| 规格 | 价格 | |
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| Other Sizes |
| 靶点 |
KIF18A
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| 体外研究 (In Vitro) |
在这项研究中，研究人员筛选了多种化合物的小分子文库，用于选择性抑制KIF18A mt - atp酶运动活性。在细胞中发现了两个化合物hit，它们表型复制了KIF18A KD的作用;这些hit在结构上不同于KIF18A抑制剂BTB-1)。接下来，研究人员发起了一项药物化学筛选，以优化有希望的Hit，化合物3 (AM-7710);结构-活性关系(SAR)研究产生了四个有希望的系列类似物，分别代表早期SAR导联(AM-0277, AM-1882)和晚期SAR导联(AM-5308， AM-9022 )(图(Fig.2a).2a)。与AM-7710相比，这四种化合物在kif18a抑制活性和细胞效力方面均有显著改善，并且对多种运动蛋白表现出良好的特异性，除了KIF19A运动蛋白(图1)。2b2b和扩展数据图2a-c)。[1]
5株细胞株对AM-0277、AM-1882和AM-9022 敏感，平均半最大有效浓度(EC50)分别为0.047µM、0.021µM和0.045µM。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
口服候选AM-9022，剂量为10 mg / kg，在小鼠中获得高血浆暴露，并在ovcar - 3ph3有丝分裂标记物检测中显示出两位数的纳摩尔效力(扩展数据图8a)。AM-9022 对人和小鼠KIF18A的运动活性有相似的抑制作用。[1]
AM-9022使OVCAR-3肿瘤中pH3有丝分裂标志物水平升高3.4倍(P值= 0.042)，肿瘤中化合物暴露量高于血浆(图6a)。为了评估口服候选药物的疗效和耐受性，已建立OVCAR-3肿瘤的小鼠以30 mg / kg /日的剂量给予载药或AM-9022，持续18 d。令人鼓舞的是，AM-9022抑制肿瘤生长(P值= 1.24 × 10−130)，具有TR (95% TR, 10只无肿瘤小鼠中的6只)和体重减轻的证据(图(Fig.6b)。研究结束时，AM-9022的血浆AUC值为53µM·h。[1] 已建立JIMT-1肿瘤的小鼠分别给予30和100 mg / kg / d的载药或AM-9022，持续21 d。AM-9022 在30和100 mg / kg剂量下抑制肿瘤生长(P值≤5.1 × 10−13)，在耐受良好的剂量下，TR(分别为16%和94%)(图6c)。研究结束时，JIMT-1模型中30 mg / kg AM-9022的血浆AUC值比OVCAR-3模型高3.7倍。[1] 已建立PDX肿瘤的小鼠给予载药或AM-9022，剂量为60 mg / kg，每日≥28 d。超过28天的治疗时间取决于抗癌活性水平和肿瘤是否达到预定的大小临界值。我们纳入了CTG-0017和CTG-0437模型停止治疗后的观察期，以评估持久性和肿瘤再生。对AM-9022 处理的敏感性模式在TNBC PDX组中有所不同(图(Fig.6d)。值得注意的是，AM-9022在CTG-0017模型中抑制肿瘤生长(P值= 6.5 × 10−164)，具有TR (83% TR)的证据，导致第58天90%的小鼠无肿瘤。AM-9022在CTG-0437模型中抑制肿瘤生长(101% TGI, P值= 2.2 × 10−101)。AM-9022在CTG-0888模型中效果较差(63% TGI, P值= 5.1 × 10−31)，在CTG-1019模型中无抗癌作用(图(Fig.6d)。与之前一样，AM-9022对KIF18A活性的抑制小鼠耐受良好(图6d)。综上所述，这些数据表明口服候选AM-9022在耐受良好的剂量下，对六种人类乳腺和卵巢肿瘤模型中的五种具有显著的抗癌作用，导致OVCAR-3、JIMT-1、CTG-0017和CTG-0437模型出现TR或停滞。[1] |
| 酶活实验 |
运动蛋白测定[1]
使用ADP-Glo发光法(Promega)评估运动活性，使用先前描述的分析条件。表达和纯化重组截断的马达蛋白(hKIF18A (1 - 467,4 nM)， mKIF18A (1 - 467,4 nM)， hKIF19A(1 - 463,32或100 nM)， hKIF18B (1 - 436,8 nM)， hKIFC1 (266 - 673,4 nM))或获得(hEG5, 4 nM;hCENP-E, 8 nM)。化合物用30µM ATP和30µg ml - 1 MTs和上述运动蛋白浓度进行评估;数据来自两个或四个独立的实验。KIF18A化合物用hif18a (160 nM)检测或不检测MTs(0或30µg ml−1);数据来自两个独立的实验，一式两份。KIF18A化合物用30或300µM ATP和5或80µg ml - 1 mt的hKIF18A (4 nM)进行评估;数据来自一个实验。am -7710系列模拟mt - atp酶IC50值来自Amgen的Genedata Screener数据存储(扩展数据图Fig. Fig.2a2a)。 酶联无机磷酸盐马达测定[1] KIF18A化合物(1µM)与一组运动蛋白(hCENP-E, hEG5, hKIFC3, hKIF3C，人染色体动力学蛋白，hMCAK, hMKLP1, hMKLP2)进行酶联无机磷酸盐测定，根据制造商的方案和前面所述。数据来自一个或两个独立的实验，有两份或三份。研究由Cytoskeleton进行[1] Kinome结合试验[1] KIF18A化合物(1µM)与一组激酶(n = 96)使用上文所述的竞争结合法进行评估。数据来自一个实验。研究由Eurofins DiscoverX进行。[1] Tubulin-polymerization化验[1]< br > 荧光微管蛋白聚合实验根据制造商的方案(Cytoskeleton)，用DMSO、KIF18A化合物(10µM)、紫杉醇(5µM)和诺可达唑(5µM)进行。微管蛋白聚合使用SpectraMax M5平板阅读器(Molecular Devices)进行检测，检测波长为440 nm，在37°C下每分钟测量一次，持续90分钟。数据来自一个或三个独立的实验。数据以平均荧光强度与时间的关系以及相应的AUC值作图。 |
| 细胞实验 |
细胞生长测定(化合物)细胞生长测定如前所述28。细胞株(n = 11)分别用DMSO或AM-0277、AM-1882、AM-9022 和palbociclib(最大浓度6µM)或ispinesib(最大浓度0.6µM)在19点或17点浓度范围内处理96 h。数据来自两个独立的实验，一式两份。每口井从相同数量的油田收集成像数据。计数POC的计算公式为(计数POC =(化合物处理过的核计数)÷ (dmso处理过的核计数)× 100)。如果在6µM时最大响应<50%，则认为该细胞系不敏感。测定敏感细胞系组的EC50平均值。对于OVCAR-8和OVCAR-8 ADRRES细胞生长分析，细胞用AM-1882和AM-9022(最大浓度为6µM)或紫杉醇和阿霉素(最大浓度为1µM)在19点浓度范围内处理96小时，有或没有p- gp抑制剂GF120918(1µM)。在两个独立的实验中评估了使用或不使用P-gp抑制剂的OVCAR-8细胞系。将数据绘制成具有相应EC50计数值的浓度-反应曲线。[1]
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| 动物实验 |
OVCAR-3 肿瘤药效学 (pH3 免疫测定) 肿瘤药效学测定按先前所述方法进行28。根据肿瘤大小，将动物随机分为治疗组（每组 n = 3 只小鼠），并分别给予赋形剂（腹腔注射或口服）、AM-1882（100 mg/kg，腹腔注射）、AM-5308（50 mg/kg，腹腔注射）或 AM-9022（30 mg/kg，口服）。治疗 24 小时后收集肿瘤和血浆，并进行药效学 (pH3) 或药代动力学 (PK)（血浆、肿瘤）分析。绘制肿瘤药效学、血浆药代动力学和肿瘤药代动力学数据图。采用单因素方差分析（ANOVA）在0.05的显著性水平下，并使用Dunnett多重比较校正法确定AM-1882和AM-5308相对于载体的统计学显著性；采用双尾t检验在0.05的显著性水平下，并使用Welch校正法确定AM-9022相对于载体的统计学显著性。[1]
细胞系来源的异种移植瘤模型疗效（口服给药）：将OVCAR-3细胞（5.0 × 10⁶）皮下注射到小鼠右侧腹部。根据肿瘤大小将动物随机分为治疗组（每组n = 10只小鼠），并分别口服给予载体或AM-9022，剂量为30 mg/kg/天，连续18天。在第45天最后一次给药后，按照上述方法进行血浆药代动力学分析。第45天未检测到肿瘤的小鼠被归类为无瘤小鼠。将 JIMT-1 细胞 (1.0 × 10⁷) 皮下注射到小鼠右侧腹部。根据肿瘤大小，将动物随机分为治疗组（每组 n = 10 只小鼠），并连续 21 天每日口服给予赋形剂或 AM-9022（30 或 100 mg/kg）。在第 40 天最后一次给药后，按上述方法进行血浆药代动力学分析。第 40 天未检测到肿瘤的小鼠被归类为无瘤小鼠。[1] 患者来源异种移植瘤模型疗效（口服给药）将来自各 TNBC 模型（CTG-0017、CTG-0437、CTG-0888 和 CTG-1019；详情见补充表 6）的低代次 PDX 肿瘤碎片植入小鼠体内。当肿瘤体积达到 1,000–1,500 mm³ 时，收集肿瘤组织，并将肿瘤碎片皮下植入左侧腹部。根据肿瘤体积大小，将动物随机分为治疗组（每组 10 只小鼠），并分别每日口服给予赋形剂或 AM-9022（60 mg/kg），连续给药 ≥27 天。对照组的平均肿瘤体积达到 1,500 mm³ 时终止研究；若未达到肿瘤体积阈值，则继续给药至第 28 天以后。 CTG-0017 研究的给药于第 27 天终止，随后进入无药观察期至第 58 天。CTG-0437 研究的给药于第 27 天终止，随后进入无药观察期至第 34 天。CTG-0888 和 CTG-1019 的给药分别于第 43 天（最后一次测量于第 41 天）和第 52 天（最后一次测量于第 51 天）终止。未检测到肿瘤的小鼠被归类为无肿瘤组。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
染色体不稳定性（CIN）是癌症的标志性特征之一，由有丝分裂过程中染色体分离的持续错误引起。侵袭性癌症，如高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）和三阴性乳腺癌（TNBC），具有较高的CIN和TP53突变频率。本文研究表明，KIF18A马达蛋白抑制剂能够激活有丝分裂检查点，并选择性地杀死染色体不稳定的癌细胞。在具有CIN特征的TP53突变型HGSOC和TNBC细胞系中，KIF18A抑制剂的敏感性显著增强，其中包括部分CCNE1扩增、CDK4-CDK6抑制剂耐药和BRCA1改变的细胞系模型。与其他抗有丝分裂药物不同，我们的KIF18A抑制剂对体外培养的人骨髓细胞的损害极小。在小鼠中，抑制 KIF18A 可产生显著的抗癌效果，在耐受剂量下，人类 HGSOC 和 TNBC 模型中均观察到肿瘤消退。总而言之，我们的研究结果为通过抑制 KIF18A 选择性靶向 CIN 癌症提供了一种合理的治疗策略。[1]
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| 分子式 |
C27H36F2N6O4S
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|---|---|
| 分子量 |
578.67
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| 精确质量 |
578.24868
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| CAS号 |
2446872-46-2
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| PubChem CID |
148785380
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4.2
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| tPSA |
136Ų
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| InChi Key |
OLCRYQGHHMGOJZ-LJQANCHMSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H36F2N6O4S/c1-18-15-23(32-25(30-18)35-13-9-27(28,29)10-14-35)31-24(37)21-4-3-20(33-40(38,39)19(2)17-36)16-22(21)34-11-7-26(5-6-26)8-12-34/h3-4,15-16,19,33,36H,5-14,17H2,1-2H3,(H,30,31,32,37)/t19-/m1/s1
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| 化学名 |
2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-[2-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-6-methylpyrimidin-4-yl]-4-[[(2R)-1-hydroxypropan-2-yl]sulfonylamino]benzamide
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| 别名 |
AM-9022; CHEMBL5071728; SCHEMBL22119488; OLCRYQGHHMGOJZ-LJQANCHMSA-N; BDBM535533; EX-A8980; US11236069, Example 5-1;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7281 mL | 8.6405 mL | 17.2810 mL | |
| 5 mM | 0.3456 mL | 1.7281 mL | 3.4562 mL | |
| 10 mM | 0.1728 mL | 0.8641 mL | 1.7281 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
IKP-104
Tubulin/VEGFR-2-IN-1
Tubulin-IN-53
Tubulin/CDC5L-IN-1
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