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FTO-IN-12

别名: 4-Amino-8-chloroquinoline-3-carboxylic acid; FTO-IN-12; 955328-22-0; DTXSID60588692; RefChem:290051; DTXCID50539456; 4-amino-8-chloroquinoline-3-carboxylic acid,
目录号: V87440 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
FTO-IN-12（化合物 2）是一种脂肪质量和肥胖相关蛋白 (FTO) 抑制剂，Kd 和 IC50 值分别为 185 nM 和 1.46 μM。
FTO-IN-12 CAS号: 955328-22-0
产品类别: FTO
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
FTO-IN-12（化合物 2）是一种脂肪质量和肥胖相关蛋白 (FTO) 抑制剂，其 Kd 值和 IC50 值分别为 185 nM 和 1.46 μM。FTO-IN-12 可用于神经退行性疾病的研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
FTO (fat mass and obesity-associated protein, an RNA m6A demethylase) – Kd = 185 ± 77 nM; IC50 = 1.46 μM [1]
体外研究 (In Vitro)
化合物2抑制FTO去甲基酶活性，IC50为1.46 μM（在1 nM至100 μM浓度范围内测试）。[1]
化合物2直接与FTO蛋白结合，通过微量热泳动（MST）测定，解离常数Kd为185 ± 77 nM。实验使用未标记的滴定化合物2（0–10 μM）与Alexa647标记的His标签FTO（20 nM）相互作用。[1]
在原代小鼠中脑多巴胺神经元培养中，化合物2促进神经元存活并保护其免受生长因子剥夺诱导的凋亡。在10 nM、100 nM和1000 nM浓度下，化合物2剂量依赖性地增加TH阳性神经元数量。在100 nM和1000 nM浓度下观察到统计学显著的神经保护效果（p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001，单因素方差分析Dunnett事后检验）。效果与GDNF阳性对照（3 nM，100 ng/mL）相当。未观察到毒性迹象。[1]
化合物2还能保护多巴胺神经元免受6-OHDA诱导的神经细胞死亡（数据未显示）。[1]
在体外人工血脑屏障模型中，化合物2显示出良好的穿透能力，穿透率为31.7 ± 3.3%（定义为化合物在'脑'侧孔中的浓度与插入室中浓度的比值）。[1]
酶活实验
FTO去甲基酶抑制实验：酶活性测定方法参照Huang等人修改。反应在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，300 μM 2OG，280 μM (NH4)2Fe(SO4)2，2 mM L-抗坏血酸）中进行。反应混合物包含200 ng甲基化N6-腺嘌呤RNA探针（5′-CUUGUCAm6ACAGCAGA-3′）、10 nM FTO蛋白和不同浓度的配体（1 nM至100 μM）。反应在96孔板上室温孵育2小时。使用m6A RNA甲基化定量比色试剂盒测量m6A含量。抑制效果计算为与阴性对照（DMSO）相比m6A含量的增强程度，相对于阳性对照（最大抑制）和阴性对照之间的差异。[1]
微量热泳动结合实验：重组人FTO蛋白通过His标签使用标记试剂盒进行标记。标记的FTO蛋白（靶标）使用浓度为20 nM。使用未标记的滴定化合物2（0–10 μM）。测量在含10 mM磷酸钠缓冲液pH 7.4、1 mM MgCl2、3 mM KCl、150 mM NaCl、0.05% Tween-20的缓冲液中进行，使用红色LED光源（功率100%）和中等MST功率，温度25°C。数据分析使用MO.Affinity Analysis软件。每个数据点代表每个结合对n = 3次独立实验的平均结合分数±标准差。[1]
分子对接：使用FTO与5-羧基-8-羟基喹啉IOX1复合物的晶体结构（pdb:4IE4）。使用AutoDock 4.2进行对接研究。活性位点用80×80×80个格点、间距0.375 Å的网格盒包围。对接效率计算为DE = ΔG_dock / N，其中N是配体中非氢原子的数量。[1]
分子动力学模拟：使用Desmond模拟软件包。采用NPT系综，温度300 K，压力1 bar。每个系统进行5次10 ns的模拟运行，松弛时间1 ps。使用OPLS_2005力场参数。模拟显示化合物2的吡啶氮原子与FTO蛋白Arg96残基的铵基之间存在非常强的氢键。重要相互作用包括与Arg96、Glu234、Arg322和Asp233残基的氢键，以及额外的疏水相互作用。[1]
细胞实验
原代中脑多巴胺神经元培养：从13日龄NMRI小鼠胚胎的腹侧中脑组织解剖中脑底板。组织在0.5%胰蛋白酶/HBSS中37°C孵育20分钟，然后机械解离。细胞接种到多聚-L-鸟氨酸包被的96孔板上。多巴胺神经元在Dulbecco's MEM/Nut mix F12培养基中培养五天，添加N2血清补充剂、33 mM D-葡萄糖、0.5 mM L-谷氨酰胺和100 μg/mL Primocin。第6天，为剥夺生长因子，用正常培养基洗涤培养物三次，然后加入化合物。细胞与不同浓度的FTO抑制剂（10、100、1000 nM）一起培养五天。使用人重组GDNF（100 ng/mL）作为阳性对照。五天后，固定培养物并用抗酪氨酸羟化酶抗体染色。通过高内涵成像设备获取图像。使用图像分析软件计数免疫阳性神经元。结果表示为与GDNF维持的神经元相比的细胞存活百分比。[1]
药代性质 (ADME/PK)
血脑屏障穿透：在体外人工血脑屏障模型（小鼠内皮细胞bEnd3与小鼠HIFko星形胶质细胞在悬挂式细胞培养插入室中共培养）中，将化合物2（终浓度10 μM）加入到插入室（'血液'侧）。孵育1小时后，从插入室和孔（'脑'侧）取样。穿透率定义为孔中化合物浓度与插入室中浓度的比值。化合物2显示31.7 ± 3.3%的BBB穿透率。使用电喷雾离子源正离子化模式的LC-MS分析化合物浓度。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作者在神经元存活实验中指出"未观察到测试化合物的毒性迹象"。[1]
参考文献

[1]. Small-Molecule Inhibitors of the RNA M6A Demethylases FTO Potently Support the Survival of Dopamine Neurons. Int J Mol Sci. 2021 Apr 26;22(9):4537.
其他信息
化合物2是4-氨基-8-氯喹啉-3-羧酸（纯度>90%）。它通过使用已知FTO抑制剂作为模板对ZINC化合物库进行高通量虚拟筛选而鉴定。对接自由能ΔG为-7.70 kcal/mol，对接效率为0.51。这是首次证明FTO抑制剂可以支持多巴胺神经元存活并保护其免受生长因子剥夺诱导的体外凋亡。该化合物具有穿透血脑屏障的潜力，使其成为神经退行性疾病治疗中系统性给药的候选药物。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C10H7CLN2O2
分子量
222.63
精确质量
222.02
CAS号
955328-22-0
PubChem CID
17028176
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
密度
1.551g/cm3
沸点
440.5ºC at 760 mmHg
闪点
220.2ºC
折射率
1.746
LogP
2.749
tPSA
76.21
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
15
分子复杂度/Complexity
262
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1=CC2=C(C(=CN=C2C(=C1)Cl)C(=O)O)N
InChi Key
DMQKTDVVSMSBCL-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C10H7ClN2O2/c11-7-3-1-2-5-8(12)6(10(14)15)4-13-9(5)7/h1-4H,(H2,12,13)(H,14,15)
化学名
4-amino-8-chloroquinoline-3-carboxylic acid
别名
4-Amino-8-chloroquinoline-3-carboxylic acid; FTO-IN-12; 955328-22-0; DTXSID60588692; RefChem:290051; DTXCID50539456;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.4918 mL 22.4588 mL 44.9176 mL
5 mM 0.8984 mL 4.4918 mL 8.9835 mL
10 mM 0.4492 mL 2.2459 mL 4.4918 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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