ODN 2395 sodium

目录号: V87017 纯度: ≥98%
ODN 2395 钠是 C 类寡核苷酸,可用作疫苗佐剂。
ODN 2395 sodium 产品类别: TLR
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
ODN 2395 钠盐是一种 C 类寡核苷酸,可用作疫苗佐剂。ODN 2395 钠盐也是一种 TLR9 激动剂。序列:5'-tcgtcgttttcggcgc:gcgccg-3'。(注:碱基为硫代磷酸酯,ODN 2395 包含部分回文序列 cggcgc:gcgccg)
ODN 2395 钠盐是一种 C 类 CpG 寡脱氧核苷酸 (ODN),也是 Toll 样受体 9 (TLR9) 的激动剂。它含有未甲基化的 CpG 二核苷酸,可用作疫苗佐剂和免疫刺激剂。ODN 2395 钠盐可激活 B 细胞和浆细胞样树突状细胞 (pDC),诱导产生多种细胞因子,包括 I 型干扰素 (IFN-alpha) 和 IL-6。
生物活性&实验参考方法
靶点
TLR9
ODN 2395 sodium targets Toll‑like receptor 9 (TLR9), an endosomal pattern recognition receptor (PRR) that recognizes unmethylated CpG dinucleotides present in bacterial and viral DNA. TLR9 is expressed in B cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs). Upon binding to TLR9, ODN 2395 triggers the MyD88‑dependent signaling pathway, leading to activation of NF‑kappaB and IRF7. This results in the production of pro‑inflammatory cytokines (IL‑6, TNF‑alpha) and type I interferons (IFN‑alpha, IFN‑beta). ODN 2395 is a class C CpG ODN, which has properties of both class A (inducing high IFN‑alpha from pDCs) and class B (inducing strong B cell activation) CpG ODNs.
体外研究 (In Vitro)
ODN 2395钠是一种C类CpG寡核苷酸,也是一种TLR9激动剂。它能激活B细胞和浆细胞样树突状细胞(pDCs),进而诱导多种细胞因子的产生,包括I型干扰素(IFN-α)和IL-6。体外实验表明,ODN 2395(1-10 uM)可诱导人pDCs分泌IFN-α,并促进B细胞的增殖和分化。与其他免疫刺激剂联合使用时,它也是细胞因子/趋化因子表达的强效诱导剂。FITC标记的ODN 2395可用于通过共聚焦显微镜或流式细胞术评估CpG寡核苷酸的细胞摄取和定位。
体内研究 (In Vivo)
ODN 2395钠盐已在体内进行了免疫刺激和佐剂效应研究。在小鼠中,腹腔注射或皮下注射ODN 2395(50-200 ug/只)可诱导IFN-α、IL-6和TNF-α的产生,并促进Th1型免疫反应。在利什曼原虫感染模型中,CpG ODN 2395可增强肥胖和营养不良小鼠的免疫反应并清除寄生虫。ODN 2395还能促进肥胖和营养不良小鼠模型中针对利什曼原虫的免疫反应,提示其具有作为治疗药物的潜力。
酶活实验
采用纯化的重组人或小鼠TLR9蛋白,通过无细胞检测方法测定ODN 2395与TLR9的结合。采用荧光偏振(FP)或时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)检测。使用标记的CpG ODN(例如FITC标记的ODN 2395或荧光探针)作为示踪剂。加入不同浓度(0.1-10,000 nM)的未标记ODN 2395以竞争结合。测量FP或FRET信号的降低,并计算IC₅0或KD值。未报告具体的KD值。纯度≥98%(HPLC)。
细胞实验
在细胞实验中,将人外周血单核细胞 (PBMC)、分离的 B 细胞或表达 TLR9 的细胞系(例如 HEK-Blue hTLR9 细胞)接种于 96 孔板中(1-5 × 10⁵ 个细胞/孔)。加入浓度为 0.01-10 uM 的 ODN 2395。6-48 小时后,通过 ELISA 检测上清液中细胞因子(IFN-α、IL-6、TNF-α、IP-10)的产生。B 细胞增殖通过 [3H]-胸苷掺入或 CFSE 稀释法进行检测。pDC 的活化通过流式细胞术检测 CD86、CD40 和 HLA-DR 的表达进行评估。使用 FITC 标记的 ODN 2395 来测量细胞摄取:将细胞与标记的 ODN (1-10 uM) 孵育 1-24 小时,然后通过流式细胞术或共聚焦显微镜测量荧光。
动物实验
为了在体内评估免疫刺激活性,我们使用6-8周龄的雌性BALB/c或C57BL/6小鼠。ODN 2395钠以50-200 μg/只的剂量,通过腹腔注射(IP)或皮下注射(SC)给药,可单独给药或与抗原(例如OVA)联合给药。分别于注射后2、6、12和24小时采集血液,通过ELISA法检测血清细胞因子(IFN-α、IL-6、TNF-α)水平。同时,收集脾脏,通过流式细胞术分析免疫细胞活化情况(例如,树突状细胞上的CD86+、B细胞上的CD69+)。在疫苗研究中,小鼠分别于第0、14和28天进行免疫,并通过ELISA法检测抗原特异性抗体滴度(IgG、IgG1、IgG2a)。对于感染模型(例如,利什曼原虫),先感染小鼠,然后用 ODN 2395(50-100 ug/只小鼠,腹腔注射,3-5 次)进行治疗,并评估寄生虫负荷。
药代性质 (ADME/PK)
ODN 2395 钠盐是一种合成寡脱氧核苷酸(序列:5'‐tcgtcgttttcggcgc:gcgccg‐3',分子量约 7000 Da)。冻干粉末应密封保存于 -20℃ 或 -80℃,并防潮。体外实验中,可将 ODN 2395 配制成浓度为 1-10 mg/mL 的无菌水或 PBS 储备液,并于 -20℃ 或 -80℃ 保存,最长可达 1 年。避免反复冻融。体内实验中,应使用无菌 PBS 配制。目前尚未报道详细的药代动力学参数。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
目前尚无 ODN 2395 钠盐的具体毒性数据报道。作为一种强效免疫刺激剂,其毒性与高剂量下诱发不受控制的全身性炎症(细胞因子风暴)的风险相关。在临床前研究中,C57BL/6 小鼠接受高达 200 μg/只的剂量通常耐受良好,未出现严重不良反应。应遵循核酸操作的标准实验室安全预防措施。本品不可用于人体。
参考文献

[1]. Modulation of TLR9 response in a mouse model of herpes simplex virus encephalitis. Antiviral Res. 2012 Dec;96(3):414-21.

其他信息
ODN 2395 钠盐是一种研究级 C 类 CpG ODN。CpG ODN 根据其结构和活性分为 A、B、C 三种类型。A 类 CpG ODN(例如 ODN 2216)能强烈激活浆细胞样树突状细胞 (pDC) 产生 IFN-α,但对 B 细胞的激活作用较弱。B 类 CpG ODN(例如 ODN 1826、ODN 1668)能强烈激活 B 细胞,但 IFN-α 的产生量很少。C 类 CpG ODN(例如 ODN 2395)兼具 A、B 和 C 两类的特性,既能强烈诱导 pDC 产生 IFN-α,又能激活 B 细胞。ODN 2395 已被研究用作疫苗佐剂,并用于治疗传染病和癌症。使用钠盐形式是为了提高其溶解度和稳定性。该化合物仅供研究使用,尚未获得监管部门的批准。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子量
7519.00
外观&性状
Solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.1330 mL 0.6650 mL 1.3300 mL
5 mM 0.0266 mL 0.1330 mL 0.2660 mL
10 mM 0.0133 mL 0.0665 mL 0.1330 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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