| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
hSGLT2 25 nM (Ki) hSGLT1 25000 nM (Ki)
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| 体外研究 (In Vitro) |
人钠(+)-D-葡萄糖共转运蛋白(hSGLT)抑制剂是最新一类糖尿病药物,可阻断体内高达50%的肾脏葡萄糖重吸收。这些药物有可能在糖尿病流行中广泛使用,但它们在分子水平上的作用机制尚不清楚。在这里,我们使用电生理学方法来评估它们如何阻断人胚胎肾293T(HEK-293T)细胞中表达的Na(+)-D-葡萄糖共转运蛋白SGLT1和SGLT2,并将其与经典的SGLT抑制剂根皮苷进行比较。详细研究了两种结构类似物达格列净[(1S)-1,5,5-脱水-1-C-{4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基}-D-葡萄糖醇]以及根皮苷和达格列净的苷元。达格列净和氟代达格列净[(1S)-1,5-脱水-1-C-{4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基}-4F-4-脱氧-D-葡萄糖醇]阻断葡萄糖转运和葡萄糖偶联电流,对hSGLT2(K(i)=6 nM)的特异性约为hSGLT1(K(i)=400 nM)100倍。由于半乳糖是SGLT2的不良底物,令人惊讶的是,半乳糖-达格列嗪[(1S)-1,5-脱水-1-C-{4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基}-D-半乳糖醇]是hSGLT2选择性抑制剂,但对两种转运蛋白的效力都不如达格列嗪(hSGLT2-K(i)=25 nM,hSGLT1-K(i)=25000 nM)。Phlorizin和半乳糖-达格列嗪迅速从SGLT2中解离[半衰期(t(1/2,off))≈20-30s],而达格列嗪和氟代达格列嗪以10倍慢的速度从hSGLT2解离(t(3/2,off)≥180s)。Phlorizin不能与结合到hSGLT2的达格列嗪交换。相比之下,达格列净、氟代达格列净和半乳糖达格列净迅速从hSGLT1中解离(t(1/2,Off)=1-2秒),根皮苷很容易与结合到hSGLT-1的达格列净交换。根皮苷和达格列嗪的苷元对hSGLT2和hSGLT1的抑制作用较差,K(i)值>100μM。这些结果表明,抑制剂与SGLTs的结合由两种协同作用组成:糖与葡萄糖位点的结合不是刚性的,因此不同的糖会改变通路前庭中苷元的方向;苷元的结合影响整个抑制剂的结合亲和力。因此,药效团必须包括糖和苷元结构的变化[1]。
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| 酶活实验 |
放射性示踪剂测定[1]
如上所述,测量了表达hSGLT2或hSGLT1的COS-1细胞对α-甲基-d-吡喃葡萄糖苷(α-MDG)的摄取。在存在或不存在抑制剂的情况下,将细胞在37°C下在含有50μM[14C]α-MDG的钠缓冲液中孵育1-40分钟:100μM根皮苷和10 nM或1μM的每种hSGLT2抑制剂(达格列嗪、氟代达格列嗪或半乳糖达格列嗪)。摄取量表示为每微克总蛋白每分钟皮摩尔数,平均值±标准误差(图1)。[14C]α-MDG摄取在hSGLT2的15分钟和hSGLT1的2分钟内呈线性,因此抑制剂对初始摄取速率的影响在hSGLT2的10分钟和h西格LT1的1分钟内确定。 电生理实验 转染后2天,对HEK-293T细胞进行全细胞膜片钳记录。细胞外溶液含有(以mM计)150 NaCl、1 CaCl2、1 MgCl2、10 HEPES,pH 7.4(“Na+缓冲液”),或150氯化胆碱、1 CaCl2、1 MgCl2,pH 7.4,(“胆碱+”缓冲液)。对于37°C的实验,将甘露醇(100 mM)添加到外部溶液中,以降低噪声并提高全细胞记录的稳定性。移液管(内部)溶液含有(以mM计)145 CsCl、5 NaCl、11 EGTA和10 HEPES。膜电位保持在-60 mV。对于hSGLT2,所有实验均在37°C下进行,对于hSGL41,所有实验在37或22°C下完成。 抑制剂动力学[1] 我们对抑制剂与SGLTs相互作用的一般方法遵循了Oulianova等人之前用于研究根皮苷与兔肾刷状缘膜SGLTs结合的方法,但在这里,我们使用电生理测定来测量与特定人类SGLTs的结合。测量稳态葡萄糖诱导的hSGLT电流的抑制作用,作为外部抑制剂浓度的函数,以确定抑制常数Ki。如前所述,当葡萄糖浓度等于糖半最大抑制常数(K0.5)时,产生50%抑制作用的抑制剂浓度(IC50)是Ki的两倍。hSGLT2 d-葡萄糖K0.5在37°C时为5 mM,hSGLT1在37°C时为2 mM,在22°C下为0.5 mM。[1] 每个实验的顺序如下。电流由K0.5浓度的d-葡萄糖诱导。溶液改为d-葡萄糖加抑制剂。一旦达到新的稳态电流,用d-葡萄糖和无Na+(胆碱+)缓冲液洗涤细胞≥3分钟,以去除抑制剂。在多种抑制剂浓度下重复该方案以估算Ki。[1] 使用双电极电压钳对表达hSGLT1的非洲爪蟾卵母细胞进行了一些hSGLT1-半乳糖达格列净Ki测定,以尽量减少完成实验所需的抑制剂量。如前所述,进行卵母细胞分离、制备、注射和电生理方法 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
除达格列净外,目前关于其他hSGLT2抑制剂的已发表数据十分有限。仅有一项研究报道了达格列净和卡格列净的主要功能差异:尽管卡格列净的体外效力和特异性与达格列净非常相似(hSGLT2 Ki = 2 nM,hSGLT1 Ki = 1,000 nM),但要达到与达格列净相同的肾脏葡萄糖排泄效果,所需的卡格列净口服剂量显著高于达格列净。目前,仅凭hSGLT2与SGLT1的动力学特异性无法解释这种差异,因此必然存在其他药代动力学因素。[1]
总之,达格列净对hSGLT2的高亲和力源于其紧密结合,这体现在其与转运蛋白的解离速度异常缓慢,而这正是达格列净对hSGLT1和hSGLT2亲和力差异的生物物理基础。抑制剂的亲和力是糖基和糖苷配基结合位点之间协同作用的结果,糖基的改变会导致选择性出现显著差异。糖基部分在决定抑制剂特异性方面起着重要作用,并且可能对糖苷配基与糖通路残基相互作用的定位至关重要,此外,糖苷配基还会以我们尚未确定的方式影响抑制剂的相互作用。[1] |
| 分子式 |
C21H25CLO6
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|---|---|
| 分子量 |
408.87
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| 精确质量 |
408.133
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| CAS号 |
1408245-02-2
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| PubChem CID |
124583070
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
609.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
322.1±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.614
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| LogP |
4.42
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| tPSA |
99.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
472
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| 定义原子立体中心数目 |
5
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| SMILES |
CCOC1=CC=C(C=C1)CC2=C(C=CC(=C2)[C@H]3[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O3)CO)O)O)O)Cl
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| InChi Key |
JVHXJTBJCFBINQ-IFLJBQAJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H25ClO6/c1-2-27-15-6-3-12(4-7-15)9-14-10-13(5-8-16(14)22)21-20(26)19(25)18(24)17(11-23)28-21/h3-8,10,17-21,23-26H,2,9,11H2,1H3/t17-,18+,19+,20-,21+/m1/s1
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| 化学名 |
(2S,3R,4R,5R,6R)-2-[4-chloro-3-[(4-ethoxyphenyl)methyl]phenyl]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol
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| 别名 |
galacto-Dapagliflozin; 1408245-02-2; (1S)-1,5-anhydro-1-C-[4-chloro-3-[(4-ethoxyphenyl)methyl]phenyl]-D-galactitol; (2S,3R,4R,5R,6R)-2-[4-chloro-3-[(4-ethoxyphenyl)methyl]phenyl]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol; HY-137145; CS-0136767; (2S,3R,4R,5R,6R)-2-(4-Chloro-3-(4-ethoxybenzyl)phenyl)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4458 mL | 12.2288 mL | 24.4577 mL | |
| 5 mM | 0.4892 mL | 2.4458 mL | 4.8915 mL | |
| 10 mM | 0.2446 mL | 1.2229 mL | 2.4458 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。