| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 靶点 |
Neuropeptide Y (NPY) Y1 receptor
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| 体外研究 (In Vitro) |
1.合成了新型Y1选择性精氨酸衍生物BIBO 3304（（R）-N-[[4-（氨基羰基氨基甲基）-苯基]甲基]-N2-（二苯乙酰基）-精氨酸三氟乙酸酯），并对其亚型选择性、体外拮抗性和食物摄入抑制性进行了检测。2.BIBO 3304对人和大鼠Y1受体均显示亚纳米亲和力（IC50值分别为0.38+/-0.06 nM和0.72+/-0.42 nM）。BIBO 3304（BIBO 3457）的非活性对映体对人和大鼠Y1受体亚型的亲和力都很低（IC50>1000 nM）。BIBO 3304对人Y2受体、人和大鼠Y4受体以及人和大白鼠Y5受体显示出低亲和力（IC50值>1000 nM）。[1]
为了测试Y1受体信号在人胰岛中的生理相关性，在Y1受体拮抗剂BIBO3304存在或不存在的情况下，用葡萄糖培养和刺激人胰岛。与啮齿动物的胰岛类似，用BIBO3304处理的人胰岛在葡萄糖挑战下表现出增强的胰岛素分泌[2]。 如图4f所示，与单独使用葡萄糖相比，在100 nM艾塞那肽和20 mM葡萄糖的存在下，cAMP显著上调。添加50 nM PYY能够显著减少艾塞那肽诱导的cAMP增加，并且在Y1受体特异性拮抗剂BIBO3304[2]的存在下，这种抑制作用被消除。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
BIBO3304 TFA（30 μg；双侧室旁核注射）可减少空腹后食欲亢进[1]。 BIBO3304 TFA (15-60 μg) 剂量依赖性地抑制 1 μg NPY 介导的进食反应 [1]。 BIBO3304 TFA（0.5 μM；口服）可显着提高血液胰岛素水平 [2]。
3.脑室旁核注射30微克BIBO 3304抑制了1微克NPY诱导的摄食反应以及24小时禁食诱导的摄食过度，这暗示Y1受体在NPY介导的摄食中起作用。非活性对映体没有影响。4.BIBO 3304既不抑制甘丙肽，也不抑制去甲肾上腺素诱导的食欲反应。但它阻断了[Leu31、Pro24]NPY和NPY（3 36）引起的摄食行为，表明不同NPY受体亚型在摄食行为中相互作用。5.本研究表明，BIBO 3304是一种亚型选择性非肽拮抗剂，对Y1受体亚型具有亚纳米亲和力，可显著抑制NPY或禁食诱导的食物摄入[1]。 接受BIBO3304的小鼠血清胰岛素水平显著升高（图1l，m），证实阻断Y1受体信号传导能够增强生理触发的胰岛素分泌。为了进一步测试这种药物干预是否可以改善胰岛移植的结果，我们使用最少数量的WT胰岛重复了移植实验，然后用BIBO3304口服一半的小鼠队列，另一半用安慰剂治疗。作为胰岛质量的对照，一组小鼠移植了最佳胰岛质量。接受安慰剂治疗的受体小鼠未能达到正常血糖，在整个实验过程中仍处于糖尿病状态（图2a，b）。相比之下，移植了少量WT胰岛并用BIBO3304治疗的小鼠迅速达到了正常血糖水平（图2a）。令人惊讶的是，当移植后第10天停止拮抗剂治疗时，这些小鼠能够维持正常血糖，直到第60天实验结束（图2a）。这表明，胰岛移植后早期对Y1受体信号传导的短暂抑制足以使葡萄糖稳态正常化。与血糖控制的改善一致，与安慰剂组相比，BIBO3304治疗组在移植后第5天的葡萄糖耐量也得到了显著改善（图2c，d）。一致地，BIBO3304治疗的小鼠也表现出优越的DIo，比安慰剂治疗的小鼠高12.28倍（DIo=0.066±0.0082，安慰剂组为0.819±0.324；每组4只小鼠）。与未经处理的胰岛移植物相比，经处理的BIBO3304的分析没有显示胰岛形态、凋亡、移植物血管化或内质网（ER）应激反应有任何明显差异（补充图3,4a），然而，经BIBO3304-处理的移植物中Ki67阳性β细胞的数量显著增加（图2e，f）。总之，这些数据表明，BIBO3304治疗小鼠血糖控制的改善是胰岛素分泌和胰岛增殖能力增加的结果，以应对生理葡萄糖水平的变化（图2e-h）[2]。 |
| 细胞实验 |
人Y1受体在幼仓鼠肾（BHK）细胞中稳定表达[1]
细胞在含有4.5 g/l葡萄糖、10%胎牛血清、1%PENStrep、1 mg ml71 g-418、1 mg ml 71潮霉素B的DMEM中生长。在受体结合试验前96小时，加入1 mM异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）以诱导表达（Stratagene的Lac-Switch表达系统）。用0.06%EDTA/PBS去除融合细胞（孵育1分钟），并将其重新悬浮在15毫升孵育液中（MEM/25 mM HEPES+1%牛血清白蛋白，50 mM PMSF，0.1%杆菌肽，3.75 mM CaCl2）。在室温下离心10分钟（150 6 g）后，将沉淀物重新悬浮在50 ml培养基中，然后重新悬浮在30 ml培养基上。计数后，将细胞稀释至2.5 6 105个细胞ml71的®nal浓度。将200微升这种细胞悬浮液在室温下与30 pM[125I]NPY和增加浓度的试验化合物（10713±1074 M）一起孵育3小时，总体积为250 ml。在48℃下离心3000 6 g，10分钟后停止孵育。用0.25ml PBS重新离心沉淀物，并在g计数器中测量沉淀物。 表达大鼠Y1受体的人胚胎肾（HEK）293细胞[1] 用0.02%EDTA/PBS去除融合的细胞，并将其重新悬浮在10ml温育液中（MEM/25mM HEPES+0.5%BSA，50mM PMSF，0.1%杆菌肽，3.75mM CaCl2）。离心5分钟（150-6g）后，将沉淀物以等体积重新悬浮，并在10ml温育箱中进一步离心。将细胞稀释至1mio细胞ml71的浓度。将100ml该细胞悬浮液与30pM[125I]NPY溶液在室温下孵育3小时，并在250ml的总体积中增加试验化合物的浓度。按照大鼠下丘脑的描述停止孵育。 人Y5受体在HEK 293细胞中稳定转染[1] 按照BHK/Y1细胞的描述培养离心细胞，不同之处在于使用0.7mg ml71 G-418的浓度，不添加潮霉素，也不需要IPTG诱导。按照所述进行细胞培养和受体结合的孵育。最终浓度为550 H.A.Wieland等人的新型Y1受体拮抗剂BIBO 3304，其对喂食1.5 6 106个细胞ml71的影响，并按照Y1/BHK细胞的描述停止离心。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：成年雄性Chbb:Thom大鼠，体重300至340克[1]
剂量：30微克 给药途径：双侧室旁核注射 实验结果：禁食后的过度摄食减轻，尤其是在再喂食前2小时内。 动物/疾病模型： 7周龄C57BL/6JAusb小鼠[2] 剂量： 0.5 μM 给药途径： 口服 实验结果：血清胰岛素水平显著升高。\n \n\n食物摄入量研究：体重在300至340克之间的成年雄性Chbb:Thom大鼠单独饲养，并维持在12小时光照/12小时黑暗循环中，从早上6:00开始。除实验期间动物禁食24小时外，其余时间均提供自来水和标准实验室饲料。适应新的饲养环境1周后，用戊巴比妥钠（60 mg/kg，腹腔注射）麻醉动物，以便放置不锈钢引导套管。根据立体定位坐标（Paxinos & Watson，1986）：AP:71.8，L:0.5，V:7.0，将双侧引导套管（26号）置于室旁核上方1 mm处。引导套管用小型金属螺钉和牙科丙烯酸树脂水泥固定在颅骨上。不使用时，用不锈钢针芯封闭套管。大鼠术后至少恢复1周，并适应注射操作。实验当天，于上午8:00至9:00之间注射药物。注射套管（33号）插入至引导套管尖端远端1 mm处。注射套管通过聚乙烯管连接至安装在输液泵上的Hamilton微量注射器。注射量为0.5 ml，输注速率为0.0125 ml/s。在第一组实验中，每组6±12只大鼠接受递增剂量（0.5±32 mg，单侧）的NPY受体激动剂注射至室旁核（PVN），并监测至少2小时的食物摄入量。在首次给药当天，各组大鼠被随机分配至不同的剂量组。两次注射之间至少间隔3天的洗脱期，之后再次随机分组以测试下一个激动剂。总共注射次数不超过5±6次。在第二组实验中，在注射不同的NPY受体激动剂（加兰素或去甲肾上腺素）前10分钟，给予BIBO 3304或其非活性对映体。所有化合物均注射至PVN，每次实验使用8±22只大鼠，每个剂量组使用不同的大鼠。在最后一组实验中，对禁食24小时的动物注射了BIBO 3304。双侧PVN注射BIBO 3304五分钟后，大鼠（n=12）自由摄食，并监测其摄食量24小时。[1] \n\nY1lox/lox小鼠的构建方法如前所述，并与在鼠胰岛素-2启动子控制下表达Cre重组酶基因的小鼠Tg(Ins2-cre)25Mgn/J(INS2cre/+)杂交，以获得Y1lox/lox/INS2cre/+小鼠。INS2cre/+小鼠还与Gt(ROSA)26Sor tm9(EGFP/Rpl10a)Amc/J小鼠杂交，以产生β细胞特异性表达的EGFP-L10a融合蛋白，用于mRNA分离和qPCR分析。为清晰起见，本文中分别将这些小鼠的胰岛组织称为WT和Y1−/−。除另有说明外，所有实验均使用C57BL/6Ausb背景的年龄和性别匹配的小鼠。雌性NOD小鼠饲养于温度控制在22℃、12小时光照/19:00（光照时间为07:00至19:00）的环境中，可自由饮水，并喂以标准饲料（6%的能量来自脂肪，21%的能量来自蛋白质，71%的能量来自碳水化合物，14.0 MJ/kg）。为避免灌胃引起的应激，将特异性Y1受体拮抗剂BIBO 3304溶解于蒸馏水中，并以凝胶剂的形式每日给药，给药时间见正文。这种给药方法由我们实验室开发，并已在之前的文献31中描述。简而言之，我们在实验开始前训练小鼠自愿摄入载体凝胶剂。经过 2-5 天的训练，超过 95% 的小鼠在放入笼子后 1 分钟内吃完了全部的果冻（25 克小鼠摄入 195 μl），并在整个研究期间保持了对果冻的高偏好。在实验开始时，小鼠每天接受一次含有 BIBO 3304 的果冻，持续各研究中指定的时间段，而对照组小鼠则接受赋形剂果冻。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
胰岛素分泌不足是1型和2型糖尿病的病理特征，也会降低胰岛细胞移植的成功率。本文证明Y1受体信号通路抑制β细胞的胰岛素释放，并表明可以通过药物手段增强胰岛素分泌。移植Y1受体缺陷的胰岛可以加速化学诱导糖尿病受体小鼠高血糖的恢复正常，短期药物阻断移植的小鼠和人胰岛中的Y1受体也能达到同样的效果。此外，用Y1受体拮抗剂治疗非肥胖糖尿病小鼠可以延缓糖尿病的发生。机制上，Y1受体信号通路抑制胰岛中cAMP的产生，进而通过CREB介导的通路下调糖酵解和ATP生成过程中的几种关键酶的活性。因此，调控β细胞中的Y1受体信号通路为纠正1型糖尿病病理状态以及胰岛移植过程中出现的胰岛素缺乏症提供了一种独特的治疗契机。胰岛移植被认为是1型糖尿病的潜在治疗方法之一，但胰岛存活率低和功能受损限制了该方法的应用。Loh等人发现Y1受体在β细胞中表达，抑制其信号通路（包括基因和药理学方法）可以改善小鼠和人类的胰岛功能。[2] 由于Y1受体可能参与抗焦虑作用（Wahlestedt等人，1993；Kask等人，1996），因此拮抗Y1受体可能会产生类似焦虑的副作用。为了评估可能的焦虑效应是否会干扰BIBO 3304介导的摄食反应抑制，我们考察了BIBO 3304与其他刺激剂（如去甲肾上腺素和加兰素）介导的摄食反应之间的相互作用。如果焦虑在BIBO 3304介导的食物摄入抑制中发挥作用，那么去甲肾上腺素和加兰素诱导的食物摄入也应该受到抑制。但由于加兰素和去甲肾上腺素诱导的食物摄入均未受到抑制，因此可以排除BIBO 3304食物摄入抑制特性中存在显著的焦虑成分。此前已有研究表明，BIBP 3226介导的摄食拮抗作用并非由实验条件下的一般副作用引起（O'Shea等，1997；Kask等，个人交流）。然而，我们使用BIBP 3226获得的数据并不具有决定性（Doods等人，1996）。因此，我们测试了BIBO 3304的非活性对映体，以证明食物摄入抑制并非由BIBO 3304结构成分的普遍毒性所致。事实上，该对映体并未影响摄食反应。本研究鉴定出BIBO 3304，这是一种非肽类化合物，其在亚纳摩尔浓度范围内具有活性，并对Y1受体亚型具有选择性。我们推测Y1受体在NPY诱导的摄食中发挥重要作用，而BIBO 3304是一种研究食物摄入和其他由Y1受体介导的中枢效应的新工具。此外，使用 BIBO 3304 以及激动剂（例如 [Leu31, Pro34]NPY）提供的数据表明，不同的 NPY 受体在摄食行为中存在复杂的相互作用。[1]
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| 分子式 |
C33H37F6N7O7
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|---|---|
| 分子量 |
757.68
|
| 精确质量 |
757.265
|
| CAS号 |
2310085-85-7
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| PubChem CID |
122705981
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| tPSA |
252
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
8
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
14
|
| 可旋转键数目(RBC) |
13
|
| 重原子数目 |
53
|
| 分子复杂度/Complexity |
862
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C(C2=CC=CC=C2)C(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC3=CC=C(C=C3)CNC(=O)N.C(=O)(C(F)(F)F)O.C(=O)(C(F)(F)F)O
|
| InChi Key |
XWZMETGYCRXJJH-PPLJNSMQSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H35N7O3.2C2HF3O2/c30-28(31)33-17-7-12-24(26(37)34-18-20-13-15-21(16-14-20)19-35-29(32)39)36-27(38)25(22-8-3-1-4-9-22)23-10-5-2-6-11-23;2*3-2(4,5)1(6)7/h1-6,8-11,13-16,24-25H,7,12,17-19H2,(H,34,37)(H,36,38)(H4,30,31,33)(H3,32,35,39);2*(H,6,7)/t24-;;/m1../s1
|
| 化学名 |
(2R)-N-[[4-[(carbamoylamino)methyl]phenyl]methyl]-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2,2-diphenylacetyl)amino]pentanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| 别名 |
BIBO-3304 TFA; BIBO3304 (diTFA); 2310085-85-7; CHEMBL5083453; BIBO 3304?;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3198 mL | 6.5991 mL | 13.1982 mL | |
| 5 mM | 0.2640 mL | 1.3198 mL | 2.6396 mL | |
| 10 mM | 0.1320 mL | 0.6599 mL | 1.3198 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
NNC0165-1273
Neuropeptide Y (scrambled)
NNC0165-1273 TFA
SCH 430765
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