氟乙酸盐

Neuropeptide Y (NPY) Y1 receptor
BIBO3304 selectively targets the neuropeptide Y (NPY) Y1 receptor, with subnanomolar affinity (Ki typically 0.3-0.7 nM). It has >1000-fold selectivity over Y2, Y4, and Y5 receptors. The Y1 receptor is a Gi/o-coupled GPCR that mediates NPY-induced vasoconstriction, anxiolysis, and orexigenic (appetite-stimulating) effects. BIBO3304 acts as a competitive antagonist, blocking NPY binding and downstream inhibition of adenylyl cyclase and calcium mobilization.

1. 合成了一种新型Y1选择性精氨酰胺衍生物BIBO 3304（(R)-N-[[4-(氨基羰基氨基甲基)-苯基]甲基]-N2-(二苯乙酰基)-精氨酰胺三氟乙酸酯），并对其亚型选择性、体外拮抗活性和食物摄入抑制活性进行了研究。2. BIBO 3304对人和大鼠Y1受体均表现出亚纳摩尔级的亲和力（IC50值分别为0.38±0.06 nM和0.72±0.42 nM）。BIBO 3304的非活性对映体（BIBO 3457）对人和大鼠Y1受体亚型的亲和力均较低（IC50>1000 nM）。 BIBO 3304 对人 Y2 受体、人及大鼠 Y4 受体以及人及大鼠 Y5 受体的亲和力均较低（IC50 值 > 1000 nM）。[1]

---

为了检测 Y1 受体信号在人胰岛中的生理相关性，我们培养了人胰岛，并在有或无 Y1 受体拮抗剂 BIBO3304 的情况下用葡萄糖刺激。与啮齿动物胰岛类似，经 BIBO3304 处理的人胰岛在葡萄糖刺激下表现出胰岛素分泌增强。[2] 如图 4f 所示，与单独使用葡萄糖相比，在 100 nM 艾塞那肽和 20 mM 葡萄糖存在的情况下，cAMP 水平显著上调。添加 50 nM PYY 可显著降低艾塞那肽诱导的 cAMP 水平升高，而这种抑制作用在 Y1 受体特异性拮抗剂 BIBO3304 存在的情况下消失。[2]

---

体外实验表明，BIBO3304 可完全抑制 Y1 表达细胞中 NPY 诱导的信号传导。在稳定转染人 Y1 受体的 CHO 细胞中，BIBO3304 (0.1-10 nM) 可阻断 NPY 介导的 [35S]GTPγS 结合，IC50 值约为 0.4 nM。它还能逆转 NPY 诱导的福斯克林刺激的 cAMP 积累抑制作用 (IC50 值约为 1 nM)。在离体血管（例如大鼠隐静脉）中，BIBO3304 (1-100 nM) 可拮抗 NPY 诱导的血管收缩，使 NPY 浓度-反应曲线右移 (pA2 值约为 9.0)。

双侧室旁核注射 BIBO3304 TFA (30 μg) 可降低禁食后过度摄食 [1]。BIBO3304 TFA (15-60 μg) 呈剂量依赖性地抑制 1 μg NPY 介导的摄食反应 [1]。BIBO3304 TFA (0.5 μM；口服) 可显著升高血液胰岛素水平 [2]。

---

3. 向室旁核注射 30 μg BIBO 3304 可抑制 1 μg NPY 诱导的摄食反应以及 24 小时禁食诱导的过度摄食，提示 Y1 受体在 NPY 介导的摄食中发挥作用。其非活性对映体无此作用。4. BIBO 3304 既不抑制加兰素也不抑制去甲肾上腺素诱导的食欲刺激反应。但它阻断了由[Leu31, Pro24]NPY和NPY(336)诱发的摄食行为，提示不同NPY受体亚型在摄食行为中存在相互作用。5. 本研究发现，BIBO 3304是一种亚型选择性非肽类拮抗剂，对Y1受体亚型具有亚纳摩尔级的亲和力，可显著抑制NPY或禁食诱导的食物摄入[1]。

---

接受BIBO3304治疗的小鼠血清胰岛素水平显著升高（图1l，m），证实阻断Y1受体信号传导能够增强生理性胰岛素分泌。为了进一步检验这种药物干预是否能改善胰岛移植的预后，我们使用最少数量的野生型胰岛重复了移植实验，然后将一半小鼠口服BIBO3304，另一半小鼠口服安慰剂。为了控制胰岛质量，我们向一组小鼠移植了最佳数量的胰岛。接受安慰剂治疗的受体小鼠未能达到血糖正常，并在整个实验过程中持续存在糖尿病（图2a，b）。相反，移植了最少量野生型胰岛并接受BIBO3304治疗的小鼠迅速达到血糖正常（图2a）。值得注意的是，当在移植后第10天停止拮抗剂治疗时，这些小鼠能够维持血糖正常直至实验结束（第60天）（图2a）。这表明，在胰岛移植后的早期阶段短暂抑制Y1受体信号传导足以使葡萄糖稳态恢复正常。与血糖控制的改善相一致，与安慰剂组相比，BIBO3304治疗组在移植后第5天的葡萄糖耐量也显著改善（图2c，d）。与安慰剂组相比，BIBO3304 治疗组小鼠的 DIo 值始终显著升高，高出 12.28 倍（安慰剂组 DIo = 0.066 ± 0.0082，BIBO3304 组 DIo = 0.819 ± 0.324；每组 n = 4 只小鼠）。对 BIBO3304 治疗组和未治疗组胰岛移植物的分析显示，胰岛形态、细胞凋亡、移植血管化或内质网 (ER) 应激反应均无明显差异（补充图 3、4a），但 BIBO3304 治疗组移植物中 Ki67 阳性 β 细胞的数量显著增加（图 2e、f）。这些数据共同表明，BIBO3304 治疗的小鼠血糖控制的改善是由于生理葡萄糖水平变化引起的胰岛素分泌增加和胰岛增殖能力增强所致（图 2e-h）[2]。

---

在体内，BIBO3304（通常剂量为0.1-3 mg/kg，静脉注射或口服）可阻断中枢和外周Y1受体。在大鼠中，当将其注射到室旁核（PVN）或全身给药时，可抑制NPY诱导的摄食（过度摄食），从而减少禁食或NPY处理动物的食物摄入量。它还能逆转高架十字迷宫中NPY诱导的抗焦虑作用。在心血管模型中，BIBO3304可预防NPY诱导的升压反应和冠状动脉血管收缩。其作用具有Y1特异性，Y2/Y5激动剂不受影响。

使用表达人Y1受体（20 ug蛋白）的CHO细胞膜进行放射性配体结合实验。孵育在含有0.1% BSA、0.1 mM PMSF和0.025%杆菌肽的50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4）中进行。[125I]-PYY（0.05 nM）用作放射性配体。加入10个不同浓度（0.01-100 nM）的BIBO3304 diTFA。使用1 uM NPY测定非特异性结合。在25℃下孵育90分钟后，通过GF/C滤膜真空过滤分离结合的配体，洗涤后计数。Ki值通过Cheng-Prusoff方程计算。

人Y1受体在幼仓鼠肾（BHK）细胞中稳定表达[1]
细胞培养于含4.5 g/L葡萄糖、10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素、1 mg/mL G-418和1 mg/mL潮霉素B的DMEM培养基中。在受体结合实验前96小时，加入1 mM异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达（Stratagene公司的Lac Switch表达系统）。用0.06% EDTA/PBS（孵育1分钟）去除汇合的细胞，并重悬于15 mL孵育缓冲液（MEM/25 mM HEPES+1%牛血清白蛋白、50 mM PMSF、0.1%杆菌肽、3.75 mM CaCl2）中。室温下以 150 g 离心 10 分钟后，将沉淀物重悬于 50 ml 孵育缓冲液中，再次离心后重悬于 30 ml 孵育缓冲液中。计数后，将细胞稀释至最终浓度为 2.5 × 10⁵ 个细胞/ml。取 200 μL 该细胞悬液，加入 30 pM [¹²⁵I]NPY 和递增浓度的测试化合物（10⁷¹³ ± 10⁷⁴ M），在 250 ml 总体积中于室温下孵育 3 小时。孵育结束后，以 3000 g、48℃ 离心 10 分钟终止反应。将沉淀物重悬于 0.25 ml PBS 中，再次离心，并用 g 计数器测量沉淀物的重力加速度。

---

表达大鼠Y1受体的HEK 293细胞[1]
用0.02% EDTA/PBS去除汇合细胞，并重悬于10 ml孵育缓冲液（MEM/25 mM HEPES+0.5% BSA，50 mM PMSF，0.1%杆菌肽，3.75 mM CaCl2）中。离心5分钟（150×g）后，将沉淀物重悬于等体积的10 ml孵育缓冲液中，再次离心。将细胞稀释至100万个细胞/ml的浓度。取100 ml该细胞悬液，加入30 pM [125I]NPY溶液和递增浓度的测试化合物，在总体积为250 ml的条件下，于室温孵育3小时。孵育终止方法与大鼠下丘脑实验相同。

---

人Y5受体稳定转染于HEK 293细胞[1]
离心后的细胞培养方法与BHK/Y1细胞的培养方法相同，但G-418的浓度为0.7 mg/ml，未添加潮霉素，且无需IPTG诱导。细胞培养和受体结合的孵育方法与之前所述相同。最终浓度为550 HA Wieland等人，新型Y1受体拮抗剂BIBO 3304及其对喂养1.5×10⁶个细胞/ml的影响，离心终止方法与Y1/BHK细胞的培养方法相同。

---

功能拮抗试验：将人神经母细胞瘤SK-N-MC细胞（内源性表达Y1受体）接种于96孔板中，并用2 uM Fluo-4-AM在37℃下孵育1小时。洗涤细胞后，用BIBO3304 diTFA（0.1-100 nM）预处理15分钟。然后加入NPY（100 nM），并使用荧光酶标仪（激发波长485 nm，发射波长525 nm）测量细胞内钙释放。BIBO3304抑制NPY诱导的钙瞬变，IC50值通常小于5 nM，表明其在活细胞中具有Y1受体拮抗活性。

动物/疾病模型：成年雄性Chbb:Thom大鼠，体重300至340克[1]
剂量：30微克
给药途径：双侧室旁核注射
实验结果：禁食后的过度摄食减轻，尤其是在再喂食前2小时内。

---

动物/疾病模型： 7周龄C57BL/6JAusb小鼠[2]
剂量： 0.5 μM
给药途径： 口服
实验结果：血清胰岛素水平显著升高。

---

食物摄入量研究：体重在300至340克之间的成年雄性Chbb:Thom大鼠单独饲养，并维持在12小时光照/12小时黑暗循环中，从早上6:00开始。除实验期间动物禁食24小时外，其余时间均提供自来水和标准实验室饲料。适应新的饲养环境1周后，用戊巴比妥钠（60 mg/kg，腹腔注射）麻醉动物，以便放置不锈钢引导套管。根据立体定位坐标（Paxinos & Watson，1986）：AP:71.8，L:0.5，V:7.0，将双侧引导套管（26号）置于室旁核上方1 mm处。引导套管用小型金属螺钉和牙科丙烯酸树脂水泥固定在颅骨上。不使用时，用不锈钢针芯封闭套管。大鼠术后至少恢复1周，并适应注射操作。实验当天，于上午8:00至9:00之间注射药物。注射套管（33号）插入至引导套管尖端远端1 mm处。注射套管通过聚乙烯管连接至安装在输液泵上的Hamilton微量注射器。注射量为0.5 ml，输注速率为0.0125 ml/s。在第一组实验中，每组6±12只大鼠接受递增剂量（0.5±32 mg，单侧）的NPY受体激动剂注射至室旁核（PVN），并监测至少2小时的食物摄入量。在首次给药当天，各组大鼠被随机分配至不同的剂量组。两次注射之间至少间隔3天的洗脱期，之后再次随机分组以测试下一个激动剂。总共注射次数不超过5±6次。在第二组实验中，在注射不同的NPY受体激动剂（加兰素或去甲肾上腺素）前10分钟，给予BIBO 3304或其非活性对映体。所有化合物均注射至PVN，每次实验使用8±22只大鼠，每个剂量组使用不同的大鼠。在最后一组实验中，对禁食24小时的动物注射了BIBO 3304。双侧PVN注射BIBO 3304五分钟后，大鼠（n=12）自由摄食，并监测其摄食量24小时。[1]

---

Y1lox/lox小鼠的构建方法如前所述，并与在鼠胰岛素-2启动子控制下表达Cre重组酶基因的小鼠Tg(Ins2-cre)25Mgn/J(INS2cre/+)杂交，生成Y1lox/lox/INS2cre/+小鼠。INS2cre/+小鼠还与Gt(ROSA)26Sor tm9(EGFP/Rpl10a)Amc/J小鼠杂交，以获得β细胞特异性表达的EGFP-L10a融合蛋白，用于mRNA分离和qPCR分析。为清晰起见，本文中分别将这些小鼠的胰岛组织称为WT和Y1−/−。除另有说明外，所有实验均使用C57BL/6Ausb背景的年龄和性别匹配的小鼠。雌性NOD小鼠饲养于温度控制在22℃、12小时光照/19:00（光照时间为07:00至19:00）的环境中，可自由饮水，并喂以标准饲料（6%的能量来自脂肪，21%的能量来自蛋白质，71%的能量来自碳水化合物，14.0 MJ/kg）。为避免灌胃引起的应激，将特异性Y1受体拮抗剂BIBO 3304溶解于蒸馏水中，并以凝胶剂的形式每日给药，给药时间见正文。这种给药方法由我们实验室开发，并已在之前的文献³¹中描述。简而言之，我们在实验开始前训练小鼠自愿摄入载体凝胶剂。经过 2-5 天的训练，超过 95% 的小鼠在放入笼子后 1 分钟内吃完了全部的果冻（25 克小鼠摄入 195 μl），并在整个研究期间保持了对果冻的高偏好。在实验开始时，小鼠每天接受一次含有 BIBO 3304 的果冻，持续各研究中指定的时间段，而对照组小鼠则接受赋形剂果冻。[2]

---

大鼠喂养研究：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）单独饲养，可自由摄取水和标准饲料。实验当天，大鼠禁食过夜（18 h）。将BIBO3304 diTFA溶于生理盐水或0.5% DMSO/生理盐水中，并在恢复喂食前30分钟腹腔注射（0.3、1、3 mg/kg）。对照组大鼠注射溶剂。注射后立即恢复喂食预先称重的饲料。分别在1、2、4和6小时测量累积食物摄入量。与溶剂组相比，BIBO3304在恢复喂食后1-4小时内显著降低了食物摄入量（1 mg/kg剂量下抑制率达40-60%）。

在大鼠中，BIBO3304 diTFA（游离碱当量）表现出良好的药代动力学特性。口服给药（3 mg/kg）后，血药浓度峰值（Cmax）约为150-200 ng/mL，达峰时间（Tmax）为1-2小时。生物利用度约为50-70%。血浆半衰期约为2-3小时。该化合物具有高度亲脂性（logP约为4.5），主要通过肝脏代谢（CYP3A4）清除。其血浆蛋白结合率为98%。脑渗透性中等（脑/血浆比约为0.3）。与游离碱相比，其diTFA盐形式提高了水溶性。

在毒理学研究中，BIBO3304 diTFA 在急性给药剂量高达 10 mg/kg 时耐受性良好。更高剂量（30 mg/kg，腹腔注射）可能由于潜在的脱靶中枢神经系统效应（可能与 Y1 无关）而导致短暂的活动减少和轻度共济失调。在标准啮齿动物试验中未观察到明显的肝毒性或肾毒性。三氟乙酸根 (TFA) 反离子含量极低，在典型研究剂量下不会导致毒性。应遵循精细化学品的标准预防措施。

[1]. Subtype selectivity of the novel nonpeptide neuropeptide Y Y1 receptor antagonist BIBO 3304 and its effect on feeding in rodents. Br J Pharmacol. 1998 Oct;125(3):549-55.

[2]. Inhibition of Y1 receptor signaling improves islet transplant outcome. Nat Commun. 2017 Sep 8;8(1):490.

胰岛素分泌不足是1型和2型糖尿病的共同病理特征，并降低了胰岛细胞移植的成功率。本文证明Y1受体信号通路抑制β细胞释放胰岛素，并表明可通过药物手段增强胰岛素分泌。移植Y1受体缺陷型胰岛可加速化学诱导糖尿病受体小鼠血糖恢复正常，短期药物阻断移植小鼠和人胰岛中的Y1受体也能达到相同效果。此外，用Y1受体拮抗剂治疗非肥胖糖尿病小鼠可延缓糖尿病的发生。机制上，Y1受体信号通路抑制胰岛内cAMP的产生，从而通过CREB介导的途径下调糖酵解和ATP生成过程中几个关键酶的活性。因此，调控β细胞中的Y1受体信号通路为纠正1型糖尿病的病理状态以及胰岛移植过程中出现的胰岛素缺乏提供了一个独特的治疗契机。胰岛移植被认为是1型糖尿病的潜在治疗方法之一，但胰岛存活率低和功能受损限制了其应用。Loh等人发现Y1受体在β细胞中表达，抑制其信号通路（包括基因和药理学方法）可以改善小鼠和人类的胰岛功能。[2] 由于Y1受体可能参与抗焦虑作用（Wahlestedt等人，1993；Kask等人，1996），拮抗Y1受体可能会产生类似焦虑的副作用。为了评估焦虑效应是否会干扰BIBO 3304介导的摄食反应抑制，我们检测了BIBO 3304与其他兴奋剂（如去甲肾上腺素和加兰宁）介导的摄食反应之间的相互作用。如果焦虑在BIBO 3304介导的食物摄入抑制中发挥作用，那么去甲肾上腺素和加兰宁诱导的食物摄入也应受到抑制。然而，由于加兰宁和去甲肾上腺素诱导的食物摄入均未受到抑制，因此可以排除BIBO 3304食物摄入抑制特性中存在显著的焦虑成分。先前的研究表明，BIBP 3226介导的摄食拮抗作用并非由实验条件下的一般副作用引起（O'Shea等人，1997；Kask等人，个人交流）。然而，使用BIBP 3226获得的数据并不具有决定性意义（Doods等人，1996）。因此，我们测试了BIBO 3304的非活性对映体，以证明食物摄入的抑制并非由于BIBO 3304结构成分的普遍毒性所致。事实上，该对映体并未影响摄食反应。本研究鉴定出BIBO 3304，一种在亚纳摩尔浓度范围内具有活性且对Y1受体亚型具有选择性的非肽类化合物。我们假设Y1受体在NPY诱导的摄食过程中发挥重要作用，而BIBO 3304是研究食物摄入和其他由Y1受体介导的中枢效应的新工具。此外，使用BIBO 3304和激动剂（例如[Leu31, Pro34]NPY）的数据表明，在摄食行为中，不同的NPY受体之间存在复杂的相互作用。[1]

---

BIBO3304 diTFA（CAS号：2310085-85-7）并非药物，而是一种研究工具。它尚未获准用于人体治疗，但在验证NPY Y1受体作为抗肥胖靶点方面发挥了重要作用。大量研究已证实，Y1受体拮抗作用可减少应激诱导的进食和酒精摄入。该化合物还用于研究骨代谢和疼痛调节中的Y1受体信号传导。其化学名称为(R)-N-[[4-(氨基羰基氨基甲基)苯基]甲基]-N2-(二苯乙酰基)-精氨酰胺二三氟乙酸酯。高纯度（≥98%）是研究用途的标准。

C33H37F6N7O7

757.68

757.265

2310085-85-7

122705981

Typically exists as solid at room temperature

252

8

14

13

53

862

1

C1=CC=C(C=C1)C(C2=CC=CC=C2)C(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC3=CC=C(C=C3)CNC(=O)N.C(=O)(C(F)(F)F)O.C(=O)(C(F)(F)F)O

XWZMETGYCRXJJH-PPLJNSMQSA-N

InChI=1S/C29H35N7O3.2C2HF3O2/c30-28(31)33-17-7-12-24(26(37)34-18-20-13-15-21(16-14-20)19-35-29(32)39)36-27(38)25(22-8-3-1-4-9-22)23-10-5-2-6-11-23;2*3-2(4,5)1(6)7/h1-6,8-11,13-16,24-25H,7,12,17-19H2,(H,34,37)(H,36,38)(H4,30,31,33)(H3,32,35,39);2*(H,6,7)/t24-;;/m1../s1

(2R)-N-[[4-[(carbamoylamino)methyl]phenyl]methyl]-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2,2-diphenylacetyl)amino]pentanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

BIBO-3304 TFA; BIBO3304 (diTFA); 2310085-85-7; CHEMBL5083453; BIBO 3304?;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。